肿瘤免疫细胞治疗

肿瘤的新标志重编程细胞代谢，逃避免疫破坏，基因不稳定性与突变，炎症介导的肿瘤促进肿瘤治疗的靶点肿瘤的免疫细胞治疗肿瘤的发生存在:免疫清除、免疫对抗、免疫逃逸三阶段。肿瘤发生与免疫监视免疫监视的长期研究理论提出细胞和组织通常受已被预警的免疫系统监视，这种免疫监视能识别和清除大量的原始肿瘤细胞，也就是新生的肿瘤。实体瘤在某种程度上需要避免这些免疫系统的监测，或者限制免疫杀伤范围，因此避免根除。肿瘤发生与免疫监视在免疫减弱的个体中，肿瘤发病急剧上升(VajdicandvanLeeuwen,2009)。但是，大部分都是病毒-诱导的肿瘤，提示对于这种类型肿瘤的控制主要需要降低个体的病毒感染负荷，部分可以通过清除病毒-感染的细胞。这些研究，似乎认为免疫系统在80%以上的非病毒性引起的肿瘤中发挥的作用不大。最近越来越多的证据显示，基因工程小鼠和临床流行病学都提示免疫系统是肿瘤形成和进展的重要屏障，至少在一些非病毒性诱导的肿瘤也是。肿瘤发生与免疫监视相较有免疫能力的对照，免疫缺陷小鼠的肿瘤发生概率更高，发展更快。尤其是，CD8+细胞毒T淋巴细胞（CTLs）、CD4+Th1辅助T细胞，NK细胞中任何一种细胞的功能缺陷会增加肿瘤的发生率。T细胞和NK细胞共同缺陷的小鼠对肿瘤发生易感。固有免疫和获得性免疫系统的细胞在免疫监视中发挥显著的作用，因此能根除肿瘤(Tengetal.,2008;Kimetal.,2007)。肿瘤发生与免疫监视移植实验显示来源于免疫缺陷小鼠的肿瘤细胞往往在具有免疫功能的同源宿主内再次形成肿瘤的能力低下，来源于具有免疫功能小鼠的肿瘤细胞在免疫缺陷或非缺陷宿主内再次形成肿瘤能力是等同的(Tengetal.,2008;Kimetal.,2007)。高度免疫源性的肿瘤细胞克隆通常被具有免疫功能的宿主清除——“免疫编辑”，仅剩下一些弱免疫源性的变异体继续生长，产生实体肿瘤；这些弱免疫源性的细胞因此能在免疫缺陷和具有免疫功能宿主内克隆。相反地，免疫缺陷宿主内产生的肿瘤，具有免疫源性的细胞没有被选择性删除，能与弱免疫源性的同伴一起生长。来源于未编辑肿瘤的细胞连续移植到同源受体，具有免疫源性的细胞当他们第一次面临具有免疫系统的第二宿主时会被排斥(Smythetal.,2006)。肿瘤发生与免疫伴有高度CTLs和NK细胞浸润的结肠和卵巢癌患者比缺少这些杀伤淋巴细胞浸润的患者预后更好(Page`setal.,2010;Nelson,2008)；其他肿瘤中也有这样的案例。一些免疫抑制患者器官移植后可以发生供体来源的肿瘤，提示这些看似无肿瘤的供体，肿瘤细胞在功能完全的免疫系统中被监视，处于休眠状态(StraussandThomas,2010)。肿瘤免疫细胞治疗•SchmidtSchmidt-wolf从外周血单个核细胞中诱导产生CIK细胞，并用于被动性过继免疫治疗1991•RomaniN采用体外诱导方法培养出DC细胞1994•国内开始展CIK细胞的体外抗肿瘤实验。199720002009《柳叶刀》报道76位根治性术后的肝癌患者接受了DC-CIK细胞免疫治疗，其肝癌复发率比之于对照组降低了51%，奠定了国际上DC-CIK治疗在学术和临床的地位。卫生部将自身免疫治疗技术纳入第三类医疗技术目录进行管理，DC-CIK细胞免疫治疗技术得以规范化发展。1985年美国国家癌症中心就把肿瘤的生物治疗列为肿瘤综合治疗的第四大模式，是继手术、放疗、化疗三大常规治疗后的最有效手段。国内一些大型医院在院内开展各种免疫细胞治疗肿瘤的方法。如北京肿瘤医院、解放军301总医院、中山肿瘤医院等知名医院建立了肿瘤生物治疗中心，已取得了巨大的社会和经济效益国内外现状10肿瘤免疫细胞治疗肿瘤免疫细胞治疗是继手术、放疗、化疗三大治疗模式后的第四大治疗模式。当前国际较成熟的肿瘤免疫治疗方案有树突状细胞（Dendriticcells，DC）疫苗与细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-Inducedkillercells，CIK）免疫治疗肿瘤新技术，与现代手术、化疗和放疗方法联合应用具有很强的互补作用。