定量项目分析性能验证

定量项目分析性能验证方案概述定量项目的分析性能验证小结临床实验室所用的检验方法、仪器等应保证检验结果的准确可靠，临床实验室应对所选购的商品定量试剂盒进行检查，以保证所选用的试剂盒达到临床实验室要求的临床性能、分析性能、经济性能等各方面的要求。对未经修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。分析性能验证什么时候需要进行验证？需要验证哪些内容？•新项目开展、同一检测项目新仪器上的使用、试剂换代等启用新的检测方法•影响到检测系统的维修过后（如更换测量池、加样针等）等已确认过的检测程序发生变更什么时候需要进行验证？分析性能验证需要验证哪些内容？CNAS-CL02医学实验室质量和能力认可准则：分析性能验证需要验证哪些内容？CNAS-CL38医学实验室质量和能力认可准则在临床化学领域的应用：CNAS-CL39医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学领域的应用(仅针对定性项目):分析性能验证生化项目：免疫定性项目：免疫定量项目：精密度精密度精密度正确度符合率正确度可报告范围检出限可报告范围根据检验目的、预期用途等选择需要验证的性能特征分析性能验证•实验室的参考区间可依据厂家说明书也可依据权威文献，如存在地区、人群等差异，应自行验证生物参考区间•某些项目的诊断灵敏度对辅助临床诊断、监测病情、判断预后有价值灵敏度/检出限•对于需要稀释的样本，应对稀释样本进行验证，才可将可报告范围扩大至稀释后的结果范围。稀释倍数验证•常见的干扰如黄疸、溶血、脂血等，例如验证黄疸对肝功能相关指标检测的影响；或是针对某一情况（术后、服用某种药物后等）对特定项目的影响。分析特异性（含干扰物）分析性能验证准备工作验证实验数据处理结果判读分析性能验证验证方案的选择仪器处于良好的运行状态人员要求样本准备模仿日常操作条件确保每日闭环质控在控数据有效性判断离群值剔除及数据补充借助excel或统计学软件判断依据准备工作1.确定验证方案根据项目的临床价值、医学决定水平、常见影响因素等确定验证方案，即要验证的内容。2.仪器处于良好运行状态，人员熟练掌握性能验证相关内容可通过质控情况监测检测系统状态，或联系厂家确认；人员应尽量为平常做实验的操作人员，能够熟练操作仪器、进行校准等。3.标本准备准备工作精密度正确度(比对方案)正确度(定值物质)线性范围参考区间检出限稀释倍数分析特异性可选用的样本类型患者血清患者血清室间质评物质患者血清健康个体血清患者血清患者血清患者血清需要的浓度水平≥220≥25~7————挑选浓度水平依据医学决定水平覆盖检测区间医学决定水平及精密度最佳浓度覆盖线性范围—在厂家声明检出限以下，配置梯度浓度接近分析测量范围上限覆盖检测范围每浓度水平最低用量15个测试2个测试10个测试2个测试1个测试20个测试2个测试2个测试注意：应按照厂家声明的样本类型、稳定期等进行样本的挑选以及保存。准备工作以TSH做精密度实验为例做样本准备：1.说明书中声明，TSH的检测范围为0.005-100.0uIU/mL，TSH的参考范围为0.27-4.2uIU/mL，2008年中国甲状腺疾病诊疗指南-甲状腺功能亢进症诊疗指南中提出甲亢患者TSH一般小于1.0uIU/mL。故，应挑选1.0uIU/mL，以及接近参考范围上限4.2uIU/mL的两水平标本。2.普通干燥管收集，2-8℃可保存7天；-20℃可保存1个月，不可反复冻融。3.一次检测标本用量为50uL，每天需150uL，加上日立杯死腔量100uL，再多预留一些，则每天至少需要300uL样本，总共需1.5mL。因标本量小，且装在同一子弹头及日立杯中，在操作过程中应避免不必要的蒸发。（此处计算的是最少用量，如果标本有富余应多分装一些子弹头）验证实验•校准：按照日常操作校准频率进行校准or每个检测批次进行校准•质控：闭环质控，每日实验样本检测前做室内质控，实验样本检测结束后也应做室内质控。当日质控需均在控当日实验数据才有效。•样本检测：尽可能接近日常样本检测。《标准操作流程—检测系统定量实验分析性能评价/验证》数据处理•数据有效性判断随机误差、操作失误、标本问题等等；产生的有问题数据若参与计算，会使结果判读有较大偏差；根据统计学方法找出离群值，剔除；剔除离群值后应找出问题原因并改正，缺少的标本数应补全。•数据计算借助Excel工具，行标和EP文件中都给了完整的数据统计表格形式。结果判读——精密度•精密度验证验证实验数据计算获得批内不精密度𝑆𝑟，总不精密度𝑆1；与厂家声明相比较or与实验室质量目标相比较？性能验证的目的，是为了确定实验室现行方法能够满足临床实验室对分析性能的要求。在模拟日常操作的情况下，满足实验室质量目标即可。结果判读——精密度•CLIA’88允许总误差或卫生部室间质量评价标准批内不精密度Sr1/4TEa总不精密度S11/3TEa当实验得到的𝑆𝑟，𝑆1，不符合上述标准，是否就说明现行方法不满足质量要求？抽样误差——确认限结果判读——精密度•确认限的计算需要消除由于抽样误差等造成的统计学差异1.自由度v的计算以及假拒绝率α的选择自由度是有关样本数的数据；假拒绝率选择后得到的为（1-α/1）区间，α一般取5,得到的即为95%置信区间。2.C值的确定由确定的自由度v和α查表得到。3.确认限计算其中，𝜎𝑟为厂家声明的批内不精密度结果判读——正确度（室间质评样本）•正确度验证验证实验数据计算获得均值𝑥和标准差𝑆𝑥计算本实验室测定参考物质的测量偏倚𝑏参，𝑏参=𝑥−𝑥赋若𝑏参≤参考物质的不确定度，则验证通过。其中室间质评样品的不确定度为𝑆𝑎=𝑆𝑝𝑟𝑜𝑔𝑟𝑎𝑚𝑛若𝑏参＞参考物质的不确定度，则需计算验证区间。结果判读——线性范围•用两次均值画图，拟合线性回归线，计算相关系数𝑟2。若𝑟2＞0.995，则可初步判读厂家声明的线性范围符合要求若否，则应根据均值散点图确定，是采用扩大样本数量或重复检测次数等措施重新进行验证结果判读•参考区间20名表观健康个体的检测值，不少于90%在参考区间以内•稀释倍数稀释延伸出的检测区间也应满足检测范围内的线性相关•检出限验证浓度的20次测定结果CV%≤20%小结准备工作•人员准备•根据项目特性、临床意义、验证目的等制定性能验证方案•样本准备验证实验•选定方案留取标本后按实验方案进行数据处理•借助Excel工具结果判读•根据验证目的确定质量目标•从验证结果判断实验过程中可能出现的问题