中药栀子中环烯醚萜苷类有效成分的综合色谱分析

1.提取及纯化2.薄层色谱鉴别栀子苷3.HPLC对栀子苷含量测定4.GC检测残留溶剂熔点：163℃～164℃溶解性：易溶于水，溶于乙醇，不溶于石油醚。性状：环烯醚萜苷类化合物，对α-萘酚、羟肟酸、三氯化铁呈正反应。白色结晶。药理作用：栀子苷具有缓泻、镇痛、利胆、抗炎、治疗软组织损伤以及抑制胃液分泌和降低胰淀粉酶等作用。色泽：白色、类白色或浅黄色。口感与气味：无味3.结果粗提物(120mL)⇒有效部位(5.3104g)2.分离提纯：柱色谱法固定相：D101型大孔吸附树脂流动相：水（自来水）原理：以吸附为主1.提取：以50%乙醇为溶剂，回流提取有效成分栀子药材(100g)⇒粗提物(120mL)实验结果表明——大孔树脂吸附法具有吸附范围广，吸附容量大，洗脱容易，反复使用等特点，对栀子苷吸附能力较高，其纯化产物栀子苷含量高。方法简单、可靠。1.薄层板的铺制：硅胶-CMC板的铺制2.溶液的配制：供试品：要求：以50%甲醇为溶剂，配制为相当于原药材0.2g/mL的浓度。方法：(1)量取粗提液2.4mL(100g药材浓缩为120mL溶液)于10mL容量瓶定容。(2)称取有效部位粉末0.1056g(有效部位5.3014g)于10mL容量瓶定容。对照品：要求：以乙醇为溶剂，配制成约4mg/mL的浓度。以羧甲基纤维素Na为黏合剂3.薄层色谱法鉴别：Rf粗提液0.698对照品0.690有效部位0.690平均值0.6931.色谱条件：项目条件色谱柱ODS(150mm×4.6mm，5μm)流动相乙腈-1%醋酸水溶液(15:58，V/V)流动相流速1mL/min检测波长238nm柱温室温进样量20μL2.实验步骤配制溶液进样及记录线性关系考察(1)溶液配制：供试品：要求：以流动相为溶剂，配制为相当于原药材2mg/mL的浓度。方法：(1)量取粗提液0.24mL(100g药材浓缩为120mL溶液)于10mL容量瓶定容，取1mL于10mL容量瓶定容。(2)称取有效部位粉0.1069g(有效部位5.3014g)于100mL容量瓶定容，取1mL于10mL容量瓶定容。对照品：要求：以流动相为溶剂，精密配制成约10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL的浓度。(2)线性关系考察编号栀子苷浓度(μg/mL)峰面积平均峰面积保留时间(min)11028396.69929267.8004.977230138.9004.98232063945.85263532.1254.973463118.3984.973540122630.797121952.0834.9736121273.3694.973760184917.078186433.6334.9738187950.1884.973980254531.688253760.3684.96510252989.0474.9653.结果栀子药材中栀子苷含量为39.086mg/g，栀子有效部位中栀子苷含量为591.733mg/g。栀子苷得率为80.396%。溶质峰面积平均峰面积栀子苷浓度(μg/mL)保留时间(min)粗提液238687.406245953.52578.1724.973253219.6434.973有效部位198911.375198542.78963.2564.973198174.2034.9731.色谱条件：项目条件色谱柱SPB-1(30m×0.25mm×0.25μm)毛细管柱载气高纯氮(柱前压7Pa，分流比30：1)进样量0.5μL柱温进样口温度：230℃；程序升温(初始为50℃，恒温3min，变为40℃升温至230℃后，恒温5min)检测器FID检测氢焰离子化检测器选择性检测器质量型检测器2.实验步骤配制溶液进样及记录样品鉴定(1)溶液配制：对照品要求：以DMF为溶剂，正丁醇为内标物，配制含乙醇和正丁醇均为0.5mg/mL的浓度。供试品要求：以DMF为溶剂，正丁醇为内标物，配制含有效部位0.1g/mL和正丁醇0.5mg/mL的浓度。内标法：由于进样量很小(0.5μL)，导致相对误差会很大。所以以内标物为基准以比值的方式进行数据处理，可以提高准确度。方法：量取无水乙醇0.633mL、正丁醇0.618mL，以10mL容量瓶按照1：10的比例稀释2次，再以10mL容量瓶定容。方法：量取0.618mL正丁醇于10mL容量瓶定容，再以10mL容量瓶，以1：10的比例稀释1次，取1mL于10mL容量瓶，称取0.9846g有效部位粉末加入同一容量瓶，加入适量溶剂(不超过刻度线)，振荡使固体溶解后，定容。(2)样品鉴定：按照上述色谱条件进行检测，得到供试品溶液和对照品溶液的气相色谱图。3.结果计算通道1通道2A供试品乙醇1285.200156.700A供试品正丁醇7433.500706.800A对照品乙醇3817.100975.300A对照品正丁醇5137.750938.800A供试品乙醇/A供试品正丁醇0.17290.2217A对照品乙醇/A对照品正丁醇0.74301.039结果合格合格哪些因素有可能影响到栀子苷的得率？栀子的前处理栀子的采集时间提取液的选择流动相的选择提取的方法∴以10mL容量瓶配制，即理论上需量取2.4mL粗提液。∴以10mL容量瓶配制，即理论上需称取0.1062g有效部位粉末。∴以10mL容量瓶配制，即理论上需量取0.024mL粗提液。思路：量取0.24mL(1mL的移液吸管)，以1：10的比例稀释一次∴以10mL容量瓶配制，即理论上需量取1.062mg有效部位粉末。思路：称取0.1062g，以1：100的比例稀释一次