方法对比及偏差评估的方法-付红伟

方法对比及偏差评估的方法---介绍NCCLS文件EP9-A2报告人：付红伟医大总医院医学检验科2016.07.27NCCLS(美国临床实验室标准化委员会）NCCLS是一个国际性、多学科、非盈利、制定标准、教育型组织，在临床检验界内促进标准和指南的使用和发展。NCCLS制定标准的原则是从质量效益和成本效益两方面考虑，为患者检验和临床检验组织服务。大多数NCCLS文件有“建议”和“批准”两个层次的认同过程。建议：作为NCCLS的建议标准或指南处在被临床检验界评审的第一阶段，此文件需接受广泛、全面的技术审核，包括对范围、方法、用途及技术和编写内容的逐行逐字的审核。批准：批准的标准或指南已在临床检验界得到认同。应审核并评价最终文件的有效性，确保达到认同。2EP9-A2文件内容3NCCLS文件EP9-A2（用患者标本进行方法比对及偏倚评估；批准指南-第二版）是为实验室人员和生产厂商制定的。它叙述了测定两种方法之间相对偏倚的程序，也叙述了采用一分为二的患者样本设计方法比对试验时所需要考虑的因素。方法学比对具体流程41仪器熟悉阶段2.质量控制分析3方法比对试验3.1实验样本的选择3.2实验样本的测定4初步数据检查4.1方法内双份数据的离群值检验4.2数据作图4.3线性相关的目测检查4.4方法间离群值的目测检查4.5X值合适范围的检验5线性回归5.1计算5.2分散均匀性的目测检查6计算预期偏倚及其可信区间6.1线性回归法（当数据通过合适范围及均匀离散度检查时）6.2当数据未通过合适范围及均匀离散度检查时，使用分部偏倚法6.3当数据有不恒定（可变的）精密度时，用分部残差计算预期偏倚7结果解释以及内部性能标准比较5工作组建议在至少5个工作日内最少要分析完40个患者样本。增加测定样本数及测定天数，可以提高实验的可靠性及有效性。应尽可能使至少50％样本的测定结果处于实验室的参考区间之外。如果从一个患者得不到所需的样本量，可以将两个（但不能多于两个）病史相同，被测物浓度也大致相近的患者标本混合使用，成为“微混合样本”。3.1实验样本的选择6分别用两种方法对待测标本进行双份重复测定。指定第一次测定顺序，按反向顺序检测第二次（双份）。即：样品可以按下述顺序进行，1、2、3、4、5、6、7、8和8、7、6、5、4、3、2、1。对于全部标本，均应在两小时内测定完毕。如果可能，最好使用测定当天的标本。如果使用储存标本，储存方式必须能确保样本的稳定性，以满足参比方法和待评方法的要求。3.2实验样本的测定74初步数据检查4.1方法内双份数据的离群值检验计算每个方法双份测定的差值绝对值的均值，取各方法的平均绝对差值的四倍作为每个方法的“可接受”限如果删除的数据超出一个，则需扩大调查范围，查找出现偏差的原因。如果能够找到问题所在并能追踪到引起偏差的样品，则应替换这些样品，且将问题记录在案。判断有4.2数据作图8y=1.0722x+5.3001R²=0.9954050100150200250300350400450050100150200250300350400450Hitachi7170Cobas7600ALT比对试验回归曲线图1：重复检测均值散点图（试验方法均值对比较方法均值）4.3线性相关目测检测4.4方法间离群值目测检测94.2数据作图4.4方法间离群值目测检测图2：均值差异与二种方法的均值的偏倚图（试验方法均值—比较方法均值）对（试验方法均值+比较方法均值）/25.2分散均匀性的目测检查一般情况下，如果r≥0.975（或r2≥0.95），则可认为X值取值范围合适。如果根据测定数据算出的r能满足上述要求，则可认为X的误差已被数据范围所抵消。这时就可用简单的直线回归来估计斜率和截距。如果r2≤0.95，则必须分析更多的样品以扩大数据浓度分布范围，然后再重新分析全部数据。如果X的取值范围无法扩大，则可采用6.2节中描述的分部偏倚法代替回归方法来评价平均偏倚。104.2X值合适范围的检验115线性回归分析平均Y对平均X值斜率b和截距a的计算公式如下：可用以下方程表示：其中：6计算预期偏倚及其可信区间6.1线性回归法（当数据通过适合范围和均匀离散度的检查）12在给定的医学决定水平Xc处的预期偏倚（Bc）的估计值，按以下公式计算：Bc的95%可信区间（在Xc处的真正偏倚）按以下公式计算：6.2当数据未通过适合范围检查时，使用分部个别差异法计算平均偏倚（分部偏倚法）6.3当数据有非恒定精密度时，用分部残差计算预期偏倚（分部残差法）136计算预期偏倚及其可信区间7.结果的解释以及与内部性能标准的比较根据数据的检查结果，使用简单的线性回归方法估计在医学决定水平处的预期偏倚的可信区间。然后把此评价结果与厂家声明或内部标准进行比较以判断方法是否可以接受（CLIA88/2)。如果两种方法不相当，但仍相信候选方法更特异，则不要拒绝新方法，在常规应用前收集新的临床数据（如建立新的参考范围）。应注意实验室要建立两种方法之间的允许差异的标准。14实例分析-115y=1.0722x+5.3001R²=0.99540501001502002503003504004500100200300400500Hitachi7170Cobas7600ALT比对试验回归曲线结论：两种仪器间ALT测试结果有显著差异，不符合CLIA88要求，应及时进行校正工作。y=0.9668x+0.7816R²=0.9972050100150200250300050100150200250300VITROS250VITROS5600ALT比对试验回归曲线R2=0.9970.95，X分布范围合适预期偏差评估医学决定值预期偏差相对偏差CLIA88/250.61112.22%±10%40-0.579-1.45%100-2.619-2.62%R2=0.9950.95，X分布范围合适预期偏差评估医学决定值预期偏差相对偏差CLIA88/255.66113.20%±10%408.1820.45%10012.1512.15%结论：两种仪器间ALT测试结果无统计学差异，除低值区域外偏差均符合CLIA88要求，在可接受范围内。