免疫室作业指导书1

ISO15189质量管理体系范本文件（第四册）免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01~52第A版编制：审核：批准：生效日期：2012年8月5日湘西州人民医院检验科湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20120805第2页共83页目录序号主题内容代号页号1血清乙型肝炎病毒表面抗原检测ABCD-3-MY-0142血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ABCD-3-MY-0273血清乙型肝炎病毒e抗原检测ABCD-3-MY-03104血清乙型肝炎病毒e抗体检测ABCD-3-MY-04135血清乙型肝炎病毒核心抗体检测ABCD-3-MY-05166甲型肝炎病毒--IgM检测ABCD-3-MY-06197血清丙型肝炎病毒抗体检测ABCD-3-MY-07228人类免疫缺陷病毒抗体检测ABCD-3-MY-08259梅毒螺旋体特异性抗体检测ABCD-3-MY-092810免疫球蛋白A（IgA）测定ABCD-3-MY-103011免疫球蛋白M（IgM）测定ABCD-3-MY-113312免疫球蛋白G（IgG）测定ABCD-3-MY-123613补体C3测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-133914补体C4测定（免疫比浊法）ABCD-3-MY-144215类风湿因子（RF）测定ABCD-3-MY-154516抗链球菌溶血素O（ASO）测定ABCD-3-MY-164817C反应蛋白（CRP）测定ABCD-3-MY-175118支原体肺炎血清学试验ABCD-3-MY-185419血(尿)b2-MG微球蛋白定量测定ABCD-3-MY-195620肌红蛋白定量测定ABCD-3-MY-206021微量加样器的质控ABCD-3-MY-216422酶标分析仪操作维护规程ABCD-3-MY-226723全自动酶标洗板机操作维护规程ABCD-3-MY-2369湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20120805第2页共83页24特种蛋白测定仪操作维护规程ABCD-3-MY-247025免疫学室内质量控制操作程序ABCD-3-MY-257526免疫学检验室间质量评价（EQA）ABCD-3-MY-2680湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20120805第2页共83页血清乙型肝炎病毒表面抗原检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝表面抗体，配以酶标记抗体（HBsAb-HRP）及TMB等其它试剂，采用双抗体夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗原（HBsAg）。2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。4.标本运输：密封，室温运输。5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：珠海丽珠试剂股份有限公司。6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAg微孔板，HBsAg酶标记抗体，HBsAg阳性对照血清，HBsAg阴性对照血清，浓缩洗涤液，样品稀释液，底物缓冲液，底物液，终止液，封板膜，封口袋，使用说明书。6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12个月。7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：BioTek7.3仪器型号：Elx8008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以封口袋封存。8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20120805第2页共83页8.3编号：将固微孔条定于支架，按序编号。8.4加样：加入25ul样品稀释液于反应孔中。每次实验设阴性对照3孔，阳性对照2孔，加阴、阳性对照各75ul；设空白对照1孔，不加样。其余各孔加入待测样品75ul，振荡混匀。8.5温育：置37℃温育60分钟。8.6加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul，振荡混匀。8.7温育：置37℃温育30分钟。8.8洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗涤液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。8.9显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，置37℃温育30分钟。8.10终止：每孔加终止液50l，混匀。8.11读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（须以空白对照调零）或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照平均A值+0.09，阴性对照A值应≤0.1，试剂空白A值应＜0.05。9.2结果判定：样品A值≥临界值，说明该样本初始反应阳性，应进行复检。样品A值＜临界值，说明该样本无反应性。10.质量控制每次试验用含0.2IU/ml和2IU/mlHBsAg的质控血清同步检测，以S/CO值绘制质控图，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11.参考范围：阴性12.临床意义：在血清中HBsAg的存在表明有急性乙肝或慢性乙肝或为无症状携带者。13.操作性能：灵敏度为ng/ml，特异性高。14.方法局限性14.1.对于病毒复制较强的病人，病毒量较大，出现HOOK现象，造成假阴性，须将病人血清进行稀释后再重新试验。14.2.如出现跳孔现象可能造成假阳性。14.3.样品显色深浅与样品中抗原的含量没有一定正相关。湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-01版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗原检测生效日期：20120805第2页共83页15.注意事项15.1.每板建议设阴阳性对照孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2.洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3.