保健食品功效成分检测方法（PDF59页）

分光光度法分光光度法分光光度法分光光度法测定保健食品功效成分仓公敖仓公敖仓公敖仓公敖YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.保健食品的原料与功效成分2.2.2.2.保健食品的功效成分与保健功能3.3.3.3.保健食品功效成分的检测4.4.4.4.检测方法的技术要求及数据处理内容YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖保健功效成分来源与保健功能功效成分灵芝多糖香菇多糖硫酸软骨素保健功能缓解体力疲劳增强免疫力辅助降血糖辅助降血脂辅助降血脂增强免疫力保护骨关节参与制造骨骼主要来源灵芝、香菇、枸杞、银耳、灰树花、人参、西洋参、昆布、木耳、山药、黄芪、茯苓、猪苓、黄精、苦瓜动物的软骨YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法•测定原理----多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚—硫酸作用成橙红色化合物，其呈色度与溶液中的糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法•样品处理由于不少保健品添加了淀粉、糊精，一定要做相应的处理，否则结果偏高。添加淀粉的样品需加α-淀粉酶及糖化酶（如葡萄糖苷酶）处理。添加糊精的样品需加糖化酶（如葡萄糖苷酶）处理。处理的原则是将这类非活性多糖的碳水化合物全部酶解成单糖或低聚糖，再用乙醇沉淀所需的活性多糖以达到分离的目的。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法•样品测定定量准确移取样品溶液于25mL比色管中，补加水至2.0mL,加入5%苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•注意事项�测定样品中多糖时，提取时间以1小时为宜，以免因提取时间过长引起糖结构变化甚至使碳键断裂而导致所测多糖含量偏低�本法灵敏度高，出现测定结果平行性偏差较大,实际操作时每个样品要多做几个平行样�由于保健食品组方的复杂性，不同分子量得多糖所用的乙醇浓度沉淀效果是不同的�酶的活性对酶解的效果影响较大�粗多糖测定最终报告结果要标示以葡萄糖计或葡聚糖计，因两者测定值相差很大一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•测定原理----食品中相对分子质量大于1*104的高分子物质在80%乙醇溶液中沉淀，与水溶液中单糖和低聚糖分离，用碱性二价铜试剂选择性地从其他高分子物质中沉淀具有葡聚糖结构的多糖，用苯酚—硫酸反应以碳水化合物形式比色测定其含量，其显色强度与粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以此计算食品中粗多糖的含量。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•样品处理1）样品提取2）沉淀粗多糖3）沉淀葡聚糖YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•样品处理•样品提取称取混合均匀的固体样品2.0g,置于100ml，加水80ml左右，于沸水浴上加热2小时、冷却至室温后补加水至刻度，混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀多糖YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•样品处理•沉淀粗多糖准确吸取样品提取中终滤液5.0ml或液体样品5.0ml，置于50ml离心管中，加入无水乙醇20ml，混匀5min后，以3000r/min离心5min，弃去上清液。残渣用80%(体积分数）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃上清液，反复操作3-4次。残渣用水溶解并定容至5.0ml，混匀后供沉淀葡聚糖。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•样品处理•沉淀葡聚糖准确吸取沉淀粗多糖后的终溶液2ml，置于20ml离心管中，加入100g/l氢氧化钠溶液2.0ml、铜试剂溶液2.0ml，沸水浴中煮沸2min，冷却，以3000r/min离心5min,弃去上清液。残渣用洗涤液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次，残渣用10%（体积分数）硫酸溶液2.0ml溶解并转移至50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。此溶液为样品测定液。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•样品测定准确吸取样品测定液2.0mL，置于25mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0mL,在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10.0mL,在旋涡混合器上小心混匀，至沸水浴中2min，冷却至室温，用分光光度计在485nm波长处以试剂空白为参比，1cm比色皿测定吸光度值。