ImageLab操作手册

ImageLab™中文操作手冊ImageLab影像擷取和分析軟體搭配MolecularImagerChemiDoc™XRS+、MolecularImagerGelDoc™XR+和CriterionStainFreeTM影像擷取系統，可應用於凝膠電泳和轉漬膜之數位影像擷取和分析，而自動化的工作流程能加速影像擷取及參數最佳化之調整，並針對調整好的凝膠或轉漬膜影像進行系統性分析，進而得到所需的分析數據。一、軟體操作介面啟動精靈程式桌面主視窗工具列分析工具列狀態列1.主視窗工具列檔案管理分析數據ResultsData2.顯示工具列3.分析工具列（1）影像擷取工具（ImageTools）（2）電泳條及電泳條帶工具（LaneandBandTools）（3）分子量工具（MWMolecularWeight）（4）自動定量工具（QuantityTools）（5）註釋工具（AnnotationTools）（6）手動定量工具（VolumeTools）二、使用ImageLab軟體進行化學發光影像擷取流程1.建立影像擷取流程：放大膠片顯示設定縮小全視窗大小影像轉換改變影像色彩轉換3D影像影像資訊在膠片影像擷取（GelImaging）對話方塊中選擇Chemi（化學發光）應用程式(1)在影像擷取區域（ImagingArea）對話方塊中的下拉式選單中選擇合適的樣品大小（非必需）(2)選擇影像擷取曝光（ImageExposure）方法，可以自行評估曝光時間並以手動設定（ManualExposure），或是使用信號累積模式（SignalAccumulationMode，SAM）來進行評估。擷取化學發光的影像流程中最重要的關鍵在於影像曝光時間的確定，過短的影像曝光時間可能會無法辨識到微弱的信號（高於背景值）；相對地，較長的影像曝光時間則是會造成電泳條帶之訊號過飽和而超出了相機的偵測極限。若使用ChemiDocXRS+擷取化學發光樣品的影像，需要在設定手動或信號累積模式（SAM）前先確認好適合的影像擷取時間框架。2.手動曝光(1)選擇手動設定曝光時間（Manuallysetexposuretime）並在讀秒框中輸入10秒。(2)選擇Highlightsaturatedpixels。(3)把膠置於透射箱的中心位置。(4)在程式視窗中點擊按鈕。(5)觀察顯示器中樣品的即時影像，打開照膠系統的門並移動樣品直到位於視野的中心區域。(6)可利用照相機的變焦滑板調節影像擷取區域的大小。(7)選擇按鈕來擷取影像。若所需的影像出現在電腦的顯示器上，確認影像中是否包含紅色的飽和區域。若有飽和區域存在，請重新以較短的曝光時間參數來擷取影像。若無飽和區域存在，則可移動滑鼠置於最暗的條帶之上，在較低的右下角ImageLab視窗中觀察信號的強度數值。如圖中顯示強度為1994，照相機能記錄的最大值的32分之一（最大值為65,535）。用你的最初的10秒曝光再乘以30就可在照相機的最大動態範圍附近影像擷取你的樣品。若你只需針對單一影像的影像擷取時間進行評估，可直接在手動曝光區域中輸入300。3.信號累積模式（SignalAccumulationMode，SAM）如果預估方法不足以滿足您的需求，可選擇SAM按鈕，再選擇Setup按鈕。一個新的對話方塊會跳出來，包含可以輸入影像擷取時間的參數位置。我們可以輸入原本預測的300秒曝光時間上下的範圍，可設定擷取5個影像，推測能擷取到接近最佳化的影像。而SAM設定的影像顯示對話視窗，在您選擇按鈕後再點選按鈕，視窗會顯示相關進度圖示來說明整體影像擷取的時間。在250秒擷取第一個影像，同時小縮圖會出現在視窗的下方，以此類推整個過程將持續到擷取所有的影像。藉由移動滑鼠到影像上，就能即時地判定強度值，可再利用位於左邊的影像轉換視窗（ImageTransform）中的調節游標來改變影像的顯現。若確定調整到符合您要求的影像時，點擊按鈕捨棄其他不適合的影像來完成擷取影像的程序。也可在SAM擷取影像的過程中或之後來保存需要的影像，直接點選右鍵單點縮圖視窗內的影像即可進行存檔保留下來。在決定擷取影像的數量前，需要先確定增加SAM影像參數是否會影響背景值的變化。當擷取的影像次數提高時，可能會造成接近背景值的訊號難以辨識，若需要針對較弱的信號進行擷取，仍然建議選擇適當的曝光時間來進行影像擷取。三、建立快速分析步驟（CreatingProtocols）1.啟動分析精靈視窗--STEP1.GELIMAGING（1）選擇應用的程序（Chooseanapplication）（2）選擇影像擷取區域（ChoosetheImagingArea）（3）選擇影像擷取曝光時間（ChooseImageExposureTime）（4）選擇顯示設定（ChooseDisplayOptions,HighlightsaturatedpixelsandImageColor）2.進行影像分析（AnalyzeImage）--STEP2.DETECTLANESANDBANDS設定DETECTLANESANDBANDS的參數（LowBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75）或自行設定靈敏度。3.