化学药品复方制剂中有关物质的定性归属方法

化学药品复方制剂中有关物质的定性归属方法作者：张震，张玉琥，ZHANGZhen，ZHANGYu-hu作者单位：国家食品药品监督管理局药品审评中心,北京,100038刊名：中国新药杂志英文刊名：CHINESEJOURNALOFNEWDRUGS年，卷(期)：2008，17(21)被引用次数：0次参考文献(6条)1.张玉琥化学药物复方制剂杂质研究的特点及基本思路[期刊论文]-中国新药杂志2006(02)2.ICHHarmonisedTripartiteGuideline:ImpuritiesInNewDragSubstances,Q3A(R)20023.ICHHarmonisedTripartiteGuideline:ImpuritiesInNewDragSubstances,Q3B(R)20034.朱良漪.孙亦梁.陈耕燕分析仪器手册19975.汪正范.杨树民.吴侔天色谱联用技术20076.陈耀祖.涂亚平有机质谱原理及应用2001相似文献(10条)1.期刊论文姚蕾.施亚琴.胡昌勤.YaoLei.ShiYa-qin.HuChang-qin注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质HPLC检测方法的改进-中国抗生素杂志2009,34(12)目的建立有效的注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质检测方法.方法采用HPLC梯度洗脱法,色谱柱为PhenomenexC_(18)(2)型Luna色谱柱,以0.02mol/L磷酸二氢钠溶液pH(4.0±0.1)为流动相A、乙腈为流动相B;流速为1.0ml/min;检测波长为230nm和254nm,采用双波长检测分区域计算.对舒巴坦主峰前的杂质峰,采用230nm的峰面积值按舒巴坦计算其含量;对舒巴坦主峰后的杂质峰,采用254nm的峰面积值按氨苄西林计算其含量.结果采用梯度洗脱方式能有效检测出氨苄西林二聚物、舒巴坦青霉胺等杂质;不同来源的杂质具有明显分区,与氨苄西林有关的杂质主要集中在舒巴坦主峰后,而与舒巴坦有关的杂质则集中在舒巴坦主峰前;采用双波长分区域检测杂质含量,可以将复方制剂中的有关物质含量同其原料氨苄西林钠和舒巴坦钠中的有关物质含量相联系.各杂质在不同波长下响应值不同.结论改进后的方法可较好的分离氨苄西林钠和舒巴坦钠来源的各主要杂质,真实反映药品质量,有助于发现目前产品中的质量问题,进而促使产品质量的提高.2.学位论文王峻峰乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液有关物质及含量测定方法学研究2009目的：乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液是含有多种杂质的复方制剂，在杂质检查及含量测定中，两种有效成分之间及杂质和有效成分之间存在相互干扰。中国药典中葡萄糖采用旋光法测定含量，但是乳酸左氧氟沙星具左旋性，对于旋光法测定葡萄糖含量会产生影响，所以应探寻新的葡萄糖含量测定方法。而葡萄糖降解产物5-羟甲基糠醛在中国药典中采用紫外分光光度法检查，但是乳酸左氧氟沙星对该法存在干扰，因此须建立新的检查方法。针对上述情况，本文研究了乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液中有关物质检查及含量测定方法。方法：乳酸左氧氟沙星注射液中有关物质的检查采用高效液相色谱法，测定条件：色谱柱填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶，以0.05mol/L枸橼酸溶液-1mol/L醋酸铵溶液—乙腈(77：1：14)为流动相，检测波长为293nm。乳酸左氧氟沙星含量测定参照乳酸左氧氟沙星注射液质量标准。葡萄糖的含量测定采用剩余碘量法进行。结果：1、制剂的有关物质检查采用了高效液相色谱法，三批样品的有关物质都符合规定(应=0.5％)，相关系数r=0.9996，RSD=0.19％(n=6)。