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖二、葡聚糖的分光光度测定法•注意事项�本方法测定的水溶性多糖含有10个以上单糖残基�在测定过程中应避免糖和其他碳水化合物的污染，因为苯酚—硫酸与糖和碳水化合物起反应�某些保健食品中功效成分为醇溶性多糖，可参照本方法进行测定，但样品预处理时将乙醇改为丙酮即可�洗涤粗多糖沉淀时，一定要将离心管壁上玷污的其他糖分和碳水化合物用80%乙醇洗净，否则结果偏高�此法适用于测定高分子量的糖类物质（10000Da）YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖三、硫酸软骨素的分光光度测定法•测定原理----结晶紫是一种阳离子染料，在酸性条件下带正电荷，易与带酸性基团的生物大分子发生静电作用而形成离子配合物，已用于脱氧核糖核酸、干扰素等的分光光度法分析。结晶紫结构中的氨基带正电荷，硫酸软骨素的磺酸基和羧基带负电荷，两者通过静电引力和输水作用力形成络合物，产生变色效应，吸光度降低。吸光度的降低量与硫酸软骨素含量线性相关YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖三、硫酸软骨素的分光光度测定法•样品处理精密称取内容物25mg，置于100mL量瓶中，加水适量，超声处理10min，加水定容至100mL,过滤，取续滤液4mL,置于100mL量瓶中，加水至刻度，得样品溶液。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖三、硫酸软骨素的分光光度测定法•样品测定取供试品溶液1mL，置于10mL具塞刻度试管中，加入pH5.0的醋酸—醋酸钠缓冲液1.0mL和结晶紫并粗三溶液0.6mL，加水至10.0mL，摇匀，30℃水浴保温20min,放至室温。以水为参比，于588nm波长下测定吸光度。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO1.1.1.1.多糖的检测方法多糖三、硫酸软骨素的分光光度测定法•注释硫酸软骨素是提取于动物软骨的黏多糖类物质，在心血管疾病、关节病的防治等方面具有重要作用。硫酸软骨素除了作为药用品外，大量的是作为改善关节病的补充品，作为健康食品应用，在美国已经风行多年，经过多年的应用，已经证明硫酸软骨素对改善老年退行性关节炎、风湿性关节炎有一定的效果。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO2.2.2.2.皂苷类化合物的检测方法皂苷类保健功效成分来源与保健功能功效成分保健功能主要来源红景天苷人参皂苷缓解体力疲劳、增强免疫力、抗氧化、抗辐射、提高缺氧耐受力、辅助降血糖、保护心血管系统人参、西洋参、红景天、绞股蓝YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO2.2.2.2.皂苷类化合物的检测方法多糖一、总皂苷的分光光度测定法•测定原理----总皂苷经提取、PT—大孔吸附树脂柱预分离后，在酸性条件下，香草醛与人参皂苷生成有色化合物，以人参皂苷Re为对照品，于560nm处比色测定。YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO2.2.2.2.皂苷类化合物的检测方法多糖一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法•样品处理1）固体样品：称取1.0g左右样品置于100mL烧杯中，加入20~40mL85%乙醇，超声波振荡30min，再定容至50mL,摇匀，放置，吸取上清液1.0mL,挥干后以水溶解残渣，进行柱分离。2)液体样品：含乙醇的酒类样品：准确吸取1.0mL样品放于蒸发皿中，蒸干，用水溶解残渣，用此液进行柱层析。非乙醇类液体样品：准确吸取1.0mL样品（如浓度高或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）,直接进行柱分离。一、总皂苷的分光光度测定法YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO2.2.2.2.皂苷类化合物的检测方法多糖一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法•样品处理柱层析：以PT—大孔吸附树脂柱进行层析分离，准确吸取上述已处理好的样品溶液1.0mL上柱，用15mL水洗柱，以洗去糖分等水溶性杂质，弃去洗脱液，再用20mL85%乙醇洗脱总皂苷，收集洗脱液于蒸发皿中，于水浴上蒸干，以此作显色用。一、总皂苷的分光光度测定法YOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHEREYOURSITEHERELOGOLOGOLOGOLOGO2.2.2.2.皂苷类化合物的检测方法多糖一、粗多糖的苯酚————硫酸分光光度测定法•样品测定显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣溶解，再加入0.8mL高氯酸，混匀后移入10mL比色管中，塞紧盖子，于60℃以下水浴加温15min取出，冷却后准确加入冰乙酸5.