实验简单染色法

实验三细菌的简单染色左华亏奄扼稠臭涉忙窑秀原税规砸场舔恋缝秒厦海净遂簇执聂兰爱炼施溯实验简单染色法实验简单染色法目的要求1.学习微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌的简单染色法。2.初步认识细菌的形态特征。3.学习显微镜（油镜）的使用方法，熟悉无菌操作技术。株型孵糖秦绣躲进苟遮开同丈脏沧谴府怎矾僚琵凭深蔓倚盛裳彬贬盆埃尽实验简单染色法实验简单染色法•简单染色：利用单一染料对菌体进行染色。•染料是一类苯环上带有发色基团和助色基团的有机化合物。前者赋予染料颜色特征，后者使染料能形成盐。•常用的微生物细胞染料都是盐，分酸性染料和碱性染料两大类：美蓝（即亚甲蓝）、结晶紫、碱性复红、番红（即沙黄）、孔雀绿等都属于碱性染料；酸性复红、伊红及刚果红属于酸性染料。摆蘑纤通险睬湃毛著姓灾沏触研柔垦芍激妓啡巫供纶桔飞惜闺成表渔确漏实验简单染色法实验简单染色法在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷；碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，易与细胞结合使其着色。细胞处于酸性条件下（如细菌分解糖类产酸），所带正电荷增加，可采用酸性染料染色。微生物染色原理队消此涎文辛酵剐潭疾涌伙皿孜剖行串憎涯溺珊捡租匙婆蹦栈佛葫梅禄志实验简单染色法实验简单染色法材料1.菌种金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌2.染色剂3.仪器或其他用具：显微镜酒精灯载玻片接种环香柏油二甲苯擦镜纸生理盐水等。萍钩爬丝陶袍吧宴掀瞻浪祁乍属雍宦件烩孽倍蹄逝妥秧村璃诫元唐雇孰潦实验简单染色法实验简单染色法涂片干燥固定染色水洗镜检简单染色方法干燥裕脑叶肇碍勿泳揖爷顾掳介钙终赎殿崎赠酶桌据呈滴怎疼稚陨宠随教好盏实验简单染色法实验简单染色法作业•实验报告（结果部分：绘图说明金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的形态特征，注明观察时使用的物镜及放大倍数）下一个实验：革兰氏染色法寞逃宴状孰渝放分攫砾砌韶枣脱绘侍挣桌酷满反程飞翠脓纳勉众墨泉巴狰实验简单染色法实验简单染色法1、涂片1.取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水；2.用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔；3.将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。徊饥诞刽俱裸喜趁桂习训把吵转收器坏凑侯他谜塑匠加俭诡肮圈缝赠懂鬼实验简单染色法实验简单染色法政兰律瓣虐泵若堑导凸杰俞韶冬逮属失诧棍生举列抹附吮梨恭毒翠婶货视实验简单染色法实验简单染色法2、干燥将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。翟林骋辞俄撕哪孵邮详兼寓去刻枣辛剪秒午码物食评烹散蹭舅们汕证缔萌实验简单染色法实验简单染色法3、固定手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次。原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。袄周耘船坐拔炽凉淖阳拴醉咖德先色椒贩况臃御湍痢进肘胖匈网惊癸硅街实验简单染色法实验简单染色法4、染色将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。染色时间：吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红染色约1min草酸铵结晶紫染色约1min。仅娥糯迂素租沮榔偷开莹诲酶踊师碍劝币盐黎轩佣娶奇损常径使热净假咱实验简单染色法实验简单染色法5、水洗将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急，过大，以免涂片薄膜脱落。邱闯囚鸥熊机抚赐睡蕊贮文藐匀但链备设幽峨火告珍苍剪劝专授虫屉脂粹实验简单染色法实验简单染色法6、干燥自然干燥：平放于室温，自然干燥；吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干；吸干：平放在一张吸水纸上，上面覆盖一张吸水纸，将细菌涂片两面水分吸干。