实例分析-216y=0.9685x+4.3487R²=0.8894126128130132134136138140142144146125130135140145150VITROS250VITROS5600Na比对试验回归曲线R2=0.8890.95，应扩大样本量，增加X分布宽度后再行比对预期偏差评估医学决定值预期偏差相对偏差CLIA88/2136-0.0040.00%±2mmol/L145-0.292-0.20%y=0.7792x+26.6R²=0.6648128130132134136138140142144146130135140145150155VITROS5600Cobas7600Na比对实验回归曲线R2=0.66480.95，应扩大样本量，增加X分布宽度后再行比对预期偏差评估医学决定值预期偏差相对偏差CLIA88/2136-3.42-2.52%±2mmol/L145-5.416-3.74%结论：两种仪器间Na测试结果有显著差异，偏差不符合CLIA88要求，应及时进行校准工作。连续5天双份重复测定40份样本方法内离群点的排除数据作图线性回归R2=0.95与否预期偏差评估比对实验--小结17方法间离群点排除分散均匀性目测检查试剂性能指标评价准确度验证精密度验证线性范围验证参考范围制定干扰实验验证18准确度验证—回收实验准确度评估资料是评价检测系统有效性的重要依据。定量检测方法的回收实验是评估准确度的方法之一，用于评估定量检测方法准确测定加入纯分析物的能力，结果用回收率表示。1910斤苹果2斤苹果20回收实验具体步骤回收实验数据处理及结果报告21实例分析-122基础样本基础样本+C.fas基础样本+高值质控项目第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值第一次第二次第三次均值TP68706868.6773737373.0073727573.33ALB42444242.6747474546.3346464746.33GLO26262626.0026262826.6727262827.00ALT18191818.3328282828.0030313130.67AST21212020.6732323131.6737363636.33ALP102103102102.33125125126125.33124123125124.00GGT16171716.6727272827.3340414140.67LDH155156156155.67183181182182.00184185186185.00测定浓度加入浓度回收浓度回收率基本样本分析样本1分析样本2•样本制备：基本样本：自制基质血清0.9mL+超纯净水0.1mL分析样本1：自制基质血清0.9mL+C.FAS定标液0.1mL分析样本2：自制基质血清0.9mL+高值指控血清0.1mL•分别对上述三种样本连续测定三次求均值，并将数值填入下述表格23生化分析仪准确度验证试验项目：血糖GLU单位：mmol/L验证方法：回收实验仪器Roche7600试剂批号658081标准液批号161454操作者付红伟审核者王倩测定浓度加入浓度回收浓度回收率%基础样本4.67分析样本15.971.111.30117.12分析样本26.231.501.56104.00平均回收率%110.56比例系统误差%10.56TEa/25%可接受性判断：比例系统误差大于CLIA88允许总误差的1/2日期：2012-08-06生化分析仪准确度验证试验项目：谷丙转氨酶ALT单位：U/L验证方法：回收实验仪器Roche7600试剂批号660856标准液批号161454操作者付红伟审核者王倩测定浓度加入浓度回收浓度回收率%基础样本18.33分析样本1288.679.67111.53分析样本230.6711.712.34105.47平均回收率%108.50比例系统误差%8.50TEa/210%可接受性判断：比例系统误差小于CLIA88允许总误差的1/2验证日期：2012-08-06结果报告精密度验证—参考EP5-A文件批内精密度评估对低值质控血清同一天内连续测定20次，排除离散点后求其均值、SD及CV值与试剂说明书比较，看与试剂盒标注的批内精密度是否一致；24项目第1次第2次第3次-----第19次第20次均值标准差SD95%置信区间CV%厂商声称CV%结论TP666666-----656666.100.790.590.991.190.50精密度欠佳ALB485050-----494950.101.170.871.462.330.90精密度欠佳ALT414141-----403940.600.820.621.032.022.90精密度良好AST686968-----696967.900.790.590.991.162.10精密度良好ALP868686-----858686.350.990.741.241.140.70精密度欠佳GGT444444-----434343.150.670.500.841.550.50精密度欠佳LDH165162164-----163162162.601.230.921.540.761.30精密度良好TBIL23.520.220.6-----20.420.420.590.730.550.923.573.10精密度良好DBIL14.414.214.6-----1414.214.190.380.290.482.700.85精密度欠佳批间精密度验证25方法：参考EP5-A文件，对质控血清连续测定5日，每日测定2批次，每批次重复测定8次，得到80个数据，排除离散点后，求其均值、SD及CV值与试剂说明书比较，看与试剂盒标注的批间精密度是否一致；项目日期/批次批1-1批1-2批1-8批2-1批2-2批2-7批2-8均值标准差SD95%置信区