实验七 (植保)土壤微生物分离测数

实验七土壤微生物分离测数一实验目的要求二实验原理三实验步骤四实验报告及思考题一实验目的要求1了解土壤微生物的分离测数的基本原理。2学习并掌握微生物平板菌落计数的技术方法。二基本原理土壤是微生物生活的大本营，其中含有大量不同类型的微生物，可按照一定的方法对特定类群进行数量测定。基本原理是通过稀释使菌体细胞充分分散，单细胞得以生长发育形成菌落，可使用稀释法或平板划线法进一步纯化，还可通过平板菌落计数，推算单位重量土壤样品含有微生物的数量。三实验步骤（一）土壤样品采集（二）好气性细菌的分离测数（一）土壤样品采集在待测田块上，若田块面积小于50平方米则按对角线三点采样，若田块面积大于50平方米按对角线五点采样。采样一般定点于耕作层0--20cm，先除去表土1--2cm，以无菌铲采土足量充分混匀后用无菌塑料袋分装。（二）好气性细菌的分离纯化及测数1制备土样稀释液2培养基的准备3倾注法接种4保温培养5计数菌落数1制备土样稀释液99ml无菌水10-21克1ml10-310-410-510-6另留一管不稀释留作对照（CK）吹吸三次混匀无菌操作2培养基的准备融化牛肉膏蛋白胨培养基，融化后保温在48℃。并取6个无菌培养皿，分别在皿底贴好标签，注明10-5、10-6、CK（每个稀释度要两个平行皿，对照要两个平行皿）。标签班级：组号：浓度：先按10-6，10-5的顺序将不同稀释度菌悬液接入对应平皿中（每个平皿接入1ml），再向每个平皿倾注约15ml的牛肉膏蛋白胨培养基（48℃）待冷凝，混合均匀。3倾注法接种1ml1ml1ml1ml99ml无菌水9毫升无菌水1ml1ml1mlCK对照10-210-3土样1克10-410-510-61ml1ml1ml4保温培养将已经接种的平皿静置10min后，放入温箱倒置培养3--5日（30℃），观察结果。30℃培养1ml1ml1ml1mlCK对照10-510-61ml1ml1ml1ml5计数稀释度10-510-6CK对照平板121212菌落数各浓度平均菌落数各浓度平均菌落数减CK平均菌落数每克湿土样细菌数量＝平均菌落数×稀释倍数土壤样品水分系数＝1∕（1—样品水分百分数）土壤样品细菌数量（个∕克干土）＝每克湿土样细菌数量×样品水分系数四实验报告1实验目的2实验原理3实验数据及计算结果记录4思考题思考题下次实验内容：实验八微生物生理生化特性检测1牛肉膏蛋白胨平板菌落计数的结果是土壤样品实际含菌数吗？2比较平板菌落计数与显微镜直接计数的异同。它们各有何优缺点？