G试验和GM试验

GtestandGMtest北京朝阳医院呼吸与危重症科张黎主要内容一、血清G试验二、血清GM试验三、肺泡灌洗液GM试验一、血清G试验1.血清G试验原理2.血清G试验的临床价值3.血清G试验检测方法4.血清G试验假阳性的情况5.血清G试验假阴性的情况6.血清G试验的优势和局限1.1血清G试验原理G试验检测的是真菌的细胞壁成分---1,3-β-D-葡聚糖（BG），人体的吞噬细胞吞噬真菌后，能持续释放该物质，使血液中含量增高。定植时BG很少释放入血，因此可有助于鉴别真菌侵袭与定植。-(1,3)-D-葡聚糖细胞核（1-3）-D-Glucan鲎变形细胞裂解物的G因子活化G因子凝固酶原凝固酶凝固蛋白原凝固蛋白（凝胶）1.2血清G试验的临床价值1,3-β-D葡聚糖为真菌细胞壁成分,适用于除隐球菌和接合菌（毛霉菌）外的所有深部真菌感染的早期诊断，尤其是念珠菌和曲霉菌，但不能确定菌种。诊断侵袭性真菌感染（如侵袭性念珠菌病、侵袭性曲霉菌病、肺孢子菌肺炎等）的方法之一。1.3血清G试验检测方法FungitecGtest阳性阈值为20ng/L敏感性67-100%特异性84-100%Glucatelltest阳性阈值为60ng/L或80ng/L敏感性70-80%特异性90%左右1.4血清G试验假阳性的情况使用纤维素膜进行血透，标本接触过纱布或其他含有葡聚糖的材料；静脉输注免疫球蛋白、白蛋白、凝血因子或血液制品；标本中存在脂多糖；操作者处理标本时存在污染；使用多糖类抗癌药物；放化疗造成的粘膜损伤导致食物中的葡聚糖或定植的念珠菌经胃肠道进入血液；服用多粘菌素,厄他培能,头孢噻肟、吡肟,磺胺也会不同程度引起假阳性。1.5血清G试验假阴性的情况隐球菌具有厚壁包膜，生长缓慢，导致假阴性；局灶性曲菌病，BG很少释放入血；抗真菌药物的使用。1.6血清G试验的优势和局限优势：鉴别侵袭性感染与定植；不受机体免疫状态影响，早于临床诊断平均4天；是早期真菌感染的敏感生物标志。局限：不能区分真菌的种类。二、血清GM试验1.血清GM试验原理2.血清GM试验的临床价值3.血清GM试验检测方法4.血清GM试验假阳性的情况5.血清GM试验假阴性的情况6.血清GM试验的优势和局限2.1血清GM试验的原理GM试验检测的是半乳甘露聚糖（glactomannan，GM），主要适于侵袭性曲霉菌感染的早期诊断；半乳甘露聚糖是广泛存在于曲霉和青霉细胞壁的一种多糖，菌细胞壁表面菌丝生长时，半乳甘露聚糖从薄弱的菌丝顶端释放，是最早释放的抗原；检测法是一种微孔板双抗体夹心法，采用小鼠单克隆抗体EBA-2，检测人血清中的曲霉菌半乳甘露聚糖。2.2血清GM试验的临床价值曲菌定植时极少释放入血，因此有助于鉴别侵袭与定植；GM释放量与菌量成正比，可以反映感染程度；连续检测GM可作为治疗疗效的监测；在造血干细胞移植患者中的诊断敏感性高；参考值：I≥0.5为阳性。2.3血清GM试验假阳性的情况使用使用半合成青霉素尤其是哌拉西林/他唑巴坦；新生儿和儿童（双歧杆菌定植、食用乳制品）；血液透析；自身免疫性肝炎等；食用可能含有GM的牛奶等高蛋白食物。2.4GM试验假阴性的情况释放入血循环中的曲霉GM并不持续存在而是会很快清除；以前使用了抗真菌药物；病情不严重；非粒细胞缺乏的患者。2.5血清GM试验的优势和局限优势：鉴别曲霉菌侵袭性感染与定植；早于临床症状和影像学异常1周；GM诊断侵袭性曲霉感染的敏感度高于G试验；血清中存在时间较短，可作为疗效监测。局限：不能区分曲霉菌的种类。G试验和GM试验的联合使用种属G试验GM试验念珠菌属＋－镰刀菌属＋－隐球菌属－＋曲霉菌属＋＋青霉/拟青霉＋＋接合菌纲－－同时测定G试验和GM试验有助于早期诊断侵袭性真菌感染！三、肺泡灌洗液（BAL）的GM试验1.血液病患者中IPA诊断价值（回顾性、前瞻性）；2.