育种学课件

蛋白质电泳测种子纯度1、种子纯度鉴定方法2、蛋白质电泳原理3、PAGE和SDS-PAGE测种子纯度1、种子纯度鉴定方法1.1常规鉴定方法：田间小区种植鉴定；物理化学快速鉴别法；幼苗鉴别鉴定法；形态鉴定法。1.2生理生化鉴定法：蛋白质电泳鉴定法；DNA标记鉴定法（包括RFLP、RAPD、AFLP、SSR等）。1.1常规鉴定方法1.1.1田间小区种植鉴定：田间小区种植鉴定是鉴定品种真实性和测定品种纯度最为可靠、准确的方法，比较接近生产实际。但所需周期长，成本高。而且许多性状表现常常受栽培措施及环境因子的影响。1.1.2物理化学快速鉴别法：根据种子在某些特殊的化学试剂或其它特殊条件下,产生特定的反应,鉴定品种的纯度。此方法快速、简便,但因特异反应很有限,应用范围受到很大限制。只能适用某些作物种子。1.1常规鉴定方法1.1常规鉴定方法1.1.3形态鉴定法：根据种子形态特征，逐粒观察,同标准样品或鉴定图片等比较。该方法最为简便、快速、经济,但对品种间形态差异较小的品种和杂交种中混有的自交系很难区分。1.1常规鉴定方法1.1.4幼苗鉴别法：幼苗鉴别可通过两个主要途径:一种是提供给植株加速发育的条件,当幼苗达到适宜评价的发育阶段时,对幼苗进行鉴定:另一种途径是让植株生长在特殊的逆境条件下,测定不同品种对逆境的不同反应来鉴别不同品种。只能用于品种间有差异样品的鉴定。1.2生理生化鉴定法利用电泳技术,在分子水平上对具有不同遗传特性的种子予以鉴别。这些方法直接测定的是蛋白质或DNA,准确性高，周期短，鉴定成本也较低。包括：DNA标记鉴定法；蛋白质电泳鉴定法1.2.1DNA标记鉴定法:RFLP、RADP、AFLP、SSR等RFLP检验的准确性高,重复性好这种方法需要的设备昂贵,成本高,操作技术难度大,周期长,需要的DNA纯度高,且常使用放射性物质,危险性大,应用推广受到很大限制。RAPD：优点:操作简单,周期短,成本较低,对DNA的纯度显示不高,RAPD引物通用性。但有结果不稳定,重复性差,各实验室结果没有可比性等缺陷。1.2.1DNA标记鉴定法AFLP：RFLP和PCR两种技术,重复性好,多态性极高,探测位点多的优点；技术要求高,设备昂贵,在纯度鉴定应用上受到很大限制。SSR：它最早是用于测定DNA序列的研究上。用RFLP探针两端重复序列合成特异性引物,再进行PCR,扩增多态性DNA片段,将繁琐的RELP分析转换成了简单的PCR反应，操作难度较低,但由于它需要先知道DNA序列,在实际应用中受到很大限制。1.2.1DNA标记鉴定法电泳时，带电荷的蛋白质分子在电场中向相反电荷的电极移动，因分子大小的不同，蛋白质所带的净电荷密度不同，因此在电场中的移动速度也不同，故不同蛋白质在电泳时彼此可以分开。2、蛋白质电泳原理2.1蛋白质电泳技术分类2.1.1按支持介质的不同分类：纸电泳；醋酸纤维素薄膜电泳；琼脂糖凝胶电泳；聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）；SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）2.1.2按支持介质形状不同分为：薄层电泳；板电泳（垂直和水平）；柱电泳；U型2.1.3按缓冲液系统组成：连续和不连续缓冲系统；解离和非解离缓冲系统水平电泳2.2影响蛋白质泳动速率的因素•外部因素：1、电场强度2、缓冲液PH（决定蛋白质电荷）3、缓冲液离子强度（蛋白电动势）4、其他•蛋白质性质1、电荷2、分子大小3、分子形状（球状纤维状）垂直板电泳3、蛋白质电泳鉴定种子纯度原理：根据蛋白质合成的中心法则说明了有什么样的遗传基因（DNA），就有其特征的蛋白质，因而，种子蛋白质可以作为种子遗传基因的标志，能反映种间遗传组成的差异。两种蛋白：贮藏蛋白和同工酶3.1聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）•原理：是根据被分离物质所带的电荷多少及其分子大小、形状的不同，在电厂的作用下，产生不同的移动速度而分离的方法。它具有电泳和分子筛的双重作用。•聚丙烯酰胺凝胶，是由丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺在催化剂的作用下，通过自由基引发聚合反应，形成不带电荷、且具有分子筛性质的网状结构凝胶。通常聚丙稀酰胺凝胶电泳包括：PAGE（非变性）、SDS-PAGE（变性）4个杂交稻盐溶液SDS-PAGE图谱B-保持系A-不育系R-恢复系F1-杂种4、SDS-PAGE测种子纯度的操作方法4.1试剂及贮液的制备4.2蛋白质样品的处理4.3SDS-PAGE电泳操作方法4.4图谱解析4.1试剂及贮藏液的配制样品提取液凝胶贮备液SDS溶液配胶善舞红袖传飞鸿莫言深闺空寂寞转彩流光纳美景描形绘影画缤纷山河日月总成对一句悠然尘世间黑白纵横三千里经天纬地一点通与君弹做天籁曲行遍天涯谁知音点滴皆为天作物千杯品来都是香博览群书是为智学若烟海化入囊试问天下谁英雄七尺清锋仰天笑