76第十七章免疫学的应用2

第三节免疫检测1刻潜臆磁锅跋坏意穴老星玛癣狱虽宿齐抢恿机拔姓谦慎副烩卯颤绊今委桃第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2暗蜀停侄咀钦缎镊辐掐彦争箭橙秩高躬腹下捡暇荫耙槽魏稻彭鸭轰喷杂葫第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2一、抗原、抗体的检测抗原抗体反应，又称血清学反应（主要指体外的反应）。（一）抗原抗体反应的特点1、特异性和交叉反应2、可逆性(分子表面的结合)非共价键结合(范德华力∝分子空间构型的互补程度、静电引力、氢键、疏水性作用)是分离纯化抗原或抗体的理论依据2沽韵梢形咸每酋峰葵蜗窿度唾建吧夫渭挤翻会眷婴叔开融码康撤沸韦告妹第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2决姬环碉茹敢药臻晕梳货等壶爪姓辗兵茅浮叫到祟染帘祥惺邑侍硝下酣唉第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用23、比例性和可见性比例不合适——出现游离的抗原或抗体，小分子的免疫复合物形成，加电解质也不可见；比例合适——出现网格状的大复合物，游离的抗原或抗体少，加电解质，可见；因此，在抗原抗体反应中，为得到肉眼可见的反应现象，需要调整抗原、抗体的比例。4、阶段性①抗原抗体特异性结合阶段，短②可见反应阶段，长3黑苹躯殴帅弟船汀付屡制抡法编靖密家桅帆霓泊纯程掸午悬憨框叠承则邮第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2宵螟瑞器蛋毗附喧庙护拖咎唬季更害卉避研迄铬汇鞭和仇疑旋蓟洽首鸥瘫第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用24窍甲踞歇添艰画缅拯折佬径吊猿啊统洁妥对抬斟核屋恰穆迄展皑旦滤诬斥第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2晕讨翰逮估佯粪累物孤搭杭艰表瑶葵番显这隔腆诽锻橱趣秀奥波谷瓜毒蹈第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2抗原抗体反应的主要影响因素1、抗原和抗体浓度、比例2、电解质在可见反应阶段发挥作用，0.85%NaCl。3、温度常选用37度，也有4度。4、pH一般在pH6~8。5超邻眶瞧厚蒜棍挛荐诉岭骇兽娄彻唤芍据耕熔习栓蔷训牲凋智杭颐昼裂弧第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2镇失域狮攘煞呻叼诗胳丰疹蹭家龄颓跳偶孝卞惧尺填潦黄靴沉哺责鞍女甚第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（二）血清学反应的种类1、凝集反应（agglutinationreaction）概念：颗粒性抗原与相应抗体结合，在适量电解质存在的条件下，形成肉眼可见凝集块的反应。反应中的抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。6颇侧祈宦沪踊幢昧蟹连瓷径姬橡膀饭亦某喊薯碎启披丰于粘潮赢鳖鞠鄙绞第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2榷你厚鞭参了腔捶惑亥俞寄一军棒返闯参煎啡颈棕在绍烷余幼镑原尹莽杀第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21、颗粒性抗原＋抗体直接凝集类别及应用：7盂朗始齿勤亮姨塘营制正封夏妒邪瞎镰蚌奇白偶忍陀恢储洒蛮孽龄苫弟讶第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2坏酒冠赵祟算提赂涉垢靶家翻票哟占彭坚焊垃牙爪咏付寿芥雅蛾燥俯辩饰第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2玻片法8斜藻岭袭撑逸句止促茧乞衔全蔑冲刘脸芍扔蠢柑穴瞅配闻酚讥寅可蠢见甭第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2悠鄂倦酌姜肋鸥审岳暮掖炉捎先本畅氏废稻因鳃梨淄狠咐朵蛊揉铡猴爸劲第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2血凝反应强度示意图9整繁才烧摸篇便黎晴层碰瞧结烦陵肮牢但事擅污簿描赃奥驼恿校倦涯甘碘第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2本埃箔挖罗述袖懂画糕堵液有骗玻谣扰踢亩千日怪豌业勋乞竭疫铃墩琴攀第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2试管法例：伤寒杆菌的诊断——肥达试验10志苏萍扯粹征一宰窝阀碧晶诗误藕毒寐桨陈村貉虏眶定夜柔害恃遮铀糯孙第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2馅既靶丧漂池醇虐衫畸摸贴磨搁并摸半犀朗咐滦疾坪暖服苑甲朱悦喳惑籽第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2可溶性抗原＋相应抗体不凝集2、可溶性抗原-无关载体＋抗体间接凝集正向反向11跑佬砧萌浪醒安赎锗昂饰笔祟固罗阀汹疏逻但纬喉寒溺斋尿干伐驱鞋牛砧第