南山妇幼 LH750 SOP

BeckmanCoulter全自动血细胞分析仪LH750标准操作流程SOP使用单位：深圳市南山区妇幼保健院仪器编号：AM42336LH750血液分析仪标准操作流程目录1仪器名称及型号、安装环境要求2应用范围3测试原理及参数、参数设置、检测范围4系统状态5开机前准备6试剂准备及检查7开机方法8校准9质控品10常规操作步骤11测试结果的察看、审核与修改12急诊标本操作13保养维护14特殊操作程序15告警及处理16仪器工作条件17其他注意事项18参考文件1.①仪器名称及型号：贝克曼库尔特全自动血液分析仪，型号为：LH750②安装环境要求：温度：（10-30℃）,相对湿度：（30-60%）电压波动范围:(220~240V)±10%,电流耐受:≥5.0A,线路频率:50~60HZ2．应用范围适用于LH750全自动血液分析仪的使用3．①检测原理及参数红细胞、白细胞和血小板计数原理：电阻抗法（库尔特原理），根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞。白细胞五分类原理：VCS技术，VCS中V是双电极的直流特性，即利用库尔特原理测量出原态白细胞的体积大小。C是射频传导特性，由流式池内的双电极加高频电流测得，主要反映细胞的核质比大小。S代表激光散射性，反映细胞在聚焦点时的形状和表面特性，与细胞的皱折和表面积大小有关。通过VCS的综合分析对细胞进行准确的分类。网织红细胞计数及分类原理：计数（库尔特原理），根据血细胞的不良导电性和产生电阻抗原理来计数血液中的细胞。分类：非荧光染料新亚甲基兰，着色网织红细胞内的RNA，以区分成熟的红细胞；酸性低渗的脱蛋白溶液脱去网织红细胞内的血红蛋白，只保留染色的RNA。利用VCS技术对其分类。血红蛋白：氰化高铁血红蛋白比色法②检测参数：白细胞总数(WBC)红细胞计数(RBC)有核红细胞百分比(NRBC%)中性粒细胞%(NE%)血红蛋白(HgB)有核红细胞计数(NRBC#)中性粒细胞#(NE#)红细胞压积(HCT)网织红细胞百分比(RET%)淋巴细胞%(LY%)平均红细胞体积(MCV)网织红细胞计数(RET#)淋巴细胞#(LY#)平均红细胞血红蛋白含量(MCH)平均球形细胞体积(MSCV)单核细胞%(MO%)平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)不成熟网织红细胞分数(IRF)单核细胞#(MO#)红细胞分布宽度(RDW)平均网织红细胞体积(MRV)嗜酸性细胞%(EO%)血小板计数(PLT)高散光网织红细胞计数(HLR#)嗜酸性细胞#(EO#)平均血小板体积(MPV)高散光网织红细胞百分比(HLR%)嗜碱性细胞%(BA%)血小板压积(PCT)嗜碱性细胞#(BA#)血小板分布宽度(PDW)③本底参数设置白细胞：0-0.2x109/L，红细胞：0-0.01x1012/L，血红蛋白：0-2x10g/L，血小板：0-3x109/L,网织红细胞：0-600x109/L，细胞分类：0-10NA压力水平设置60PSI压力水平：60±5PSI，30PSI压力水平：30±1PSI，5PSI压力水平：5±0.1PSI,真空水平：22in.Hg,AC线路(输入电压)水平:210-250V④检测范围白细胞线性：0-4x1012/L，红细胞线性：0-8x1012/L，血红蛋白线性：0-250g/L，血小板线性：0-3x1012/L4．系统状态仪器分为分析器、稀释器、数字键盘等部分。分析器屏幕有显示仪器当前状态：“READY”表示待机状态，见下图；数字键可执行部分功能，见下图5开机前准备检查电源是否连接好、试剂是否已经上机、试剂量是否充足6试剂准备与检查仪器使用试剂共5种：稀释液、溶血剂、分类试剂、清洁剂、网织红细胞试剂。这些试剂无需配制，直接上机使用即可，在使用前先检查试剂是否在有效期内、外观是否完好无泄漏等。7开机方法及注意事项开机(1)打开电脑，显示登陆框（logon）。