重症COPD患者合并IPA的诊断价值；3.综合ICU中重症患者IPA的诊断价值。Bronchoalveolarlavagefluidgalactomannanforthediagnosisofinvasivepulmonaryaspergillosisinpatientswithhematologicdiseases回顾性分析99名血液病患者，其中58名确诊或临床诊断IPA者。所有患者的BALF样本均用Platelia（双夹心酶联免疫吸附的方法检测GM水平的试剂盒）检测。结果显示，与培养法（50%）和显微镜法（53.3%）相比，BALF的GM检测法敏感性更高[91.3%，光密度（OD）临界值≥1.0]，阳性、阴性预测值分别为76%和96%（OD临界值≥1.0）。中性粒细胞减少患者和未见减少者的平均OD临界值无差异。在接受预防性抗真菌治疗的患者中，GM检测法敏感性下降显著。ClinInfectDis.2009Dec1;49(11):1688-93.3.1文献一3.1文献一：研究结果Galactomannantestingofbronchoalveolarlavagefluidisusefulfordiagnosisofinvasivepulmonaryaspergillosisinhematologypatients.目的：前瞻性的病例对照研究，以确诊或临床诊断的侵袭性肺曲霉菌病（IPA）血液病患者VS不符合确诊或者拟诊IPA诊断标准的血液病患者组以及无曲霉感染证据的非血液病患者组。结果：10例病例组VS52例对照组，病例组BAL的GM试验OD值明显高于对照组，通过ROC分析，合适的OD界值点为1.1，具有98.1%的特异性和100%的敏感性。BMCInfectDis.2010Mar3;10:44.3.1文献二支气管肺泡灌洗液半乳甘露聚糖检测在重症COPD合并侵袭性肺曲霉菌病中的临床价值明确肺泡灌洗液中GM检测在重症慢性阻塞性肺疾病（COPD）合并侵袭性肺曲霉菌病中的临床价值。结果:(1)50例重症COPD患者中有34例行纤维支气管镜检查并获取BALF标本，IPA临床诊断9例，疑诊6例，定植2例，对照组17例；(2)根据ROC曲线，当BALF中GM分光光度比值以0.795为界值时其IPA诊断灵敏度为88.9%，特异度为95.1%，阳性预测值为100%，阴性预测值为93.7%。2010年危重症医院全国会议3.2文献三Aprospectivecomparisonofgalactomannaninbronchoalveolarlavagefluidforthediagnosisofpulmonaryinvasiveaspergillosisinmedicalpatientsunderintensivecare:comparisonwiththediagnosticperformanceofgalactomannanandof(1→3)–β–d-glucanchromogenicassayinserumsamples目的：比较肺泡灌洗液GM试验和血清GM试验及G试验对重症患者肺侵袭性曲霉菌病的诊断效度。入组：51人纳入研究，9例侵袭性曲霉菌病（IA）（4例确诊，5例临床诊断），3例肺孢子菌肺炎（PJP），1例混合IA和PJP。ClinMicrobiolInfect2011;17:1053–10603.3文献四3.3文献四：研究结果AllIAProvenIAAllIFD3.3文献四：研究结果3.3文献四：研究结论肺泡灌洗液（BAL）的GM试验以I≥1.0为阳性值，可以提高危重症患者IA的诊断效度。肺泡灌洗液（BAL）GM试验侵袭性肺部真菌感染重要的检测方法；比血清GM试验具有更高的敏感性；结果的判定尚无定论，界值应该高于血清GM试验标准。