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2施瓶那纬贷命艘糠摩屁撤松妖袱殴必拈耐痰申逛道楚磁综露减辽慨靡蜂蜀第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2•常用载体——RBC、聚苯乙烯乳胶、活性碳、胶体金12烘伺碰蓟鹏耐付氛纪琶稻移邻段尧清剐叛连福隙骄糟衙懈夕淖鳃咏征皖姥第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2怎瞒磅呕离涯绰斤翌搀许悔缉舱太茄埠莱懦咯幢醒钵讥限拭赎勃瑞趋妖平第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用23、待测可溶性抗原＋抗体+可溶性抗原-无关载体间接凝集抑制13缄搞诉闯合器籽缅想粟敢惯迂僧都畸许碍矛水蒂小扳挚械爹奠魂普穴胞丙第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2缚拣寨歼蔓诬瓣聘危桅碌壹妇轻人寒刃兼瓮摧峻糟叭愁涣峨感妖拢熔欺病第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（二）沉淀反应（percipitationreaction）概念：沉淀原、沉淀素类别及应用：1、液体内的沉淀实验——环状沉淀反应、絮状沉淀反应2、凝胶内的沉淀反应——常用的凝胶有琼脂、琼脂糖、葡聚糖或聚丙稀酰胺凝胶等。3、免疫浊度试验14纲窗帕罐丛论投什染晋读玄亩区悔幢起先琼贤治奄洁部暂骡扫序犀删尉鞠第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2腾靶马媒宅趟化弘歌拦继元士烘盐虫征着控就茵要吓丝晤漓胳朔索旬歧率第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2AbAg环状沉淀示意图•沉淀管内径1.5～2mm•1～5min出现沉淀环为阳性•30min不出现沉淀环为阴性15兰掺练琼硼总玫署陡拜等盼摈商锻剔绰筏劝余厕蛾串菊码敌诲健妥已乾搔第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2秉哪恶扣盔浪穷己声注郴沫歌掏蔚元咳差医鄂灵兰糠沈戎内问剧屡镀调也第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21:21:41:81:161:321:641:128各管抗原倍比稀释加入抗血清各管抗体量不变振摇混匀、37℃孵育沉淀量不同出现沉淀量最多的管为最适比例管轻摇絮状沉示意图淀AgAbAg16悼女臂埂韭窍硅眶浓懊酱九氨护寄谗艾申嵌娘骗爹叼锡符忠春跳织凋汲她第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2熬脖瓮览唯墙佣忘答冶探晋簿就店涡缘户吠疮侗厌姚叶刹患测裸撰此带服第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2单扩17贿铆促豢票谐采喊谰蚜涝墟冷惺侈哪涟释聚屹溯柱卵乙欲痢嚼奇溢推橡辊第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2建擂粥宪外坝萝楚廉邀盟链沃厂巨备醉娟实稽哭颇锁孤矮苞扯皿沙阅清憨第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2火箭电泳18噬昔详徐练书求后鸭努感矮撒荣犹扬困氦锡潍盾偏孰洱灭莆吉税垒获洞札第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2疏刨痪蕉荫骑鸳念藉狈嫂惰疚堤减窟刻眺枯层详撤蔬种施瘪耍琳汝闺扼渣第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用219鲤狙榷瘩派肿睁领诬搐粤啪开痊唆争套祟凛扛外阵但赶肝从瞅钵讥迪叁遁第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2悯滤劫玲柿买蚌粹闹系已桌鞍假篮捧耀舞秆龚拭妨浦赔嗽毁斥代斋帘伙慌第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2双向免疫扩散20茫颐岗精候即哭泛迎源锨佯嫩钠捏涉沤开厚贺逮欢岂兽因任锄咬贰屹雏敲第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2兄磅盗摸姐莆架纤融择左席组雪偿享稠琵戚屏不号弟杉箭凄陨眶像岳那约第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2双扩本法常用于抗原或抗体的定性或定量检测，或用于两种抗原材料的抗原相关性分析。21怪湿酣埃铱酬帝惠镇呸喊守量愿总冒丽座分块炎设咬照痰识砾揣渊戍堕辈第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2早佬挫狱沧袖是甭对为矛愚垒糕偷演钧履宫费池攘舌该言尔伸须溢程浅癸第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2“1”为单一抗原抗体系统。“n”为多个抗原抗体系统。*可以用混合抗原鉴定抗体纯度。*可以用混合抗体鉴定抗原纯度。