(2)输入操作者名和密码（事先设置），按进入。(3)打开电源箱左侧的电源总开关；(4)15秒钟后，按分析器键盘的；(5)检查电压和压力水平是否在正常范围内；(6)开机程序结束，分析器键盘屏幕和分析器屏幕显示“READY”；执行开机(STARTUP)程序(1)在稀释器键盘，按，仪器将自动执行开机程序；(2)循环结束后，在电脑显示屏查阅结果：选择主菜单上的，然后再选择，可查阅当天的STARTUP结果；如果想查看以往的开机结果，选择进一步查看；选择可查看开机测试的详细情况或选择，查看本底测试结果。关机每日关机程序(每24小时执行)(1)在稀释器键盘按，等待程序结束，让清洁剂在管道中浸泡至少30分钟(2)在稀释器键盘按；(3)在电脑的主菜单，选择。当显示“Restart”框，关闭电脑电源。延长关机程序(关机长达3～7天时执行)(1)在稀释器键盘按，等待程序结束，让清洁剂在管道中浸泡至少30分钟；(2)取出网织红细胞染色试管，用去离子水清洗盛放试管的容器；(3)移去剩余试剂，换上去离子水；(4)按，用去离子水充盈管道；(5)用[F][1][7]功能，以去离子水冲洗清洁剂泵；用[F][6][7]功能，以去离子水冲洗所有试剂管道；(6)按，关闭系统，关闭电脑；当再次开机时：(1)打开电脑；(2)按打开分析器；(3)用[F][6][7]功能4次去除分析器中去离子水；按去除清洁剂管道中去离子水；用[F][1][7]功能去除清洁剂泵中去离子水；(4)换上试剂；(5)用[F][3][1]功能和[F][6][7]功能充盈管道，用[F][1][7]功能冲洗清洁剂泵；(6)执行STARTUP程序，进入日常操作。8校准校准方法(1)校准使用贝克曼库尔特公司配套血球校准品S-CAL，校准血球仪的WBC、RBC、HGB、MCV、PLT、MPV6项参数，校准参数的溯源性如下：WBC、RBC：一个单孔阻抗血球计数器（诸如COULTERZTM系列血球计数器）和制造商推荐的试剂。用A级量瓶进行高倍稀释，对WBC和RBC的数据都进行重叠校正，这一标准品的红细胞白细胞的测量（分析）都可以溯源至ClinLabHaemat，1994，16（2）：131-138HGB：本标准品中的被测血色素物理量（分析对象）源于NCCLS标准H15-A3。该血红蛋白氰化物分光光度法程序使用修改过的Drabkins（Ziljstra）试剂，并且以NIST核准的过滤器为参考MCV：MCV计算方法：PCV/RBC×10。血球容积比（PCV）根据NCCLS标准H7-A3使用红细胞压积处理程序进行测量。PLT：相差显微镜MPV：胶乳颗粒(2)校准需要的试剂，除校准品S-CAL外，需要常规配套的稀释液、溶血剂、清洁剂等(3)校准步骤如下：a仪器执行必要的流路清洁保养b从分析器菜单选择：MANU→ANALYZERFUNCTION→STARTUPTEST→BACKGROUNDTEST，做本底测试，需要通过，各参数本底要求如下：WBC：≤0.20×109/LRBC：≤0.010×1012/LHGB：≤2.0g/LPLT：≤3.0×109/Lc在电脑菜单进入携带污染菜单内，连续检测高值样本一支、中值样本1支、稀释液3支，做携带污染测试，仪器自动计算携带污染结果，需要通过，各参数携带污染要求如下：WBC≤2.0RBC≤1.0HGB≤2.0PLT≤2.0d在电脑菜单进入重复性测试菜单内，选择足量的中值样本，连续检测11次，去除第一次结果，仪器自动计算精密度CV%，需要通过，各参数的精密度要求如下：WBC≤1.7%RBC≤0.8%HGB≤0.8%MCV≤0.8%PLT≤3.3%MPV≤2.2%e在电脑菜单进入校准菜单，将校准品S-CAL回温后混匀，输入批号、有效期及靶值，上机检测11次，去除第一次结果，仪器自动计算剩余10次的均值，并根据检测均值、靶值及旧校准系数计算出新的校准系数，使电脑接收新的校准系数(4)校准后的验证使用仪器配套5C质控品验证校准是否有效，上机检测5C质控品，各参数检测值都应落在预期值范围内9质控品常用质控品的介绍常用的库尔特质控品有全血带白细胞五分类的三水平质控品（5C质控）、网织红细胞质控品。