加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1—2滴。滴加时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4.所有样品都应按传染源处理。15.5.封板膜使用说明。15.5.1.微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封板膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封板膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2.微孔板温育时，以封板膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6.不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照，肉眼判读；无法准确判读者，应留样待系统正常后复查。17.参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编。全国临床检验操作规程（第二版）410-412页。18.其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格”防伪标签的试剂。湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-02版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗体检测生效日期：20120805第7页共83页血清乙型肝炎病毒表面抗体检测（ELISA）1.原理在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗原，配以酶标记抗原（HBsAg-HRP）及TMB等其它试剂，采用双抗原夹心法原理检测人血清（或血浆）中乙肝表面抗体（HBsAb）。2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml（可用EDTA抗凝），室温放置不超过4小时，分离血清备用。3.标本储存：2-8℃保存不应超过1周，-20℃不应超过3个月，-70℃长期保存，应避免反复冻融。4.标本运输：密封，室温运输。5.标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒表面抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：珠海丽珠试剂股份有限公司。6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAb微孔板，HBsAb酶标记抗原，HBsAb阳性对照血清，HBsAb阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物缓冲液，底物液，终止液，封板膜，封口袋，使用说明书。6.5试剂储存条件及有效期：2-8℃避光保存，有效期12个月。7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：BioTek7.3仪器型号：Elx8008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25℃），微孔板开封后，余者及时以封口袋封存。8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-02版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗体检测生效日期：20120805第8页共83页离子水按1：19稀释后使用。8.3编号：将微孔条固定于支架，按序编号。8.4加样：每次实验设阴性对照3孔，阳性对照2孔，加阴、阳性对照各50ul；设空白对照1孔，不加样。其余各孔加入待测样品50ul。8.5加酶：空白对照不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul。8.6温育：置37℃温育30分钟。8.7洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗涤液注满各孔，静置30～60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。8.8显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，振荡混匀，置37℃温育15分钟。8.9终止：每孔加终止液50l，混匀。8.10读值：用酶标仪读值，在单波长450nm（须以空白对照调零）或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。9.结果判断与分析9.1临界值（C.O.）的计算：临界值=阴性对照孔A值×2.1,阴性对照A值应≤0.1，试剂空白A值应＜0.05。9.2结果判定：样品A值≥临界值为HBsAb阳性样品A值＜临界值为HbsAb阴性10.质量控制每次试验用含20mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测，S/CO值应在控制范围内；如失控，则要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确，直至重新试验使其在控。11.参考范围阴性或阳性12.临床意义HBsAb阳性表明存在HBV的保护性抗体。13.操作性能：灵敏度高，特异性好。14.方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关。15.注意事项15.1每板建议设阴阳性对照血清孔，设空白对照时，不加样品及酶标记抗体，其余各步相同。15.2洗涤时各孔均须加满，防止孔口内有游离酶未能洗净。15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次，使液体混匀。如果滴加，滴加前应弃去1～2滴。滴加湘西州人民医院检验科免疫室作业指导书文件编号：ABCD-3-MY-02版本/修订号：A/0主题内容血清乙型肝炎病毒表面抗体检测生效日期：20120805第9页共83页时瓶身应保持垂直，以使滴量准确。注意勿将试剂滴在孔壁上。15.4所有样品都应按传染源处理。15.5封板膜使用说明15.5.1微孔板拆封后，在取出当天所需的微孔条后，其余微孔条可以封板膜封存以避免受潮。在封存时，注意勿把封板膜粘贴到微孔条底部，以免影响其透光性。15.5.2微孔板温育时，以封口膜覆盖孔口，可避免其他因素对实验带来的非预期的影响。15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用，以免产生错误结果。16.当检测系统（仪器）不能工作时，所采取的补救措施：应保证所有操作步骤正确无误；可以比