20151115地贫基因诊断(f)

地中海贫血的基因诊断中山大学孙逸仙纪念医院儿科方建培Email:[e-mail]2015-11-15地中海贫血基因地中海贫血是一组单基因遗传性溶血性疾病我国和β地贫基因突变类型频率ZhangJ,etal.Hemoglobin.2012Sep3.地中海贫血基因携带率地区携带率(%)地贫β地贫广东8.532.54广西11.196.78云南四川14.71.9222.62.18台湾4.201.10香港5.023.41Xu,etal.JClinPathol2004,57:517-22.Cai,etal.ChiJEpidemiol2002,23:281-5.Zhao,etal.ChiJEpidemiol2011,32:352-6.α地贫基因分子基础缺失型：常见（约占60%）非缺失型：少见（约占40%）α地贫基因分子基础α1地贫（α0地贫）：16号染色体两个α基因丧失;一个缺失，另一个点突变。-α/-α或α地α/α地α，--/αα。α2地贫（α+地贫）：16号染色体一个α基因功能丧失。-α/αα或α地α/αα。血红蛋白H病:由于α基因3个缺失/突变，使过量的β珠蛋白肽链形成β4多聚体（HbH）胎儿水肿：4个α基因全部缺失/突变非缺失型α地贫α地贫基因分子基础我国非缺失型地贫常见基因类型：2CD30GAG(Glu)UnstableHb2CD31AGGAAG(ArgLys)Splicingmutation2CD59GGCGAC(GlyAsp)UnstableHbHbWestmead2CD122CACCAG(HisGln)UnstableHbHbQS2CD125CTGCCG(LeuPro)UnstableHbHbCS2CD142TAACAA(Gln)Terminatormutationα地贫基因分子基础α地贫临床类型与基因类型的关系临床基因静止型-α/αα轻型-α/-α或--/αα中间型--/-α重型--/--β地贫基因分子基础基因缺失：少见(仅见于:41-42)点突变：常见（约占99.5%）β地贫基因分子基础β地贫临床类型与基因类型的关系临床基因轻型β地/β（β杂合子）中间型β地/β地（β变异型纯合子或双重杂合子）重型β地/β地（β纯合子或双重杂合子）地中海贫血基因诊断技术PCR：多重PCR，Gap-PCR，QR-PCR等位基因特异性性寡核苷酸杂交（ASO）反向点杂交（RDB）Southernblot限制性切酶谱分析多重连接酶依赖探针扩增技术(MLPA)多重引物延伸DHPLC基因测序Genotypingofthe--SEAallelesbyGap-PCR地贫基因诊断技术（Gap-PCR）地贫基因诊断技术（ASO）地贫基因诊断技术（ASO）地贫基因诊断技术（RDB）GenotypeFatherCDs41-42(CTTT)/NMotherIVS-2-654(CT)/NFetusCDs41-42/IVS-2-654NormalcontrolN/N地贫基因诊断技术（RDB）地贫基因诊断技术（MLPA）地贫基因诊断技术（DHPLC)α地贫(缺失型)的基因诊断Southern印迹结合多重PCR结合缺口PCR(Gap-PCR)多重连接酶依赖探针实时荧光定量限制性切酶谱分析溶解曲线分析结合片段大小分析扩增技术(MLPA)PCR(RQ-PCR)优点可用于分析基因的简洁，快速，污对仪器要求低，易推重复性好，特异性高确定cDNA拷贝大片段缺失与重复染降低，检测单广，检测大片段缺失。，可同时检测已知与数，可同时检突变，结果可靠，个碱基突变及小未知大片段缺失或重测已知和未知稳定性高。片段缺失。复突变。大片段缺失缺点费时、费力、需用不能检测未知缺失及成本高限制了其推广放射性同位素。非缺失突变。应用PCR诊断方法的可鉴定各种缺失广泛用于地贫检测，作为常见地贫基因筛作为补充实验补充或佐证。类型。可区分杂合子及纯阴性但高度怀疑地贫或产前筛查合子的补充实验。各种α地贫基因诊断方法的优缺点及应用α地贫(非缺失型)的基因诊断PCR结合限制性内切酶酶谱分析：简便、快捷，但只限于涉及限制性内切酶位点改变的突变和小片段缺失的检测多重扩增不应突变系统：简便、快速，同Gap-PCR一样，广泛用于α地贫基因检测聚合酶链反应结合寡核苷酸探针的反向斑点杂交:诊断效率高，广泛用于常见非缺失型基因检测基因芯片：并行性、多样性及自动化，同时诊断α及β地贫基因测序：可用于检测未知的非缺失型地贫基因β地贫基因诊断点突变PCR-RDB基因测序植入前基因诊断（羊膜穿刺取样）母体外周血分离胎儿细胞进行产前诊断母体血浆或血清中胎儿DNA分析地贫基因产前诊断新技术地贫基因诊断临床应用评价基因诊断结果应注意的问题不同种族/地区地贫基因突变点有差别临床贫血的严重程度（即临床分型）与基因诊断的严重程度一致：确诊评价基因诊断结果应注意的问题临床贫血严重程度与基因诊断不一致（1）临床“重”，基因“轻”：①应作家系调查，找诊断证据(举例:新疆籍的病例)；②重视Hb电泳结果；③必要时测序临床贫血严重程度与基因诊断不一致（2）临床“轻”，基因“重”：①查“减轻”基因(合并β)；②基因位点的“同源性”（双重杂合体）；③遗传性持续性胎儿血红蛋白增多症HPFH评价基因诊断结果应注意的问题地中海贫血基因诊断临床病例分析小结•完整的地中海贫血临床诊断应包括基因•地贫的基因诊断是临床诊断的‘重要指标’•基因诊断应紧密结合临床•基因诊断阴性不能彻底否定地贫,应重视Hb电泳的结果,综合判断•家系调查在地贫诊断中具重要意义