5C质控是人造全血，其成分模拟全血中各类细胞，用以监控仪器的全血计数和白细胞分类准确度；网织红细胞质控品是人造全血，其成分模拟全血中红细胞和网织红细胞，用以监控仪器对网织红细胞检测的准确度。质控品使用要求需要在有效期内检测，未开瓶质控品可在2-8摄氏度环境下保存之有效期，开瓶后可在2-8摄氏度环境下保存7天，室温下使用后马上放回2-8摄氏度环境中质控文件的建立1．从主菜单屏幕选择系统设置菜单；2．再选择质量控制设置菜单；3．再选择质控子菜单；4．如果是新建质控文件，选择，选择质控品来源（BCI、Others、Patient），选择质控品类型（CBC、CBC+DIFF、LATEX、RETIC），选择质控品的水平（High、Normal、Low）5.选择来建立质控品的批号、有效期，以及各参数的参考值及范围。10质控自动模式运行5C质控品（1）．请确认质控文件已经建立。（2）．将5C质控品从储存环境中取出，室温下放置15分钟使其回温。（3）．将质控品依照低水平、中水平、高水平插入自动进样架，请注意将质控条形码朝上。（4）．将自动进样架上机检测。手动模式运行5C质控品（1）．请确认质控文件已经建立；（2）．将5C质控品从储存环境中取出，室温下放置15分钟使其回温；（3）．在分析器键盘，按，再按，将质控品的8位批号输入，再按；（4）．将质控品手动上样检测。质控结果的观察1．在电脑屏幕，从主菜单选择，再选择菜单；2．在屏幕左上方可看见菜单，双击，进入菜单，再双击，进入菜单，再双击，进入具体质控文件，打开相应质控文件，在屏幕右方可察看相应的结果。质控结果出控分析及措施介绍请参照下表进行质控品的出控处理。表1：对5C质控出控的分析和措施可能性措施混匀不恰当重新对质控品进行8×8×8式混匀，再检测在质控文件中设置的数据有误确认质控文件中的设置数据，若有错，则改之偶然性出控(统计学允许)重新检测,如果结果依然超出范围,考虑下一个因素质控品问题,如:过期、被污染和变质换一瓶或换一个批号的质控品再试仪器问题请公司的工程师帮助解决,可能的话先检查标本流程10常规样本操作步骤样本的采集根据标本管生产商的使用说明，采集EDTA盐抗凝的全血：NCCLS公布的H4-A3（末梢血）NCCLS公布的H3-A3（静脉血）BeckmanCoulter推荐您使用EDTA二钾或三钾盐。重要提示如果试管盖与标本之间未留有空隙则可能产生错误的结果。应确保在试管盖与标本之间留有空隙以利于混匀标本。同时亦应确保在测定前已适当地混匀了标本。当准备末梢血标本时，请遵从生产商的指导使用微量采样器。当使用自动吸样模式时，为使血液与抗凝剂达到适宜的比例，将1.0mL的标本。单一LH750系统，仪器将最多吸取300μL（0.3mL）的全血标本。LH750SM涂片系统，仪器共需550μL（0.55mL）标本，制片需吸取250μL（0.25mL）。当使用手工吸样模式时，仪器将吸取近200μL全血标本。样本的储存为达到最佳的准确度，应尽快测定标本。静脉血标本用于血细胞计数和分类：若标本采集后储存于室温下（23.9℃或75℉）应于24小时之内测定。若标本采集后储存于2-8℃（35.6-46.4℉）应于48小时之内测定。用于网织红细胞计数：若标本采集后储存于室温下（23.9℃或75℉）应于24小时之内测定。若标本采集后储存于2-8℃（35.6-46.4℉）应于72小时之内测定。末梢血标本请遵从生产商的指导使用微量采样器。常规样本测试步骤在主菜单选择菜单，再选择菜单，如果样本为连续输入，可选择，选择需要的条件并输入相应的起始架号和样本号，输入完毕后保存推出，调出起始号开始不断累加，累加完毕后保存推出，将自动进样架上机，仪器将自动检测。11检测结果察看、审核及修改(1)当前结果的查看1．在样本分析时，从主菜单进入菜单下，选择子菜单进入，即可看到样本的分析结果；2．在样本结果屏幕可以查看到：样本各参数检