0100 细胞培养的设施与基本条件

Chapter1细胞培养的设施与基本条件◆细胞工程实验室的设置◆常用仪器与设备◆实验室的生物安全•细胞工程实验室设计–原则防止微生物污染和有害因素影响–要求工作环境清洁、空气清新、干燥和无烟尘划分不同功能区或用铝合金隔板隔开无菌操作区应在室内较少走动的内侧清洗和消毒安置在另室◆动物细胞培养室的设置◆植物细胞培养室的设置◆温度：一般控制在25±2ºC◆光照：光强、光质、光照时间Chapter1细胞培养的设施与基本条件◆细胞工程实验室的设置◆常用仪器与设备◆实验室的生物安全一、动植物细胞工程实验室通用仪器设备超净工作台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。超净工作台的原理倒置显微镜水纯化装置自动双重纯水蒸馏器纯水器冰箱■普通冰箱（4℃，－20℃）■低温冰箱（－20℃）■超低温冰箱（－80℃）电热干燥箱■烘干和干热灭菌玻璃器皿■100度以下时再打开箱门■金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒压力蒸汽消毒器湿热灭菌，用途广过滤除菌装置细胞计数板或计数仪其它常用仪器设备◆离心机和离心管◆移液管和吸管◆移液器◆天平等二、动物细胞工程实验室常用设备CO2培养箱CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒（90℃，14h)。③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避免培养液蒸发。显微操作仪显微操作法进行细胞核移植细胞电融合仪细胞冷冻储存器——液氮罐液氮温度：－196℃不断挥发，及时补充培养用器皿•玻璃器皿•塑料器皿•培养瓶•培养皿•培养板•多孔培养板4、6、24、96孔•培养皿30、60、100毫米•培养瓶500毫升、250毫升、100毫升培养板手术器械主要用于动物组织取材、解剖•器械–解剖刀–解剖剪–虹膜剪–镊子•注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长三、植物细胞工程实验室常用设备光照培养箱人工气候室摇床培养瓶Chapter1细胞培养的设施与基本条件◆细胞工程实验室的设置◆常用仪器与设备◆实验室的生物安全生物安全防护水平（BSL）由一级防护屏障（安全设备）和二级防护屏障（实验室设施）组合构成四级生物安全水平。•一级生物安全防护水平（BSL－1）•二级生物安全防护水平（BSL－2）•三级生物安全防护水平（BSL－3）•四级生物安全防护水平（BSL－4）生物安全一级(BSL-1)：适合于非常熟悉的病源，不会经常引发健康成人疾病，对实验人员和环境潜在危险小。一般也不使用特殊的遏制设备和设施。生物安全二级(BSL—2)：适合于对人和环境有中度潜在危险的病源，应在生物安全柜中或其它物理遏制设备中进行。生物安全三级(BSL—3)：该会引发严重的、可能致死的疾病的病源。在生物安全柜或其他物理遏制装置中进行，或由穿戴合适防护服及设施的实验人员进行。实验室经过特殊设计和施工。生物安全四级(BSL—4)：处理特别危险的传染源Pneumococcus:肺炎球菌Salmonella：沙门氏菌Hepatitis:肝炎LymeDisease：莱姆病Influenza:流感Anthrax:炭疽Typhus：斑疹伤寒HIV:Ebola:埃博拉Lassa：拉沙热Hantavirus:汉坦病毒电影《OUTBREAK》片段Summary：细胞培养的基本条件无菌条件：净化工作室，高效过滤器，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器细胞保存条件：液氮罐实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全