2、制剂中乳酸左氧氟沙星的含量测定采用的是高效液相色谱法，对测定方法进行了方法学的验证，测定了三批样品的含量，都符合规定(应为标示量的93.0％～107.0％)，线性范围为15μg/ml～50μg/ml，相关系数r=0.9998，平均回收率为100.3％，RSD=0.32％(n=5)。3、制剂中葡萄糖的含量测定采用剩余碘量法，其线性范围为3mg/ml～70mg/ml，相关系数r=0.9999，回收率为100.1％，RSD=0.18％(n=9)。测得三批样品含量都符合规定(应为标示量的95.0％～105.0％)。4、葡萄糖降解产物5-羟甲基糠醛，采用HPLC法测定，紫外检测波长为284nm。检出限达0.02μg/ml，回收率97.3％-99.8％，相对标准偏差为0.13％(n=5)。经线性回归，线性范围0.023μg/ml-5.517μg/ml(r=0.9996)。结论：实验中所建立方法专属性强，操作方便，结果准确，重现性好，可用于乳酸左氧氟沙星葡萄糖注射液中主药的含量测定及有关物质的检查。3.学位论文田莉复方甘草酸苷片的研制及体外代谢研究2008复方甘草酸苷片(compoundglycyrrhizintablets)是由甘草酸单铵盐(glycyrrhizin，GL)，甘氨酸(glycine，GLY)，DL-蛋氨酸(DL-methionine，MET)组方的复方制剂，疗效确切，临床应用广泛，在肝病领域主要用于治疗慢性肝病，改善肝功能，在非肝病领域用于过敏性反应(如皮疹、荨麻疹、药物疹)、小儿异位性皮炎、扁平苔藓、系统性红斑狼疮、肾综合征出血热及传染性非典型肺炎(SAS)等。本课题临床前研究已完成复方甘草酸苷片的处方工艺研究，质量标准研究，稳定性考察及家兔体内生物等效性评价等工作，并获得国家食品药品监督管理局的临床批件(批件号：2006L01472)。在此基础上，拟进行复方甘草酸苷片工业化生产的处方工艺优化和质量标准修订，试生产和质量评价，人体生物等效性评价，以及GL的体外代谢研究等。以期通过本复方制剂的开发成功，为慢性肝炎的临床治疗提供国产新制剂：同时，从代谢途径研究复方制剂减毒增效的作用机理，为GL的体内代谢研究和临床安全用药评价奠定实验基础。第一部分、复方甘草酸苷片工业化生产的处方工艺参数优化和质量评价。首次建立了在同一色谱条件下检测三个成分的含量，溶出度和有关物质的HPLC法(PDA检测器)，该法简便、灵敏、专属性强，重复性好，可将各破坏条件下的降解产物与主成分峰完全分离；优化了复方甘草酸苷片工业化生产的处方工艺参数，完成了试生产：深入进行了有关物质研究，三批试生产产品中的有关物质与原料药，加速试验放置6个月样品以及市售产品美能进行对比，经统计学分析，均有P0.05，说明制剂过程中和加速放置6个月过程中没有使药物间、药物与辅料间产生明显的未知物，与美能相比也未增加新的有关物质，为有关物质限度的确定提供了翔实的依据；按临床批件要求和2005版《中国药典》规范修订质量标准，与日本进口产品美能(StrongerNeo-minophagenC，SNMC)的质量标准相比，分析方法更具先进性和可靠性，提升了质量标准，可有效控制复方甘草酸苷片的质量；对试生产产品进行了质量评价和稳定性考察，结果表明，复方甘草酸苷片工业化生产的处方合理，工艺稳定。第二部分、按草酸苷片在健康人体的生物等效性。采用液相色谱-串联质谱法(LC/MS/MS)测定血浆中GL的代谢产物甘草次酸(GlycyrrhctinicAcid；GA)的浓度，美能为参比制剂，22名健康男性受试者自身交叉单剂量口服治疗剂量试验制剂与参比制剂，血浆样品经液-液萃取，内标为人参皂苷Rh2，经方法确证表明建立的检测方法快速，灵敏、重现性好、专属性强，内源性物质不干扰待测物的测定，样品前处理简便。采用DAS2.0药动学统计软件计算药动学参数，受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为：AUC0-∞=分别为(5794±3129)ng·h·ml-1和(5621±2752)ng·h·ml-1，AUC0-t分别为(5084±2191)ng·h·ml-1和(5187±2367)ng·h·ml-1，Cmax分别为(288±249)ng·ml-1和(287±160)ng·ml-1，tmax分别为(13.5±6.0)h和(16.7±7.2)h，t1/2分别为(13.1±8.5)h和(10.34±5.65)h，受试制剂相对生物利用度为(95.84±20.8)％。