DC与CIK治疗可以理解为重建机体的抗肿瘤主动免疫与被动免疫。11人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗CD3McAb，IL-2，IFN-γ）共同培养之后细胞数量获得近1000倍的放大，并被诱导成具有强大的抗肿瘤细胞活性；再回输患者体内直接杀伤肿瘤细胞；不损伤机体免疫系统；还能调节和增强机体的免疫功能。(一)CIK免疫细胞治疗CIK免疫细胞制备流程CIK细胞杀伤肿瘤细胞的机制14•低毒：无明显毒副作用。•靶向：作用方向明确，仅针对体内异常肿瘤细胞进行杀伤，不会破坏正常的组织细胞。•全面：清除微小病灶和残余肿瘤细胞，对原发灶、转移病灶和耐药肿瘤病灶均有疗效，能有效预防肿瘤复发。•高效：增强机体免疫功能，改善症状，提高生存质量，延长生存期。CIK细胞治疗特点151.清除残存肿瘤细胞，预防肿瘤复发、转移，适用于手术后无肿瘤负荷的病人。2．控制肿瘤生长，改善生活质量，适用于体内肿瘤无法进行手术治疗的患者；接受放化疗治疗的病人，放化疗间期配合进行免疫治疗；不能接受其它治疗肿负荷较大的病人和有恶性胸腹水的病人。3.增强和调节机体免疫系统，有利于病人在手术、化疗和放疗后恢复免疫系统的正常功能状态。CIK细胞治疗的作用161经手术切除、介入微创治疗和放疗等使肿瘤负荷降低后，应用CIK细胞治疗对抑制肿瘤的复发和转移有较好的作用。2化疗间隙或化疗后，再接受CIK细胞治疗，可减轻化疗的副作用，保护机体的免疫功能，直接杀死残留肿瘤细胞。3无法接受常规治疗的肿瘤患者,可进行CIK治疗，提高机体免疫功能，改善生活质量，延长生成时间。CIK细胞治疗适应症17•T细胞淋巴瘤•器官移植后，长期使用免疫抑制药物的病人•正在使用免疫抑制药物的自身免疫病病人•重要器官功能衰竭的病人•孕妇•严重的不受控制的感染；严重过敏体质者•预计生存期小于1个月CIK细胞治疗禁忌症18CIK细胞是诱导、激活的自体细胞，这种治疗相当安全，有少数肿瘤患者在第一次回输细胞后的4~6个小时内出现体温升高（37.4℃~38℃），一般持续时间2~6小时，可自行缓解，极少数高热病人在使用解热药后可以缓解。CIK细胞治疗的不良反应StevenA.RosenbergandMarkE.Dudley.Cancerregressioninpatientswithmetastaticmelanomaafterthetransferofautologousantitumorlymphocytes.PNAS.2004;101(2):14639–14645.1例多发肝转移的病例，回输CIK后一个月获得完全缓解。CIK的疗效:抗黑色素瘤肝转移20树突状细胞（DendriticCells，DC）疫苗是已知机体内抗原呈递能力最强的细胞，但体内含量极低，通过体外培养获得大量DC细胞，再与肿瘤抗原联合培养后回输患者体内，启动机体的主动免疫机制，激活免疫杀伤细胞，直接清除体内肿瘤细胞，（二）DC疫苗DC疫苗制备流程DC细胞的临床适应症和疗程（1）用于各种实体肿瘤（如胃肠道肿瘤、肺癌、肾癌、黑色素瘤、宫颈癌、子宫肌瘤、乳腺癌、卵巢癌、头颈部肿瘤、前列腺癌、膀胱癌、肝癌、胰腺癌等）的各阶段。（2）必须是手术切除肿瘤组织、肿瘤组织可以制备抗原的患者。国内外现状1985年美国国家癌症中心就把肿瘤的生物治疗列为肿瘤综合治疗的第四大模式，是继手术、放疗、化疗三大常规治疗后的最有效手段。国内一些大型医院在院内开展各种免疫细胞治疗肿瘤的方法。如北京肿瘤医院、解放军301总医院、中山肿瘤医院等知名医院建立了肿瘤生物治疗中心，已取得了巨大的社会和经济效益。CIK、DC细胞治疗在肿瘤治疗中的作用越来越重要，是不可阻挡的发展趋势。开展该项目将丰富肿瘤综合治疗手段，提高肿瘤治疗效果，创造显著的社会效益和经济效益。