兽药残留分析方法概述报告

兽药残留分析方法概述报告报告人:单吉浩报告内容兽药残留分析方法的特点方法建立步骤前处理方法发展与展望兽药残留分析方法的特点1、待测物浓度低，浓度波动范围大多数为ug/kg_mg/kg甚至更低的水平浓度变化范围达1：1000以上2、样品基质复杂，干扰物质多生物材料种属器官药物自身代谢动物日粮环境污染3、以各种仪器分析方法为主方法建立步骤-分析原理原理：1）——分离一般占整个过程的90%以上（1）1个提取步骤—将待测物从样品中释放进入溶液状态（2）1-3个净化步骤；—除去部分干扰杂质（3）1个分离步骤（分辨）—仪器在线分离过程2）——检测紫外可见（UV/Vis)、红外（IR）、荧光（Fluor）、核磁共振（NMR）、质谱（MS）等方法建立步骤-分析原理采样与样品制备（样品预处理）提取净化浓缩衍生化分辨检测方法建立步骤1、文献检索——获得某些信息或启示——站在巨人的肩膀上——了解待测物的理化性质（极性、溶解性、酸碱性、稳定性、熔点或蒸汽压、波谱学性质等）体内过程（代谢物、组织分布、排泄途径和药动学性质）药理毒学（理残留毒性、MRLs、WTD）专业期刊：《分析化学》、《色谱》等国内外丛书或手册药典方法建立步骤2、建立测定方法紫外可见（UV/Vis)、红外（IR）、荧光（Fluor）、核磁共振（NMR）、质谱（MS）等3、建立样品处理方法——最为重要的步骤提取、净化、浓缩、衍生化4、标准曲线（定量手段）外标法内标法（质谱一般用待测物的稳定同位素标记物）方法建立步骤5、稳定性试验标准溶液样品温度、时间、环境6、分析方法的评价——标准添加样品进行至少3个浓度（10MRL、1MRL、0.1MRL）每个浓度4次重复方法建立步骤6、分析方法的评价（1）精密度（precision)RSD，（变异系数CV）重复性：批内精密度、批间精密度重现性：不同试验条件下（实验室、人员、仪器、试剂等）独立测定值之间-与待测物浓度有关（参见相关部门规定范围）精密度的要求：待测物浓度(mg/kg)批内批间1001.52.310711111160.117260.0121320.00130450.00014364方法建立步骤（2）准确度（accuracy)通常采用添加回收率来表示浓度（ug/kg)允许范围（%）小于150-1201-1060-12010-10070-110大于10080-110方法建立步骤6、分析方法的评价（3）检测限与定量限检测限:LOD（limitofdetection)一般LOD≤0.1MRLLOD=B+3SD不作定量可靠性要求（精密度、回收率等）定量限：LOQ（limitofquantitation)一般LOD≤0.2MRLLOD=B+10SD一般CV≤20%，回收率≥70%方法建立步骤6、分析方法的评价（4）线性范围R≥0.9900，R2（5）选择性内源性物质的干扰代谢物的干扰其他药物的干扰（6）与参比方法的分析结果比较（7）实验室协同研究（collaborativestudy)-实际样品、添加样品-一般3个实验室，影响方法至少8个-考虑地域、气候、部门、行业等7、分析方法报告8、分析质量监控前处理方法的建立1、概述目的：分离-检测基本内容：提取、净化、浓缩、衍生化2、样品预处理采集制备贮存前处理方法的建立3、提取方法1）样品种类尿液、血浆、胆汁、奶、蛋、动物组织（肉、肝、肾等）2）提取溶剂-相似相溶原则-一般采用乙腈、甲醇和丙酮等水溶性溶剂-混合溶剂，增加选择性前处理方法的建立3）提取方法-组织捣碎法（homogenization)-振荡法(shaking)-索氏提取法(Soxhletextraction)-超声波辅助提取（SAE）-超临界流体萃取（SFE）-强化溶剂萃取（ASE）-微波辅助萃取（MAE）-消解法：酸消解、碱消解、酶消解-其他技术：冷冻干燥、制备干混物、起泡分离前处理方法的建立4、净化方法1）液液萃取LLE2）固相萃取SPE3）固相微萃取（SPME）4）制备色谱法（HPLC、TLC）5）凝胶渗透色谱法（GPC）6）吹扫-捕集（P&T）7）膜分离技术8）浸透限制固定相（RAS）9）基质固相分散技术（MSPD）10）免疫亲和柱（IAC）11）分子印迹技术（MIPs)12)其他技术前处理方法的建立5、浓缩与富集-旋转蒸发浓缩-气流吹蒸法-浓缩器浓缩-真空离心浓缩浓缩过程组分最容易损失前处理方法的建立6、衍生化-反应速度快-容易重复-定量完全、转化率稳定-产物易纯化-产物易于分离和检测-GC衍生化方法-HPLC衍生化方法-衍生化方式：柱前、柱后、固相衍生化、光化学衍生化