生化分析案例

CompanyLOGOISO15189实验室认可系列培训讲座常见生化检测误差案例分析牛广华辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例分类一．全自动生化仪的参数设置问题二．全自动生化仪的校准问题三．全自动生化仪的质控问题四．全自动生化仪的试剂问题五．全自动生化仪水供系统水质问题六．全自动生化仪的维护和保养问题七．标本质量对生化结果的影响八．报告前结果的审查ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例一全自动生化仪的参数设置问题ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现一、现象：某医院操作人员发现：DBIL测定临床标本出现负数较多（仪器：日立7060）。试剂参数为：主波长：450nm；副波长：546nm；S=7ul；R1=196ul；R2=49ul；分析方法：2PointEnd；测光点为16、31。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现二、了解情况：到该院后查看校准结果：S1ABS：-48，K因数：-6215。从校准数据看，校准结果正常。随后查看当天临床标本反应曲线，发现曲线不光滑，有跳点出现，初步怀疑为比色杯不干净或光源不稳定造成对该项目的干扰。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现三、处理：1.对仪器进行日常维护，通过杯空白及光度计检查，确认仪器性能符合实验要求后，取2例临床标本分别重复测定10次，结果为：从数据看，仍有负值出现且重复性很差，故排除仪器影响因素。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心12345678910XSDCV%临1-2.31.32.5-1.51.52.32.42.11.22.51.21.72142.9%临22.83.53.92.14.81.92.53.62.82.53.040.9029.5%DBIL测定精密度差且有负值出现2.随后再一次核对参数设置情况，发现R1试剂量+样本量为203ul，而日立7060仪器要求的最小反应量为250ul，所以怀疑测定结果的不好可能与试剂量设置太小有关。3.故修改参数为：S=10ul，R1=280ul，R2=70ul，其他参数不变，重新校准，校准结果为：S1ABS：-50，K因数：-6388。4.取以上2例临床标本分别重复测定10次，结果如下：ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心12345678910XSDCV%临12.52.42.32.52.42.52.42.42.52.42.430.0672.78%临23.13.23.33.33.33.23.33.23.23.33.240.0702.16%DBIL测定精密度差且有负值出现5.从数据看，2例标本重复性都较好且无负值出现。在第二天观察的40例标本测定情况看，结果均符合临床要求。四、分析：由此分析造成DBIL测定结果不理想的原因为：样本与试剂的反应体积设置太小。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心DBIL测定精密度差且有负值出现五、总结：1.最小反应体积是指在仪器光度读数要用于结果计算时，反应液液面高度不低于光度计光径的最小体积。它保证仪器的正确读数和计算，也是仪器测定精度和经济性的指针之一。2.在单试剂终点法或速率法项目测定时，样品与试剂的总体积不得少于此参数。3.在双试剂终点法测定时，若在加R2之前读数，则样品与R1的总体积不得少于该参数。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心ISO15189实验室认可系列培训讲座DBIL测定精密度差且有负值出现4.本案例中，DBIL由于要扣除样品空白，故在加入R2试剂前要读一次吸光度。而日立7060仪器的总反应量要求不得小于250ul，但是该案例中R1试剂量+样品量设置却为203ul，远远小于仪器要求的最小反应量，使光路不能完全通过反应液面，导致测定吸光度不稳定，出现跳点，从而影响结果，造成重复性差甚至负值出现。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例二全自动生化仪的校准问题ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过一、现象：某医院反映某品牌HCY试剂（仪器：雅培C8000），校准无法通过，出现“校准失败”的报警。试剂参数为：Primarywavelength：340nm；Secondarywavelength：700nm；Mainreadtime：31-33；Blankreadtime：26-28；Samplevolume：10ul；R1reagentvolume：185ul；R2reagentvolume：50ul；Calibrationmethod：Spline；校准品个数设置：3；浓度分别设置为：0、10、33umol/L。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过二、了解情况：查看校准结果，发现其每个浓度的吸光度实际在该仪器上已做出测定，分别为：0：-0.002710：-0.034433：-0.0738，但参与最终结果计算的CalFactor（校准因数）却显示为0，说明该仪器并未通过所测定的吸光度进行曲线拟合，故出现“校准失败”报警。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过三、处理：1.分别对10umol/L、33umol/L的校准品进行对倍稀释，得到5umol/L、16.5umol/L浓度的校准品；2.把参数中校准品个数修改为：5；3.浓度设置修改为0、5、10、16.5、33umol/L。