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1国内原发性肝癌的中医药动物实验采用的组方和方法小组成员：成高雅葛程顾婷婷金文玉司嘉琪奚善君许贇姣2教师提出的问题国内原发性肝癌的中医药动物实验采用了哪些组方或方法，与临床报道异同，为什么？我们发现的问题我们的分工•成高雅葛程金文玉—国内原发性肝癌的中医药动物实验采用了的组方或方法•顾婷婷司嘉琪奚善君许贇姣—这些实验中采用的方法与临床报道异同3文献检索所采用的具体方法•我们采用以下关键词在CNKI以及VIP等数据库进行了大量文献检索原发性肝癌、辨证论治、证候大鼠、小鼠、证候动物模型、动物实验•同时，我们还参阅了《中医内科学》等课本进行参照进一步分析讨论4中草药中成药国内原发性肝癌的中医药动物实验采用的组方和方法清热解毒活血化瘀软坚散结收敛固涩健脾理气补益气血滋养肝阴活血化瘀健脾理气清热解毒消癥散结祛邪：扶正：51.祛邪：清热解毒：半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草等活血化瘀：桃仁、丹参、赤芍、八月札、茵陈、郁金、柴胡、莪术等软坚散结：鳖甲、牡蛎、山慈菇等收敛固涩:椿皮、乌梅、山茱萸等中草药62.扶正：健脾理气：黄芪、白芍、白术、薏苡仁、神曲、法夏、云苓等；补益气血：黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、熟地、白芍、川芎、当归滋养肝阴：生地、鳖甲、牡蛎、女贞子7常用方剂：健脾理气方（党参、白术、茯苓、八月札、甘草等）；补脾益气方（四君子汤加黄芪）；十全大补汤（黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、熟地、白芍、川芎、当归）；扶正抑瘤方（黄芪、灵芝、女贞子、山药）；养阴柔肝方（由北沙参、麦冬、鳖甲、当归等18味中药组成）；百合地黄汤（百合、地黄）。2.扶正：83.扶正祛邪合用：温阳散结：人参、附子、黄芪、白术、川椒、莪术、青皮、白芍、甘草等解毒消癥饮:白花蛇舌草、山慈姑、夏枯草、苦参复肝春六号:黄芪、女贞子、牡蛎、鳖甲、莪术、白花蛇舌草、薏苡仁、半枝莲、桔梗等93.扶正祛邪合用：扶正化瘀319方:由虫草菌丝、桃仁、丹参等6味中药组成扶正抗癌方:西洋参、白术、鳌甲、穿山甲、急性子、石见穿、龙葵、漏芦、核桃树枝等养阴解毒方:北沙参、虫草菌丝、七叶一枝花和莪术等10中成药活血化瘀：大黄螫虫丸、鳖甲煎丸健脾理气：益气免疫冲剂（四君子汤加减）清热解毒，消癥散结：清肝消癥丹（成分：蟾蜍、蟑螂等）解毒散结、活血化瘀：鳖甲煎丸和大黄蛰虫丸联合蟾蜍制剂疏肝理气，化瘀通络，健脾和胃：肝康宁（成分：螺旋藻粉、菊花、陈皮、山楂）解毒，消肿，止痛：华蟾素（成分：干蟾皮提取物）11国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例•不同治则对DEN诱发大鼠肝癌作用的比较研究动物造模及分组：Wistar大鼠，雄性，体重100—120g，自由饮用60—80ppmDEN水溶液，直到24周末实验结束。将70只大鼠随机分为7组，每组10只，分别为正常组、模型组、西药组、全方组、清热组、活血组、健脾组。西药组加用西药FT-207；全方组加用清热解毒、活血健脾理气中药，全方由清热、活血、健脾方合并而成；清热组用清热解毒中药，清热方由半枝莲、白花蛇舌草等组成；活血组用活血化癖中药，活血方由桃仁、丹参等组成；健脾组用健脾理气中药，健脾方由黄芪、白术等组成。中药的制备与给药方法：中药水煎剂按2：3比例兑入乙醇，4°C静置48h，过滤，浓缩至1ml含2g生药，4°C存放。FT-207用双蒸水溶解，4°C存放。各组药物均于下午19时加入饮水中给药。剂量均为成人单位体重的10倍量。•不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的研究12肝癌动物模型•二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌：取体重250g左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。按性别分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用0.25轓水溶液灌胃，剂量为10mg/kg，每周一次，其余5天用0.025轓水溶液放入水瓶中，任其自由饮用。共约4个月可诱发成肝癌。或单用0.005%掺入饮水中口吸服8个月诱发肝癌。•4-2甲基氨基氮苯（DBA）诱发大鼠肝癌：•2-乙酰氨基酸（2AAF）诱发大鼠肝癌：•亚胺基偶氮甲苯（OAAT）诱发小鼠肝癌：13国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例•大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究药物制备：取大黄螫虫丸(上海雷允上药业有限公司提供，生产批号:040501)置煎煮容器内，加适量的冷水浸泡1～2h，煮沸30min，过滤。药渣加3～5倍量水继续煎煮，煮沸20min，过滤。合并两次滤液，于水浴上浓缩成相当于原生药材1g/mL的药液，冷却装人灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。实验方法造模方法：无菌条件下取生长7～9d传代接种的H22细胞株，将细胞5x106接种于每只小鼠右侧腋窝皮下。动物分组及给药方法：小鼠30只，10只作为正常组，其余均按上法造模。小鼠接种肿瘤5d后，随机分成对照组和实验组，每组10只，对照组予以生理盐水处理，实验组给予大黄蛰虫丸水煎液1g/mL该剂量通过LD50确定，均灌胃0.2mL/只，连续给药15d。