特殊显微镜的使用

实验五、暗视野显微镜（darkfieldmicroscope）原理及使用暗视野显微镜darkfieldmicroscope聚光镜中央有挡光片，视野背景是黑的，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，物体边缘是亮的。可观察4~200nm的微粒子，分辨率比普通显微镜高50倍。暗视野显微镜特点根据Tyndall效应原理设计，在黑背景下观察物体的外部细节，分辨率高;该显微镜适用于观察细胞内微小颗粒，例如线粒体、细菌运动等。可以观察在普通明视场中看不见的标本。观察效果如同星空。注意事项载玻片、盖玻片都应洁净无痕，否则散射光增多而使背景发亮载玻片厚度应在1.1mm以内，否则光线将在载玻片内汇聚而达不到标本二、实验材料暗视野显微镜水绵菌液三、实验步骤制作水绵和细菌临时装片在低倍镜下找到要观察的物体转换到高倍镜下，调节细准焦旋钮使成像清晰换用暗场聚光器进行暗场观察绘出镜检标本图四、作业作业2：绘图示暗场显微镜下水绵形态结构和细菌形态实验六、相差显微镜原理及使用一、相差显微镜的原理人的眼睛只在光的波长(颜色)和振幅(亮度)变化时能观察到被检的物体，而活细胞或末经染色标本多为无色透明，当光波被通过时，其波长和振幅并没发生什么变化，所以无法辨认。为了观察活细胞的显微结构，就需要使用相差显微镜。相差显微镜把透过标本的可见光的光程差变成振幅差，从而提高了各种结构间的对比度，使各种结构变得清晰可见。在构造上，相差显微镜有不同于普通光学显微镜两个特殊之处。相差显微镜与普通显微镜主要不同之处1）相差聚光镜：聚光镜和环状光栏构成，使光成筒状射向标本；2）相差物镜：带相板(phaseplate)的物镜(ph)，推迟直射光和衍射光的相位，使亮度改变。3）对中目镜：4）绿色滤片：这些特殊装置能将活细胞或未经染色的标本中各部分的折射率或厚度的微小差异转变为相位差，然后利用光的衍射和干涉的原理，把相差变成振幅(明暗)之差，使人的肉眼能够辨认出来。相相差差附附件件二、实验材料和仪器相差显微镜水绵和细菌悬液三、实验步骤制作水绵和细菌临时装片将转盘聚光器的标示孔指到“0”(即明视野)在低倍镜下找到要观察的物体，并把观察的目的物移到视野的中央换上相应的环状光栏，例如l0X相差物镜用l0X标示孔的光栏，并充分开大孔径光栏。进行中心调节（合轴调节或对中调节）拨出目镜，插入中心望远镜，一边看望远镜，一边用手转动望远镜内筒使其升降，直至看到环状光栏的亮环和相板的黑环。此时将望远镜固定，转动聚光器两侧的调节钮，使两环完全重合。若亮环和黑环大小不一致，可升降聚光器使之一致，如升降聚光器仍不能使其一致，那就是载、盖玻片过厚的缘故。进行相差显微观察转换物镜，要同时更换相对应的环状光栏，并重新合轴更换标本后，要重新进行合轴调节四、作业作业2：比较普通光学显微镜、暗场显微镜和相差显微镜下观察到的图像有什么不同？实验七、荧光显微镜原理及使用一、荧光显微镜原理荧光显微镜是用以观察细胞及组织内荧光物质的分布的一种显微装置。它是装有能产生紫外线（短波长）的光源及系列滤片装置的显微镜。能用于如免疫荧光观察、基因定位、疾病诊断；物体构造的观察、荧光的有无、对色调比较进行物质判别，还可测定荧光的强弱，进行物质的定量分析。荧光显微镜Fluorescencemicroscope特点：光源为短波光有两个特殊的滤光片照明方式通常为落射式优点：检出能力高对细胞的刺激小能进行多重染色二、荧光显微镜的使用启动高压汞灯，10分钟后可以观察。先关闭阻挡板，将要观察的荧光染色标本放到载物台上，首先在10倍普通光源下找到目标物；拉开阻挡板，转动滤色镜转换手轮将所需的滤色镜转入光路；调节粗调和细调对焦，直到清晰地观察到荧光图象为止。三、注意事项：开启后10min达到最大的效率，汞灯点亮15min内不要关灯，一旦关灯需等15min后才能重新开启荧光镜检最好在暗室或半暗室中进行摄影时曝光时间需要比一般的显微镜摄影时间加长数倍，并遮去紫外线的干扰尽量观察新鲜处理的标本，其荧光强度较强四、作业作业1材料自然色荧光色水绵叶绿体花粉壁维生素A维生素B6棉线头发人血细胞人口腔黏膜上皮细胞