4.仍采用Spline定标模式重新进行校准，后校准顺利通过，结果如下：ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心0umol/L5umol/L10umol/L16.5umol/L33umol/LCalFactor-87.2-213.5-279.6-365.3吸光度-0.0032-0.0195-0.0366-0.0558-0.0744Hcy在全自动生化仪上校准不能通过5.从校准结果看，符合实验要求，因此该院所反映校准无法通过的问题得以解决。随后进行质控测定，结果如下：6.从以上数据看，两个水平浓度的质控所测得结果均在规定的允许误差范围内，符合实验要求。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心HCY质控测定值标示值范围水平17.37.05.9-8.1水平233.029.024.6-33.4Hcy在全自动生化仪上校准不能通过四、分析：1.全自动生化分析仪的校准模式设置中均有线性或非线性的选择。当我们对其进行设置时，会根据试剂盒的反应原理选择合适的校准模式。2.通常情况下，常规的生化项目我们会选择线性模式校准，而免疫比浊项目我们会选择非线性模式校准。3.若选择线性校准，往往我们只需带一个校准品进行两点校准即可。4.若选择非线性校准时，我们会带多个浓度校准品进行多点校准。5.不同的仪器，在做非线性校准时所要求的校准品个数是不同的。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过例如：①日立、奥林巴斯等仪器，要求至少带三个浓度的校准品即可进行非线性拟合；②贝克曼、东芝等仪器，则要求至少带四个浓度的校准品才进行非线性拟合。③此次所用的雅培C8000仪器，在第一次校准时，采用的是三点非线性校准，该仪器不支持计算，出现“校准失败”的报警。后采用五点非线性校准，校准通过。④因此，说明该仪器的性能应与贝克曼、东芝等仪器一致，在进行非线性校准时，校准品的个数不得少于四个。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过五、总结：我们在进行新项目实验前，除了选择正确的校准模式外，还要根据该仪器的性能特点，选择符合要求的校准品个数，以保证实验的顺利进行。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心Hcy在全自动生化仪上校准不能通过非线性校准模式包括：1.logit(3p)、logit(4p),logit(5p)校准模式：非线性校准类型：抛物线型(图12-36)，则多考虑用logic方法拟合，选择logit(3p)或logit(4p)和logit(5p)。2.Splain校准模式Splain也称样条函数，在曲线类型不确定时，或校准曲线类型如图12-37所示的S型非线性校准类型，则多考虑Splain方法拟合。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心案例三全自动生化仪的质控问题ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析一、现象：某医院操作人员反映使用某公司的检测试剂盒，有些项目如TP、Alb等做室内质控测定时，结果高低不定，有失控现象，检测仪器为日立7170A。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析二、了解情况：经了解其实际情况为使用某公司进口干粉质控品，质控品复溶后分装成数支冰冻保存，无反复冻融或过效期使用现象，仪器维护良好，但IQC经常失控，常常出现某天大部分项目系统偏低、而次日又正常或系统偏高。综合上述失控可能原因和客户实际情况，分析该实验室IQC失控原因可能为质控品临用前准备不充分。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析三、处理：1.建议准确复溶质控品，复溶混匀至少30分钟后再将其分装成数小支，并在说明书规定的复溶后稳定期内使用。2.每次做IQC测定前，从冰箱中取出一小支室温放置解冻和混匀30分钟左右，然后再进行测定，使用后剩余部分密闭避光置2～8℃当天使用或按说明书规定的稳定期内使用，切忌反复冻融使用。3.几天后回访，反映近几日观察，大部分项目天间精密度明显好转，IQC未出现失控现象。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析四、分析：就IQC的标本准备工作进行一些实验，实验情况大致如下：1.分别取新鲜临床标本1、临床标本2、伯乐公司液体生化质控品、英国朗道干粉质控品复溶后各2mL装入康氏试管中，并即时进行密闭避光冰冻保存；2.次日取出室温静置解冻，5分钟后分别吸取上中下层三份液体各300微升，再分别充分混匀并同时进行TP、ALB等20余个生化项目检测。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP、ALB试剂作室内质控较差分析3.结果发现临床标本外观透明度呈明显的梯度变化，上层清亮、底层混浊，干粉质控品透明度也有一定的梯度变化，液体生化质控品由于其在-15～-20℃仍保持液态而没有改变出现外观分层现象，其不同层面液体检测结果见附表。ISO15189实验室认可系列培训讲座辽宁中医药大学附属医院临床检验中心TP29.763.7137.223.471.9154.366.066.066.039.258.899.3Alb21.545.375.815.945.481.344.444.344.126.738.459.5TP、ALB试剂作室内质控较差分析4.从表中可看出临床标本和干粉质控品静态解冻后不同层面液体检测结果差距甚大，而液体生化质控品无明显差异。5.分析产生上述结果的可能原因蛋白质冰点低（白蛋白崩解温度为-10℃左右），先解冻，未解冻冰块由于密度低而始终浮于液面，因此导致蛋白质聚集底部，从而导致外观自上而下逐渐变混浊，进而导致底部