2.病理组织的取材、保存与送检讲义解析

病料的采集、保存与送检一、概述（二）确采集、保存与送检病料的重要性（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系（一）病料的含义（一）病料的含义狭义：用于疾病诊断的材料。广义：用于动物科学研究、实验等各方面的实验室检查材料。如：动物研究中的重要内容——形态学和生理机能的变化。涉及到病理学、组织胚胎、药物毒理、动物营养、动物生化、生化等学科（二）正确采集、保存与送检病料的重要性1.关系到疾病诊断的准确性：病变材料反应了疾病的本质变化。2.关系到科研和实验结果正确与否：科研试验：设计实施结果。实施（实验）的过程获取数据动物形态变化、机能（生理生化指标）。（三）病料的采集、保存与送检三者之间的关系1.正确的采集病料是获得正确结果的关键。2.正确的保存病料是获得正确结果的保证。3.正确的送检病料是获得正确结果的必要条件。※三者均能影响结果！！！二、实用举例（一）用于病理组织学检查病料的采集、保存与送检（二）微生物学检查的材料的采集、保存与送检(三)用于毒物分析材料的收集保存与送检（一）用于病理组织学检查病料的采集、保存与送检1.病料的采集（取材）2.病料的保存（固定）3.病料的送检1.病料的采集（取材）⑴取材应目的准确，有病变的组织必须取，有疑问处重点取，变化不明现时全面取。⑵取材部位要准确，所取组织块应含有病变、正常和两者相交过度结构;组织结构要完整,如肠（外膜层、肌层、粘膜层）、肾（皮质、髓质）。⑶取材时间尽量早。病死动物夏季不超过6h，冬季不超过24h。（相对）⑷取材大小及数量。一般1.5×2.0×0.3～0.5cm为好，不同的变化均取。⑸特殊组织取材壁薄的囊腔脏器（肠、胆囊）。体积微小的组织（小鼠的肾上腺、垂体、甲状腺等）。液状病料、渗出液。柔软与变形的组织（肠系膜、神经干）。⑹防人为变化：取材刀具要快，动作要轻，防挤压。2.病料的保存（固定）⑴固定的作用：使细胞内的物质尽量接近生活状态时的形态，结构和位置，并便于切片和观察。⑵固定液的选择：用于组织固定的固定液种类繁多，根据切片观察的目的而定（形态结构、组织内抗原、组织内脂肪、糖原）⑶固定液的量：10倍于组织的体积。⑷固定的时间：数小时～24小时，不同种类不一样（固定液种类、组织大小……）⑸固定温度：常温20～25℃，低温4℃时间要延长。⑹固定用容器：玻璃容器为好，禁用金属容器，底部最好垫纱布或棉花，防组织贴壁而固定不良。※固定方法：⑴浸泡法：要固定的组织浸入固定液中，是最常用的方法。⑵注射、灌流固定法：用于体积过大，固定液又难进入肉尸的组织或整个器官、动物体进行固定。※电镜取材活体固定※眼球固定※动物整体浸渍标本制作⑶蒸气固定法：固定组织中的可溶性物质，甲醛或锇酸固定。石蜡切片常用固定液⑴10％福尔马林固定液甲醛溶液1份自来水9份⑵10％中性福尔马林固定液（PH7.0）甲醛溶液120mlNaH2PO4·H2O4gNa2HPO413g蒸馏水880ml⑶4％多聚甲醛固定液（用于免疫组织化学）多聚甲醛4g0.1mol/LPB（PH7.4）100ml※多聚甲醛＋PB，于磁力搅拌器上，加热到60℃左右完全溶解，溶液变清（有时需加几滴1mol/LNaOH），最后PB补足至100ml。⑷Bouin氏固定液（用于组织学和免疫组织化学固定）苦味酸饱和水溶液75ml甲醛25ml冰醋酸5ml⑸Carnoy氏固定液（使用于染色体、DNA、RNA、糖原的固定）纯酒精6份冰醋酸1份三氯甲烷3份3.病料的送检⑴及时送检新鲜病料：2h以内能送到的，气温高时要加冰冷藏。已固定的病料：用塑料袋或瓶密封包装。⑵附送检说明：检查的目的与要求，基本情况介绍（病史、发病、死亡及剖检、取材的组织种类、数量等）⑶专人送检：人畜共患的烈性传染病（炭疽），国家规定的一类动物疫病（口蹄疫、高致病性禽流感、牛海绵状脑病等）。（二）微生物学检查的材料的采集保存与送检要求在没有其它微生物污染情况下进行，因此必须做到以下几点：⑴所有取材的用具（刀、剪、盛装容器等）事先要严格消毒、灭菌，取材环境尽量做到无菌。