14国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例•清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药，并与补益代表药黄芪进行比较将50只KM小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、黄芪组和热休克处理对照组(热休克组)。在活体肝癌H22腹水细胞腹腔接种后当天，冬凌草组、半枝莲组和黄芪组分别以30、15、15g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药，连续12d；热休克组小鼠以43℃热处理20min，每4天1次，共3次；模型组不予任何处理。12d后处死小鼠．分别抽取腹水制片，光镜下观察细胞形态，并采用免疫组化法检测腹水CD4+、CD8+T细胞表达。15这些实验研究中存在的异同肝癌小鼠造模的不同给药方式的不同•抑癌扶正行气活血方(半枝莲、白花蛇舌草、桃仁、丹参、黄芪、白术等),清热方(半枝莲、白花蛇舌草等)、活血方(桃仁、丹参等)、健脾方(黄芪、白术等)。采用标准的水煎醇沉工艺制备的中药及西药加工混合于喂养大鼠的颗粒饲料中，作为一种治疗方式。•用清热解毒、活血化安和健脾益气方药治疗时，将中药水煎剂提醉、过滤、浓缩后加入饮水中给药。•大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究中，水煎液1g/mL该剂量通过LD50确定，均灌胃0.2mL/只，连续给药15d。用清热解毒、疏肝理气、活血化瘀治法组方时，可以通过采用灌胃的给药方式。•肝康宁和华蟾素可用局部注射的给药途径。16国内原发性肝癌的中医药动物实验研究的治法与临床异同动物实验临床试验同①清热解毒：半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草②活血化瘀：大黄螫虫丸，莪术、三棱、郁金、赤芍、桃仁③健脾理气：以四君子汤为基础方，如益气免疫冲剂（四君子汤加减），健脾理气方（党参、白术、茯苓、八月札、甘草等），补脾益气方（四君子汤加黄芪）④滋补肝阴肝血：生地、女贞子、鳖甲、当归⑤所用的经方：四君子汤、小柴胡汤、四君子汤加减⑥选用华蟾素注射液异①滋阴凉血、清热润肺的百合地黄汤②自拟方剂如扶正化瘀319方、扶正抑瘤方等③收涩类中药①化湿②以毒攻毒③疏肝理气④滋补肝阴肝血选用的方剂范围更大，使用的中药更多更复杂17临床用药与实验研究药物的异同及其可能原因•临床上，治疗原发性肝癌以经方、名方偏多,出现频次最多的前20种依次排列如下:一贯煎、逍遥散、茵陈蒿汤、四君子汤、龙胆泻肝汤、膈下逐瘀汤、柴胡疏肝散、补中益气汤、小柴胡汤、香砂六君子汤、参苓白术散、茵陈五苓散、六君子汤、血府逐瘀汤、知柏地黄汤。•而在已有实验中，我们确实可以看到对于四君子汤、小柴胡汤等的实验研究，但是对于临床上的常用方的研究并不全面。18临床用药与实验研究药物的异同及其可能原因•而我们所查找到的文献中，有相当数量的文献进行动物实验研究的是一些上市成药如复肝春6号、木回春片、自制中药复方等。•我们小组讨论认为可能与以下原因有关：a)新药的研发与推广需要b)研究的难易度（实验设计的难度、结果获取难易度、成效的预期等因素）c)科研的一些其他软硬件问题（如经费、科研设施、研究人员等）19在中医药动物实验研究中应注意的问题•中医动物实验研究应以中医理论为指导•中医动物实验研究应从中医临床出发•中医动物实验研究应突出中医治疗原则•中医动物模型不能照搬西医动物模型20中医药动物实验研究的发展趋势随着现代医学的发展，实验研究越来越受到人们的重视。经过近几十年的不懈努力，我国目前已建立中医动物模型150余种，这仅仅是初步的探索，还有待于进一步研究。中医药只有通过大量实验研究，借用现代医学先进技术和方法，才能使中医药逐渐发扬光大，逐步走向世界，为人类健康事业做出更大贡献。21参考文献1.包素珍等.中国中医药科技[J].百合地黄汤对肝癌H22荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研究.2006.13（5）:332.2.管冬元等.上海中医药大学学报[J].不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的究.2001.9（15）:41-46.3.王洪涛等.河北中医[J].原发性肝癌中医辨治体会.2009，31（8）:1168-1169.张军民，张会民，贾红敬，现代医药卫生[J].中西医结合治疗原发性肝癌51例疗效观察.2007，23（10）:1524-1525.4.闫建国等.中西医结合肝病杂志[J].中医对原发性肝癌的辨证研究及治疗.2010；20（3）:189-1905.李大鹏等.今日药学[J].原发性肝癌的中医药治疗研究新进展临床研究.2008，18（3）:13-15.6.刘庆等.中西医结合学报[J].原发性肝癌的中医治法与方药.2005，3（4）:260-262.7.姜胜攀.中医杂志[J].原发性肝癌的中医治则治法与方药刍议.2010，（51）:93~94.8.王洪琦等.广州中医药大学学报[J].清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌H22细胞的作用及免疫学机制比较.2006，3（23）:156-159.9.孙静.中药新药与临床药理[J].收涩类中药对小鼠肝癌血道及淋巴道转移的影响.2008.9（19）:347-350.10.周阿高等，中成药[J].大黄蛰虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究.2006.12（18）:1772-1774.11.孙保国等.中药材[J].复方中药对裸鼠肝癌模型的抗癌作用研究.2007.11（30）:1417-1421.22Thankyou