关于微生物限度检查验证报告的问题

05.12.301起草的指导思想:完善检查法.增加试验的可操作性.使方法更具科学性，保证检验结果的准确性.与国际接轨.微生物限度检查法05.12.302●验证的目的:确认所采用的方法适合于供试品的微生物限度检查。●验证的意义：保证检验结果的准确、可靠及检验方法的完整性。05.12.303●微生物限度检查法验证的必要性理论、试验结果●验证的内容准确性(回收率)、专属性05.12.304验证的类型●前验证:建立药品的微生物限度检查法时.●再验证:修订的检验方法;供试品的组分或原检验条件发生改变可能影响检验结果时;定期的方法验证.05.12.305验证用菌株：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉、枯草杆菌。菌株选择的原则:代表性,普遍性,低或非致病性,标准菌株(或该药品中常见的污染菌)。菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。菌液制备:50～100cfu。细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑴05.12.306细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑵验证方法试验组菌液组稀释剂对照组供试品对照组05.12.307细菌、霉菌、酵母菌计数方法的验证⑶结果判断：供试品组的菌回收率、对照组的菌回收率。判断标准:菌回收率均不低70%。05.12.308控制菌检查修订特点:减少篇幅不作具体生化试验的规定增加鉴定方法适应微生物分类变化要求增加控制菌检查项05.12.309控制菌检查法的验证⑴试验菌株：按规定检查的控制菌选择相应验证的菌株。阴性对照菌株:金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、梭菌用大肠埃希菌；大肠埃希菌、沙门菌、大肠菌群用金黄色葡萄球菌。菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。菌液制备:10～100cfu。05.12.3010控制菌检查法的验证⑵验证方法：试验组、阴性菌对照组。结果判断：试验组应检出、阴性菌对照组不得检出。05.12.3011药品微生物限度检查法验证试验结果不符合要求的处理方法中和法培养基稀释法薄膜过滤法离心沉淀法联合方法05.12.3012供试液制备●表面活性剂、中和剂或灭活剂：应证明其有效性及对微生物的生长和存活无影响。●供试液从制备至加入检验用培养基，不得超过1小时。●供试液制备若需用水浴加温时，温度不应超过45℃。●供试液的体积：100ml。非水溶剂供试品增加:十四烷酸异丙酯法05.12.3013注意●薄膜过滤法的验证实验中,冲洗剂和冲洗量需验证.●菌液的稀释过程。●霉菌酵母菌温度为23-28℃。●沙门菌的供试品检验量应增加为10g及10mL。●05.12.3014无菌检查法验证(1)试验菌株：金黄色葡萄球菌.铜绿假单胞菌.白色念珠菌.枯草杆菌.黑曲霉.生梭胞菌。菌液制备:小于100cfu。供试品：按规定量取样.05.12.3015无菌检查法验证(2)验证方法：薄膜过滤法、直接接种法。结果判断：培养基应澄清。或虽显浑浊但经确证无菌生长,判供试品符合规定。05.12.3016注意●供试品检验数量,薄膜过滤法应增加1/2的最小检验数量作阳性对照,直接接种法,应增加1支作阳性对照。●在薄膜过滤法中,冲洗剂和冲洗量需验证。●直接接种法中,若阳性阳性结果微生物生长缓慢.微弱,可采用薄膜过滤法,并重新进行方法验证。05.12.3017注意●2005年版药典中稀释剂.冲洗剂改为0.1%蛋白胨溶液或ph7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液。●非水溶剂供试品增加:十四烷酸异丙酯法。●无菌实验尽量采用薄膜过滤法。