⑵尸检时应首先采取用于微生物检查的病料。⑶取材时间尽量早，动物死后肠道内微生物大量繁殖造成污染。⑷必要时将整个脏器、尸体送检。1.病料的采集（取材）⑴实质脏器的取材：先用烧热的刀片烧烙脏器表面，再用消毒的刀、剪取深部组织，同时作触片。※最好一种组织用一套刀具⑵液体病料（血液、胆汁、渗出物、脓汁等）表面烧烙后，用灭菌注射器吸取保存。⑶全血抗凝剂⑴4％枸橼酸钠0.1ml，可抗凝血1ml。⑵20％枸橼酸钠2～3滴可抗凝血5ml。⑶10％乙二胺四醋酸钠2～3滴可抗凝血5ml。⑷肝素：1mg可抗凝1ml，多用于病毒学检查的抗凝血。⑷肠内容物：烧烙表面，吸取内容物于灭菌容器内。⑸皮肤及皮屑：刀刮至真皮层收集皮屑，作真菌、疥癣检查。⑹脑、脊髓：常作病毒检查。2.病料的保存⑴细菌学检查材料：A.组织块：一般用灭菌的液体石蜡、30％甘油缓冲盐水或饱和氯化钠溶液。B.液体材料：保存于灭菌的密封性好的试管内，可用石蜡或密封胶封口。C.各种涂片、触片、抹片,自然干燥后装盒冷藏。⑵病毒学检查材料：A组织块：浸入50％甘油缓冲盐水或鸡蛋生理盐水。B液体材料：灭菌试管严密封口低温保存。在4℃时可保存数小时，若长期保存应在-70℃条件下。※保存液的配制⑴30％甘油缓冲盐水：纯甘油30ml氯化钠0.5g碱性磷酸钠1g0.02%酚红液1.5ml中性蒸馏水加至100ml混合后在15磅高压灭菌30mins⑵50％甘油缓冲盐水溶液：氯化钠2.5g酸性磷酸钠0.46g溶于100ml中性蒸馏水内碱性磷酸钠10.74g纯中性甘油150ml中性蒸馏水50ml混合后在15磅高压灭菌30mins鸡蛋表面消毒破壳搅匀后加灭菌生理盐水（9份蛋浆＋1份灭菌生理盐水）摇匀过滤加热56℃～58℃30mins，于第二、三天再按上述过程加热一次，冷却备用。⑶鸡蛋生理盐水溶液：（三）用于毒物分析材料的收集保存与送检中毒的诊断：临床症状＋尸体剖检初步诊断，要确诊还需进行实验室诊断。（毒物分析：毒物性质）（病理切片：中毒靶器官病理变化）1.样品的采集⑴原则：采集含毒量多而易检出的材料。常采集：呕吐、排泄物、胃肠内容物、血、粪、尿以及肝、肾、脑等组织；剩余的饲料及饮水。⑵样品的种类及量：量要足够，多处取材时最好分装，有时胃肠内容物可以不分装。常见毒物中毒的样品采取表毒物剩余饲料呕吐物、胃及胃内容物肠内容物粪便尿液血液肝肾脑氰化物+++++++磷及磷化锌++++++砷、铅++++++++++有机磷农药+++++++有机氯农药++++++++汞及有机汞+++++++++++生物碱+++++亚硝酸盐+++++++毒鼠药+++++++检品采取量包装法附注剩余饲料500-1000克塑料袋胃及内容物250-500克广口玻璃瓶或塑料袋密封肠段和肠内容物250左右广口玻璃瓶或塑料袋密封粪便250左右广口玻璃瓶或塑料袋密封实质赃器每个脏器100-250克广口玻璃瓶或塑料袋密封血液50-100毫升玻璃瓶或大试管密封尿液200-50毫升玻璃瓶密封检品采取的量及包装方法2.保存⑴保存容器：用干净，未盛装过化学药品的玻璃或陶瓷器皿，勿用金属制品。⑵干物质：可用干净的塑料袋、纸袋。⑶检查材料中不可用防腐剂，非用时可用酒精，但要用同种酒精作对照。⑷所有的检查材料要标明名称、取材时间。3.送检⑴封装（严密）⑵尽快送检，最好在冷藏条件下，防变质或挥发。⑶提供中毒情况：饲养管理情况：使役、饲料、饮水腐败变质否，群饲还是单养。周围环境：农药使用情况，有否毒鼠药，周围有无化工厂、废水等。发病及死亡情况：发病时间、头数、症状、剖检变化等。参考文献1.兽医学检验.军兽大编，农业出版社，1979.2.动物尸体剖检技术.陈怀涛编，甘肃科技出版社，1989.3.兽医临床病理学.（美）E.H.科尔斯著，朱坤熹、秦礼让译，上海科技出版社，1989.4.家畜中毒学.王洪章编，农业出版社.5.病理学技术.王伯沄编，人民卫生出版社，2000.6.动物实验方法学.孙敬方编，人民卫生出版社，2001.