明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则-20120430-2

背景资料检测方法方法学验证注意事项4月15日，央视《每周质量报告》栏目披露了国内部分医药生产企业使用皮革明胶制胶囊，空心胶囊铬超标，在社会上反响巨大。工业明胶违法用于生产药用明胶内幕：4月15日晚国家药监局发出紧急通知，要求对媒体报道的13个铬超标产品暂停销售和使用。待监督检查和产品检验结果明确后，合格产品继续销售，不合格产品依法处理。对违反规定生产销售使用药用空心胶囊的企业，将依法严肃查处。4月16日中检院组织召开《关于对部分胶囊剂产品开展监督抽验》的紧急会议，成立了以李云龙为组长的应急工作领导小组，成立了应急检验技术专家组，安排部署应急检验的具体事宜。发布《明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则》的通知各省、自治区、直辖市(食品)药品检验所（院）：根据国家食品药品监督管理局的要求，为指导明胶药用空心胶囊中铬检测，保证检验质量，我院依据《中国药典》2010年版（二部）的标准，结合前期工作经验，组织制定了《明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则》（见附件），供各单位检测时参考。附件：明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则()二○一二年四月二十一日胶囊壳分类硬胶囊软胶囊:成膜材料和内容物同时加工成产品(海藻酸盐、明胶)明胶空心胶囊植物来源：主要是植物纤维素动物来源:明胶空心胶囊（VacantCapsules）系由胶囊用明胶加辅料制成的空心硬胶囊。由帽、体两节胶囊壳组成，可容纳各种药粉、液体、半固体和药片。可掩饰药物的异味，易于吞服，具良好的崩解能力，较长的保质期等优点。规格尺寸：从大到小依次为000#、00#、0#、1#、2#、3#、4#、5#等8种型号。主要原材料：由明胶、甘油、水以及其它的药用材料(TiO2)组成。明胶约占所有原辅料的90%以上）。明胶是从动物（牛、马、猪、鱼、驴）的皮、骨、腱、鳞等含胶原蛋白的组织，经过酸、碱或酶水解处理以后降解生成的非均匀多肽混合物，由多种氨基酸所组成。明胶成分：85～90%蛋白质，0.3%～0.2%矿物质，9%～12%水分。外观近于无色或者呈淡黄色，为透明、无特殊臭味的固体，分子量为1.75-45万。根据用途分为三类：药用明胶，食用明胶和工业明胶(照相明胶)。有关标准胶囊用明胶：《中国药典》2010年版（二部）（Cr:2.0mg/kg）Gelatin：•EP7.0/BP2010（Cr:10ppm）•USP34（Cr:没有规定）•JP16（Cr:没有规定）药用明胶：QB2354-2005（Cr:2.0mg/kg）(QB:轻工行业标准)食品添加剂明胶：GB6783-94（A级：1.0mg/kg，B级：2.0mg/kg）食用明胶：QB/T4087-2010（Cr:2.0mg/kg）工业明胶：QB/T1995-2005（Cr:没有规定。用途：1，火柴的起火剂；2，粘合剂；3，电解工业；4，纺织工业；5，感光耐蚀膜；）《中国药典》2010年版（二部）明胶空心胶囊项下铬检查项（P1204）•取本品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5~10ml，混匀，浸泡过夜，盖上内盖，旋紧外套，置适宜的微波消解炉内，进行消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸汽挥尽并近干，用2%硝酸转移至50ml量瓶中，并用2%硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；同法制备试剂空白溶液；另取铬单元素标准溶液，用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0μg的铬标准贮备液，临用时，分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0~80ng的对照品溶液。•取供试品溶液与对照溶液，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（附录IVD第一法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。含铬不得过百万分之二（2mg/kg）。仪器原子吸收分光光度计（含石墨炉原子化装置）电子天平微波消解仪电热板或其他赶酸设备，如：恒温消解仪、赶酸器等。试剂硝酸（优级纯,国药集团）铬单元素标准溶液（1000µg/ml，国家标准物质）检验样品：胶囊剂（由明胶空心胶囊壳装载的胶囊）检验项目：明胶空心胶囊中的铬检验所需检品量的参考值：胶囊规格平均重量(g/粒，参考值)一次实验量（粒）检验3倍量（粒）0#0.09315451#0.07415452#0.06120603#0.05020604#0.0383090空心胶囊壳的制备：参考附录IE胶囊剂装量差异项（附录8）具体制备方法：倾出胶囊剂的内容物，胶囊壳用棉棒或小刷试净（不得损坏囊壳），放置，待用。胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬的测定方法：1.铬标准贮备液的制备：取铬单元素标准溶液（1000µg/ml），用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0μg的铬标准贮备液(不得超过一个月)。2.标准溶液的制备：分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0~80ng的对照品溶液。