实验6_小篮子法测定种子呼吸速率

实验六环境温度对种子呼吸速率的影响（p165－166）小篮子法测定种子呼吸速率•呼吸速率是植物生命活动最重要的指标之一。测定呼吸速率的方法很多，可以分成两大类：测定吸氧速率或者测定放出CO2速率。前者有测压法、氧电极法；后者有小篮子法、红外线CO2气体分析仪（IRGA）等方法。•测压法、氧电极法是测定植物呼吸过程对O2的吸收，样品用量少，且精确度高。利用红外线CO2气体分析仪测定植物呼吸速率比较快速、准确，是科研上常采用的方法。呼吸速率的测定方法1.实验目的1）学习呼吸强度的碱吸收测定方法；2）了解环境因素（如温度）对呼吸强度的影响。2.实验原理（小篮子法）•植物进行呼吸时放出CO2，计算一定的植物样品在单位时间内放出CO2的数量，即为该样品呼吸速率。•呼吸放出的CO2可用氢氧化钡溶液吸收，实验结束后用已知浓度的草酸溶液滴定剩余的碱液，从空白和样品二者消耗草酸溶液之差即可计算出呼吸过程中释放的CO2的量。•Ba(OH)2+CO2→BaCO3↓+H2O•Ba(OH)2（剩余）+H2C2O4→BaC2O4↓+2H2O•每毫升1／44mol/l的草酸相当于1mgCO23.材料和仪器设备1）材料：发芽的小麦种子和煮死的小麦种子2）仪器设备：呼吸测定装置（小篮子）；电子天平；酸式及碱式滴定管。3）试剂：饱和Ba(OH)2溶液1／44mol/l草酸溶液酚酞指示剂4.实验步骤1）取500ml广口瓶4个，标记为0、1、2、3号，瓶口用橡皮塞塞紧，瓶塞下面挂一铁丝小篮，以便装植物样品，整个装置即谓“广口瓶呼吸测定装置”。Ba(OH)2溶液2）称取20g死种子，放入其中的一个小篮子中；再称取3份活种子，每份20g，分别放入另外3个小篮子中；3）分别在4个广口瓶中准确加入20ml饱和Ba(OH)2溶液；4）将3个放有活种子的小篮子分别挂在编号为1－3的广口瓶内，盖紧瓶塞，在低温（1号，冰箱冷藏室）、室温（2号）和高温（3号，40°C）中处理，经常摇动，以破坏碱液表面的硬膜；5）将放有死种子的小篮子挂在0号广口瓶内，在室温中按以上步骤处理；6）20min后，取出广口瓶中的小篮子，加入1－2滴酚酞指示剂，盖紧瓶盖；7）用草酸滴定广口瓶中的碱液至红色刚好消失为止，记录空白及各个温度处理下的草酸用量（记为V0、V1、V2、V3）；编号0123种子（10g）死种子活种子活种子活种子温度室温低温4°C室温高温40°CBa(OH)220ml反应时间20min草酸体积V0V1V2V3实验处理情况列表5.数据记录与处理处理空白滴定草酸用量（ml）处理滴定草酸用量（ml）空白与处理草酸用量差值（ml）呼吸速率（mgCO2·g－1fw·h－1）低温室温高温结果计算与分析呼吸速率v（mgCO2·g－1fw.·h－1）：上式中，V0：空白滴定用去的草酸量（ml）Vn：处理滴定用去的草酸量（ml）v=（V0-Vn）X草酸浓度XCO2分子量种子质量（g）X反应时间（h）=（V0-Vn）XX4410X0.3X（V0-Vn）=4416020注意事项•防止口中呼出的气体进入广口瓶！•滴定时使用有孔的盖子，通过小孔进行滴定！思考题•本实验中哪些操作步骤对结果影响较大？实验七种子活力的测定（p215－218）