专题2___细胞工程[1].2.1.植物细胞工程的基本技术ppt

专题2细胞工程指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品的一门综合科学技术。细胞工程应用的原理和方法研究的水平研究的目的细胞生物学和分子生物学细胞整体水平或细胞器水平按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品概念分类植物细胞工程动物细胞工程2.1植物细胞工程2.1.1植物细胞工程的基本技术植物组织培养技术植物体细胞杂交技术定义：生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能的特性。原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。受精卵生殖细胞体细胞＞＞大小植物组织培养技术植物细胞的全能性理论基础——思考讨论：为什么体内细胞没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官？基因在特定空间和时间条件下选择性表达的结果。在个体发育的不同时期，生物体不同部位的细胞表达的基因是不同的，合成的蛋白质也不一样，从而形成了不同的组织和器官。科学研究表明，处于离体状态的植物活细胞，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可能表现出全能性，发育成完整的植株。人工条件下实现的这一过程，就是植物组织培养。植物组织培养必要条件：关键词：外植体、脱分化、再分化、愈伤组织细胞离体、一定的营养物质、激素和其他外界条件离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根芽植物体脱分化再分化•外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官•1）外植体灭菌消毒（根尖、茎、芽、嫩叶、种子、花粉等）•2）用消毒过的器械将外植体置于培养皿上•3）切取所需的外植体•4）将外植体接种于培养容器的培养基上整个实验在超净工作台上进行，保持无菌操作！几个概念：•愈伤组织：离体的植物器官、组织或细胞，在培养一段时间以后，通过细胞分裂，形成一种高度液泡化、无定形状态薄壁细胞团。脱分化让已经分化的细胞，经过诱导后，失去其特有的结构和功能而转变成未分化细胞的过程，称为植物细胞的脱分化。再分化脱分化产生的愈伤组织继续进行培养又可以重新分化成根或芽等器官，这一过程称为植物细胞的再分化。分化：个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构和生理功能上发生稳定性差异的过程。植物组织培养的培养基（MS培养基）成分：无机营养成分：大量元素及部分微量元素有机营养成分：①含N物质：包括维生素和氨基酸②碳源：2%—5%的蔗糖③琼脂：起支持作用④植物激素：生长素，细胞分裂素（启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素）PH值：5.0－6.0培养基中必须含有植物生长发育所需要的全部营养物质，其中生长素和细胞分裂素用量的比例对器官的发生起决定作用。•生长素用量比细胞分裂素含量：比值高时：有利于根的分化，抑制芽的形成比值低时：有利于芽的分化，抑制根的形成比值适中时：有利于愈伤组织的形成。试管苗大规模培养离体的植物器官、组织或细胞愈伤组织根、芽植物体外植体脱分化植物激素：细胞分裂素、生长素再分化植物组织培养植物组织培养条件：离体，含有一定营养成分、激素，一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适时光照等。菊花：每日光照12小时；胡萝卜：避光培养讨论题P35•1.在组织培养实验中，为什么要强调所用器械的灭菌和实验人员的无菌操作？提示：植物组织培养中用到的培养基含有丰富的营养成分，有利于培养物的生长，然而各种杂菌同样也可以在上面迅速生长，所以植物组织培养过程中污染现象经常发生。培养基一旦被污染，迅速生长的各种杂菌不但会和培养物争夺营养，而且这些杂菌生长的过程中会生成大量对培养物有害的物质，导致培养物迅速死亡。造成培养基污染的因素有很多，一般包括：外植体带菌、培养瓶和各种器械灭菌不彻底、操作人员操作不规范等。所以在组织培养实验中用到的植物材料和各种器械都要进行彻底地灭菌，实验人员操作一定要规范，避免带入杂菌。•2.在本实验中，切取胡萝卜块根时强调要切取含有形成层部分，原因是这部分容易诱导形成愈伤组织。请思考一下，胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花），是否也能培养成小植株，你能用实验的方法进行验证吗？提示：胡萝卜的其他部分（如茎、叶、花）也能培养再生形成小植株，只是诱导愈伤组织比较困难。3.请根据上面的实验过程，概括出植物组织培养技术的流程简图。3.请根据上面的实验过程，概括出植物组织培养技术的流程简图。植物体细胞杂交技术1、定义：用两个来自不同植物的体细胞融合成一个杂种细胞，且把杂种细胞培育成新的植物体的方法。2、优势：（与有性杂交方法比较）打破了不同种生物间的生殖隔离限制去壁去壁纤维素酶果胶酶原生质体植物细胞原生质体融合离心、振动、电刺激聚乙二醇（PEG）再生细胞壁杂种细胞去分化愈伤组织杂种植株再分化植物体细胞杂交过程示意图细胞膜的流动性思考与探究•1.为什么“番茄—马铃薯”超级杂种植株没有如科学家所想像的那样，地上长番茄、地下结马铃薯？马铃薯—番茄没有像人们预想的那样地上长番茄、地下结马铃薯，主要原因是：生物基因的表达不是孤立的，它们之间是相互调控、相互影响的，所以马铃薯—番茄杂交植株的细胞中虽然具备两个物种的遗传物质，但这些遗传物质的表达受到相互干扰，不能再像马铃薯或番茄植株中的遗传物质一样有序表达，杂交植株不能地上长番茄、地下结马铃薯就是很自然的了。制备原生质体：酶解法去掉细胞壁诱导融合新的原生质体生出细胞壁杂种细胞组织培养杂种植株意义：克服远缘杂交不亲和的障碍、培育新品种筛选（同时具有两个物种的遗传性）•提示：根据眼虫的特点，动物细胞和植物细胞之间在理论上是可以实现杂交的。具体的实验方案可以设计如下：•