临用时现配。胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬测定方法(过夜)：3.供试品溶液的制备：精密称取本品0.5g(胶囊整体称重，如1号胶囊约7个，精密称定)，置聚四氟乙烯消解罐内，加硝酸5~10ml，混匀，浸泡过夜，盖上内盖，旋紧外套，置适宜的微波炉内消解。消解完全后，取消解内罐置电热板上缓缓加热至红棕色蒸汽挥尽并近干(1~2mL)，用2%硝酸转移至50ml量瓶中，并加2%硝酸稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；同法制备试剂空白溶液，作为空白校正。4.测定法：取供试品溶液与对照品溶液适量，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（《中国药典》2010年版（二部）附录IVD第一法，标准曲线法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。胶囊剂中明胶空心胶囊壳中铬新测定方法(不过夜)：取样品0.5g，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸5ml，100℃30分钟使溶解，补加硝酸2ml，加水1mL，待冷却至室温，加0.5ml氢氟酸，进行第一次微波消解（参考程序为10min升温至120℃，保持5min，10min升温至140℃，保持15min）。冷却放气（无需完全打开消解罐盖，只需扭松即可）。随后进行第二次消解（参考程序为10min升温至150℃，保持5min，10min升温至185℃，保持15min）。冷却后，加热赶酸至1~2ml，2%硝酸溶液至50ml，作为供试品溶液。同法制备试剂空白溶液；另取铬单元标准溶液，用2%硝酸稀释制成每1ml含铬1.0ug的铬标准储备液，临用时，分别精密量取铬标准贮备液适量，用2%硝酸溶液稀释制成每1ml含铬0~80ng的对照品溶液。测定法：取供试品溶液与对照品溶液适量，以石墨炉为原子化器，照原子吸收分光光度法（《中国药典》2010年版（二部）附录IVD第一法，标准曲线法），在357.9nm的波长处测定，计算，即得。线性：制备含铬的对照品溶液至少5份，浓度依次递增，最高浓度吸收值应在0.8以下，保证具有较好的线性范围，相关系数（r）≥0.99。检测波长：357.9nm。准确性：应进行整个实验过程的（包括前处理）方法学回收率验证，暂定回收率应为80%-120%的范围内。每波次测定需进行随行回收试验，每10个样品加一个质控样品。2ppmLOQ:0.5ppm重复性取限度浓度的标准品溶液重复测定5次，吸收度（测定值）的变化范围（RSD）不得过5%。定量限（LOQ）本方法定量限应不低于0.5mg/kg。1.消解：样品前处理是试验中的关键步骤，既要保证消解完全，又要保证消解过程样品中的铬不损失，因此试验中建议加入10ml硝酸（优级纯），并需要浸泡过夜后一步消解/或不过夜二步消解。参考消解程序为：5min由室温升至120℃，维持3min；6min由120℃升至150℃，维持2min；6min由150℃升至180℃，维持20min。2.为避免玻璃容器的干扰，试验中宜采用塑料容量瓶（聚丙烯材质）定容。3.不同原子吸收仪试验参数可能不同，可根据原子吸收仪说明书中推荐程序设定测定参数（国产参考石墨炉升温程序如下：5s升温至100℃，保持10s；5s升温至500℃，保持10s；0s升温至2100℃，保持3s；0s升温至2200℃，保持2s）4.含钛白粉的胶囊壳（不透明胶囊）建议在微波消解时，样品中除加硝酸外可另加0.5ml氢氟酸，其他同供试品溶液制备，注意空白校正和方法学验证。5.实验用水：应采用纯化水，储藏水的容器宜用聚乙烯塑料材料制成，不宜选用玻璃容器长期储存。6.试剂应采用优级纯及以上级别试剂。7.试验中所用容器及器皿均需在每次使用前用盐酸溶液（浓盐酸：水/1:1）浸泡1h，再用硝酸溶液（浓硝酸：水/1:1）浸泡1h，再用纯化水冲洗干净后使用。微波消解容器应采用仪器清洗程序清洗，不得采用铬酸清洗液洗涤容器。8.可供选择的铬元素标准溶液（1000µg/mL）由国家有色金属及电子材料分析测试中心提供（电话：[phone]；传真：[phone]）；也可以由中国计量科学研究院提供（电话：[phone])。铬对照贮备溶液应密封，冷暗处保存。9.结果判断：标准规定不得过百万分之二(2mg/kg)。由于是微量测定，测定结果的偏差会较大，一般两份样品的相对偏差≤10%，取平均值即可（低浓度尤其明显）。10.样品检测应严格遵守《中国药典》2010年版（二部）“明胶空心胶囊”铬项下方法试验，如因试验需要改变样品前处理方法及检测波长，应按照实验室有关质量管理程序(偏离)进行。11.若试剂空白溶液测定值过高（宜不超过标准曲线最低浓度点吸光度值的50%），应换用空白干扰小的溶液重新试验。12.注意试验所需的所有仪器均应在计量检定合格效期内。13.若供试品溶液浓度过高，可稀释到标准曲线范围内进行测定。对本指导原则如有不清楚的地方，请联系中检院包材所：孙会敏（电话：[phone]）赵霞（电话：[phone]）杨锐（电话：[phone]）中检院中药所金红宇（电话：[phone]）中检院化药所麻醉药品室陈华（电话：[phone]）中检院器械所冯晓明（电话：[phone]）王健（电话：[phone]）中检院食化所王钢力（电话：[phone]）冯克然（电话：[phone]）明胶药用空心胶囊铬检测方法指导原则见链接：感谢卫生部、国家局、院领导正确领导！感谢中检院院办公室、综合业务处和监督所的正确指导！感谢食化所、中药所、医疗器械所、化药所、标化所、浙江所兄弟部门的大力支持！