主要药动学参数AUC0-∞、AUC0-t、Cmax对数转换后进行方差分析，双单侧t检验和(1-2α)置信区间法进行生物等效性评价，其中tmax采用非参数检验法，结果均显示试验制剂与参比制剂间无统计学意义(P0.05)，试验制剂与参比制剂AUC0-t，Cmax比值的90％可信区间分别为85.4％～122.3％，80.9％～106.0％，均在AUC0-t，Cmax90％可信区间的80％～125％，70～143％范围之内。结果表明试验制剂与参比制剂具有人体生物等效性。第三部分、GL和GA在大鼠肝微粒体的体外代谢研究。本文建立了Sprague-Dawley大鼠肝微粒体体外代谢模型，苯巴比妥为诱导剂，按80mg·kg-1剂量腹腔注射3天，超速离心法制备肝微粒体，Bradford法测定蛋白浓度，分别以Phenacetin，Clivorinc，Propofol作为探针底物进行肝微粒体的CYP450酶，酯酶和肝微粒体Ⅱ相酶(UGT)的活性表征，证实了肝微粒体代谢模型和酶活性的有效性；本文首次建立了超高效液相色谱-质谱联用技术(UPLC/MS)同时测定GL，GA及其代谢产物，该法快速，灵敏、重现性好、专属性强，并通过质谱峰对代谢产物峰进行了定性和结构推证；在肝微粒体CYP450酶，酯酶和肝微粒体Ⅱ相酶(UGT)孵育体系中以GL为底物进行温孵，没有检测到3-单葡萄糖醛酸甘草次酸(18β-glyeyrrheticacid-3-O-β-D-monoglucuronide，GAMG)或其它任何代谢产物，即β-NADPH，UDPGA对GL代谢没有催化作用，该结果首次提供了CYP450酶，酯酶和肝微粒体Ⅱ相酶(UGT)对GL无代谢的直接证据，国内外未见报道；在肝微粒体酯酶孵育体系中以GA为底物进行温孵，发现酯酶对GA无代谢：在肝微粒体CYP450酶孵育体系中以GA为底物进行温孵，检测到GA的五个羟化代谢产物(M1，M2，M3，M4，M5，m/z487，485)和一个未知代谢产物(M6，m/z501)，NADPH对GA的代谢有催化作用，为NADPH依赖性的氧化代谢机理，该结果发现了在CYP450酶孵育体系中GA代谢生成M1，M2，M3，M4，M5，M6的代谢途径，比现有文献报道的两个羟化代谢产物有更深入的发现；在大鼠肝微粒体Ⅱ相酶(UGT)孵育体系中以GA为底物进行温孵，发现GA与葡萄糖醛酸结合后生成GAMG和GL，即UGPDA对GA的代谢有催化作用，为UGPDA依赖性的代谢机理，首次发现GA在大鼠肝微粒体温孵体系中与葡萄糖醛酸结合，此现象国内外尚未见报道；同时，在研究中还观察到UGT能使GA经过CYP450代谢的代谢产物进行Ⅱ相酶代谢，产生3个结合产物M1'，M2'，M3'(m/z664)的新代谢途径；在肝微粒体孵育体系中加CYP450酶化学抑制剂以鉴定参与GA代谢的CYP450亚酶，选择在药物代谢中起主要作用的CYP1A2(Furafilline)、CYP3A4(Ketoeonazole)、CYP2C19(Tielopidine)、CYP2D6(Quinidin)、CYP2E(4-Methlpyrazole)五种CYP450亚酶和黄素单氧化酶(FMO，Methimazole)为研究对象，本研究发现，GA的代谢主要由CYP3A参与，对M1，M2，M3，M4和M6的生成均有明显影响，代谢产物的抑制与Ketoconazole呈剂量依赖性，比现有文献报道的CYP3A1/2只参与了GA的C-22α羟化代谢，有更深入的发现，同时，首次观察到FMO参与了GA的部分羟化代谢(M1，M2，M3)，而CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1对GA的代谢没有影响；在大鼠肝微粒体CYP450孵育体系中以各拆方组作为底物进行孵育，考察对GA代谢的影响，发现GLY增加了GA的转化，同时，羟化产物M1，M2，M3的生成量减少，未知代谢产物M6的生成量增加，而GLY，