武汉汉密顿生物科技有限公司是武汉国家生物产业基地，规划面积30平方公里，重点围绕生物医药、生物农业、医疗器械、生物能源、生物服务和生物信息六大领域，计划用3-5年的时间，建设生物创新园、生物医药园、生物农业园、医疗器械园、生物能源园、中新（武汉）生物科技园六大园区，打造集研发、孵化、生产、物流、行政、居住为一体的生物产业新城。光谷生物城光谷生物城-生物创新园武汉生物技术研究院位于生物创新园，由湖北省委省政府凝聚武汉大学、华中科技大学、华中农业大学、中科院武汉分院等单位优势资源组建而成，主要从事生物技术应用研究开发、专业服务和成果转化，为企业自主创新和产业转型提供技术支撑，是湖北、武汉生物产业的中央研究院。武汉生物技术研究院武汉生物技术研究院公司简介武汉汉密顿生物科技有限公司由武汉大学的归国留学人员创办，坐落于武汉光谷生物城、生物技术研究院内；公司主要业务是为合作医院开展肿瘤DC、CIK治疗项目提供细胞的分离、培养、检测及鉴定等技术服务。公司项目经武汉大学、武汉生物技术研究院、光谷生物城逐级筛选而入驻光谷生物城。1）公司已建立功能完善的细胞加工中心公司现有：500平米实验室150平米层流细胞培养室24套先进细胞培养设备（年2000人的治疗）完善的细胞质量检测设备（流式细胞仪，荧光显微镜等）液氮储存库研究院提供更多大型设备公共服务平台武栋成MD,PhD湖北省湖北省楚天学者特聘教授武汉市武汉市3551人才武汉大学教授、博士生导师中南大学湘雅医学院客座教授武汉汉密顿生物科技有限公司总经理曾在加拿大McMaster大学医学院分别作为博士后及研究科学家在干细胞等领域研究八年；后在芝加哥大学医学院任研究助理教授。共发表SCI收录论文22篇，影响因子之和达102；他引次数之和达465次，其中单篇被引最高次数为158次。2）已建立肿瘤免疫细胞治疗的研发、生产、质控、营销团队汪敏PhD武汉大学副教授、博士生导师武汉汉密顿生物科技有限公司技术总监1997年，学士，北京大学生命科学学院生物技术系2000年，硕士，北京大学生物化学和分子生物学系2006年，博士，美国约翰霍普金斯大学生物化学和分子生物学系2007-2011年，博士后，美国加州大学旧金山分校杞少华，博士生，湖北省干细胞重点实验室现从事间充质干细胞新药的开发与临床应用安全性检测姚惟琦，博士生，哈佛医学院助理研究员现从事自体干细胞新药的开发及细胞质量控制马雨洪，硕士博士连读，从事脐带血CIK细胞肿瘤治疗疗效及安全性研究。曹俊，博士生耶鲁大学医学院访问学者，主要从事异体CIK细胞治疗肿瘤的有效性及安全性研究研发团队博士化3）提供第三代CIK免疫细胞治疗解决方案淋巴因子激活的杀伤细胞(IL-2,5天)LAK，Lymphokine-ActivatedKillerCD-3抗体诱导的杀伤细胞（IL-2、OKT3,7-10天）CD3-AK,AntiCD3antibodyinducedactivatedkillercells细胞因子诱导的杀伤细胞（IL-2、OKT3、IFN-γ，21-28天）CIK,CytokineinducedkillercellsOKT3的添加使肿瘤杀伤活性增强十倍，且细胞量加大IFN-γ的加入提升了效应T细胞（CD3,CD56,CD8阳性）的增殖，及进一步提升肿瘤杀伤力生产团队合格证化所有技术员均参加由中国医师协会举办的《第三类医疗技术暨全国自体免疫细胞治疗技术人员岗位培训》，并通过考核取得合格证。2012年10月10名细胞培养技术员培训完毕生产团队4）提供优化的CIK细胞加工条件（全部采用国外进口、一次性、细胞治疗级原材料每疗程CIK细胞总量不低于100亿）CIK细胞生长统计表0100200300400500600051015时间（天）细胞数量（*106个）细胞的数量（*106个）GIBCO细胞的数量（*106个）1640+10%FBS细胞的数量（*106个）Lonza+autoserum质控团队完善化回输样品一年冻存定时电话回访后续服务细致化