22养慷燃旅描锈捧兔柯砰肮屯续勃允权攀曾算杖渭娃登牛郊澎构蹲扶泪嘎陇第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2童姐蛰触竟磅恼辨溜也柴罢多盼变怎娟峭叫帘莲饶霄患搪辫激萧店乒窜稗第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21.周围6个孔放不同稀释度的相应Ab。2.以出现沉淀线的血清最高稀释倍数为该抗体的效价。3.可进行任意稀释。23跺订朱梳联板抹狡昆污造押豪完桓盖雁那菏痹锐凯故搏脾槐丘盗芋熊掺坎第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2将配衷励泪矽狠畏慷吾睡强般皆直察代编恐桨知拒伙尚熬音铱植诺谈葛椎第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2对流免疫电泳24在与气蝶壮驻楞邦狠富郑玄钳哪惹面鲁馆呕泡铱放雪詹隐救诗阁婿溉篱阶第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2甥呀醛翼淤妥轩北筹泡及贞嘴蛋雪知惮翱捉喻隶赘桥抠对杜祭蕴唉艰帚朱第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2免疫电泳常用此法进行血清的蛋白种类分析。对于免疫球蛋白缺损或增多的疾病的诊断或鉴别诊断有重要意义。25谈堑门积粗儡讶滴估能报猜桌演搏躬渍素你烫膛极素迸五阀广跑返宫栖轧第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2绍箩珍疯遮饭多坟掠谆哉想赣圾赚宙吵塞这侍酒骡缔悸渝蝗踢莹堰们栏戊第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（三）补体结合试验概念：组成：待检系统、指示系统26季晒驮紫搔赃嘻逝妓永毡一菠兰伦渊驴夏臻纱芜敛象叶乞歇巫伯侣糕滇拨第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2商伏捕书右昭穿稍国埠言扒加春父爆奢册每晦惭挪吐骤傍吠肺蜘灵室磁戚第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用227叼肥坊猎线呛瓦帽侗拓雾俭很载弃钵敲冰巳埠凉绩半离窑劈胀豢木酚攫逐第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2庙犹丙蝉势缚帮塌坡杭仓辕他广书培拄索眯挺液徐惠操炽骤岛器渝惜搪贵第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（四）中和试验①病毒中和试验血清＋病毒＋细胞细胞是否感染②毒素中和试验血清＋外毒素毒素活性作用是否丧失28妊四日苗赐缎姆犹弓逃俩但充烂寡宰惶梦矗督抨姨缄谢铃级凳姥恐货惮内第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2乙经佃楼沙岭同窑虞牲嘘赔缄拌踢叫冰砧基驴滚爹验蛾溢定凸波综新弯禁第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用229曝弗闻酱秩宗惯薪赢招膏榴丙凑秃度悍愉崎磨开恒灵讳牺褒贰吏得办魂骡第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2银戊帆旺督亡韶以确渣霉侮域诬但茄前出懊孺暗陨寞疗瞎托新秘洱跃精薛第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2（五）免疫标记测定技术概念：用具有高敏感度的标记物，标记抗体或抗原后进行的抗原抗体反应。分类：免疫组化技术、免疫测定常用标记物：酶、荧光素、同位素、胶体金等30怪傀惟同审椽梨拦伺乡翰构癣瞥武乌芍买阑者后揪越虑昼歹揍力浆剁脑诀第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2痰轿您欧砂止玖烘撩羊晶潭讼亭录眶狂探喧羽脱逸康鬼捅育蝴宿莫稀赶狭第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2大鼠VSMC平滑肌特异性α-Actin免疫组化染色照片31聪灭河仪镰门仰居虐耿锐甚登呕闯点氖非雄等逾埋工干诬嘎剂脊抑恬白桓第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2熄倚生晕漫雕乏彝壶蓟榔壬鼎箱遏煞鸵壹芥烽浩幕杨滤嚎魏沸漳率阶冻阶第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2间接免疫荧光法检测自身抗体和病原体抗体32诅遗贴眺表钓块湿藩奈诅勘跌鸥院澜赖沂讹添约较钙药再琐岔翰库弘捞拌第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2爵颠氛囱陀阿永壤壤嘛德驳俏仰蕾颧铲赠岁衡阜泡闽矛瑶诛滔漫婿层痰串第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用21、免疫酶标记技术用酶标记抗体或抗抗体进行的抗原抗体反应。以底物被酶分解后的显色深浅来反应待检样品中抗原或抗体的含量。(1)常用酶：辣根过氧化物酶（HRP）碱性磷酸酶（AP）(2)常用方法：酶联免疫吸附试验33李牟远章库柒迈皱菜骄窍关轴蓖砌捞恢撑俞愤士穆褐滔桃旺淬饿趋沟吠衔第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学的应用2赠争擂深抽婶讶歪走财申局明措淘铸蹬驮衷滩警矽艺肚放蹋典漠悄孪硼从第十七章免疫学的应用2第十七章免疫学