分子量分析（AnalyzeMolecularWeight）--STEP3.ANALYZEMOLECULARWEIGHT設定AnalyzeMolecularWeightSettings的MolecularWeightStandard（PrecisionPlusProtein™Standards、PrestainedSDS-PAGEStandardsBroadRange、PrestainedSDS-PAGEStandardsLowRange或PrestainedSDS-PAGEStandardsHighRange）、StandardLanes及RegressionMethod參數。4.報告輸出設定（ReportSettings）--STEP4.SPECIFYCONTENTOFREPORTS5.結果（ResultsOverview）及報告（Report）（1）數據顯示資訊（DisplayingData）（2）分析表格設定（AnalysisTableOptions）（3）Lane資訊（LaneProfile）（4）標準曲線（StandardCurve）四、建立影像分析步驟（CreatingImagesAnalyzingProtocols）1.影像分析（AnalyzingImages）（1）分析工具AnalysisToolBox（A）自動分析（AutoAnalysis）點選進入DetectionSettings視窗設定Detectlanesandbands的參數（LowBandDetectionSensitivity（Lowsensitivity=25）、HighBandDetectionSensitivity（Highsensitivity=75）或自行設定靈敏度），接著再設定MolecularWeightAnalysisSettings的MolecularWeightStandard、StandardLanes及RegressionMethod參數。2.影像工具（ImageTools）藉由水平或垂直延伸（Flip）、左右旋轉90℃或自由旋轉（Rotate）、裁切（Crop）、反轉（InvertData）及疊合（Merge）。3.Lanes及Bands工具（LaneandBandTools）（1）LaneTab使用自動（Automatic）或手動（Manual）搜尋Lane功能（A）針對所有的Lanes（AllLanes）進行大小調整（Resize）、（Adjust）及刪除（Delete）等參數調整。（B）針對單一Lane（SingleLane）進行增加（Add）、彎曲（Bend）、移動（Move）、寬度（Width）及刪除（Delete）等參數調整。（C）利用LaneBackgroundSubtraction進行背景值之扣抵，並可點選（ApplytoselectedLane）針對單一Lane進行調整。-可以藉由RollingDisk參數設定可接受的最低限制（1-99mm）來去除未符合的背景值。（2）BandsTab藉由DetectBands進行自動搜尋Bands功能或手動進行增加（Add）、刪除（Delete）及（Adjust）等參數調整。4.分子量分析工具（MolecularWeightAnalysisTools）此工具能藉由已知的標準品偵測相對的分子量或basepairs。5.定量工具（QuantityTools）（1）相對定量（RelativeQuantityTab）從影像中選擇已知的標準品（referenceband）及其標準品濃度（以R表示），其分析結果可從Analysistable觀察。（2）絕對定量（AbsoluteQuantityTab）藉由選擇已知標準品濃度的bands（至少兩個以上,以R表示），並設定合適的回歸參數計算所得之標準曲線來推算目標bands的絕對濃度（回歸參數設定如Linear(較常用)、Point-to-Point或Cubicspline）。RegressionMethodMinimumnumberofstandardbandsMinimumnumberwithForceThroughOptionLinear21Point-to-Point21CubicSpline546.註釋工具（AnnotationTools）可以藉由AddAnnotations工具增加文字註解及箭頭註解，並可調整註解相對位置（Alignment）、文字屬性、顏色及旋轉方向等參數7.定量工具（VolumeTools）按下選擇較適合的Band型態,選取想要定量分析的Band位置,並在Band上點擊左鍵兩下可將樣品定義為標準品或待測物種,並分別定義其定量依據（如kb,ppm,mg/ml…）建議用RectTool方形,先框出適當之方形,並用複製方式將分析之Band框出後（C+rl+C+左鍵/即可以複製）在Band上點擊左鍵兩下可將樣品定義為標準品或待測物（1）VolumeBackgroundSubtraction-Local（Localbackgroundsubtraction）藉由我們所圈選unknownvolume和standardvolume的pixels密度總和來進行背景值的扣抵。-Global（Globalbackgroundsubtraction）藉由整片膠片背景平均的密度來進行背景值的扣抵。有任何疑問與意見，歡迎隨時來電詢問正茂生物科技公司全省免費諮詢專線：0800-213-029