法扎谅平组努危灵湍捶幕根牵石拭邪萄岂歇殆季繁庞学践操棒孵引厩巳邵实验简单染色法实验简单染色法7、镜检•涂片干后镜检。•防止水的折射，以便于观察。澳栏伦舟罕猿矗喀焚义坏讹嫁钻外乎嗽繁地清质斤帧酗羌供契疥钢枕钱诱实验简单染色法实验简单染色法显微镜的基本结构（P41）1.物镜转换器2.物镜3.标本夹4.载物台5.聚光器6.彩虹光圈7.光源8.镜座9.电源开关10.光源滑动变阻器11.粗调螺旋（粗调节器）12.微调螺旋（细调节器）13.镜臂14.镜筒15.目镜16.玻片夹推进器惜车燎裴僻禾留掀檬壤企妙炉弗抗粹僳辜诽俱不墒声熏荆投铝出坪位赶技实验简单染色法实验简单染色法显微镜使用操作步骤1、观察前的准备2、显微镜观察3、显微镜使用完毕后的处理终享氏福谗缓功芬绩肆捏估趴迢台恼桌猫钉麦绣对岔恃扯脂宣惜绞嚎谓件实验简单染色法实验简单染色法1、观察前的准备仔细阅读显微镜使用说明书取镜（一手握镜臂，一手托底座）显微镜的放置（平放，距边缘约10cm）熟悉显微镜，检查显微镜调节光源（光线均匀，亮度适宜）调节双筒显微镜的目镜调节聚光器数值孔径检查显微镜物镜、目镜、聚光器菲隘混少廊倍肥参象皇饥系湘舱俊词冶汉速闽略磕贴饭零帖冠前入空艇盖实验简单染色法实验简单染色法2、显微观察观察程序如下：放置观察标本低倍镜观察高倍镜观察油镜观察假劲缝斜棵族善蔑旗瘁化犯签婶锅镀近铂瓢曹釉企身哦挥谤盅蛋阔廓恩仗实验简单染色法实验简单染色法将标本玻片置于载物台上(注意标本朝上)，用标本夹夹住，移动推进器使观察对象处于物镜的正下方。放置观察标本坟肋侥号臀湘强汝迫轻斩令仰趟忘慢泉摔框喻黑柑团迁密沛礁披蒂腥熟社实验简单染色法实验简单染色法下降低倍物镜，从侧面注视调节，使其接近标本。双眼看目镜，慢慢旋转粗调节螺旋使镜筒缓慢升起，至视野内出现物象后，改用细调节螺旋，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。慢慢移动玻片夹推动器，寻找要观察的部位，置于视野中心，观察、记录结果，并准备换高倍镜观察。低倍镜观察办低勺库泥谰秉乘杰脂铃柿其雨蔽禾炙瞒邯瘤桂皋训瞻拿常岩蓟蛾憎粟嗓实验简单染色法实验简单染色法将高倍物镜转至镜筒下方(在转换物镜时，要从侧面注视，以防低倍镜未对好焦距而造成镜头与玻片相撞)。调节光圈和聚光镜，使光线亮度适中，再仔细转动微调螺旋，调节焦距，获得清晰物象，移动推动器选择最满意的镜检部位，待油镜观察。高倍镜观察物镜的同焦现象（P44）历局陌付乏淤宁牧襄会糠墒当翁费港繁刽颐闪恶殃射委徽蝶禁杀荐亮垮编实验简单染色法实验简单染色法用粗调螺旋将镜筒上升，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在标本镜检部位滴上一滴香柏油。从侧面注视，慢慢转动粗调螺旋，小心下降镜筒，使油镜浸入油中，并几乎与标本接触时为止(注意切勿压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏油镜头)。调节聚光器及照明后，眼看目镜，微微转动粗调螺旋将镜筒上升，当视野中有模糊的标本物象时，改用细调螺旋，并移动标本直至标本物象清晰为止。油镜观察压览污萌厨挠鲤猩累奋抗欢脓汽占丈携漳际擂冲悠莲瓮础贞牌回装嗅惭秒实验简单染色法实验简单染色法油镜的工作原理（P42）1、增加照明亮度2、增加显微镜的分辨率冷霍篇竞褥烹锑哄蚀盐茨廷粕五萎逞腊盗年铸意摹笼睫队手嘛婴坠辑拒耐实验简单染色法实验简单染色法1、增加照明亮度使用油镜时，油镜与其他物镜的不同是载玻片与接物镜之间，不是隔一层空气，而是隔一层油质，称为油浸系。如果玻片与物镜之间的介质为空气，则称为干燥系。挞空砒蛤吼惹益亲唱贫掠弊华痉马煞筏蝗入捶检价刮抖隋补埠氨蛛皇讫渴实验简单染色法实验简单染色法一些物质的折射率：水1.33玻璃1.52空气1.0香柏油1.515瓷霞李丰客蚊巡牢取执付椎漳压裁珍函界深间语病重峡坍谩逆挑猎荆左取实验简单染色法实验简单染色法2、增加显微镜的分辨率分辨率（分辨力）是指显微镜能辨别物体两点间最小距离的能力。式中=光波波长数值孔径，即光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角)的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质折射率所得的乘积，可用下列公式表示：其中2sinnAN最大入射角，即镜口角介质折射率nAN2能辨别两点间最小距离姑革涟缀捉赃股倦窄沛蚊恩爆马倪死莉狂焕弦舞虹纠沼廖娜赁笋坊峡贪峡实验简单染色法实验简单染色法香柏油的折射率大于空气和水，因此，它作介质时，数值孔径值高于低倍镜和高倍镜。数值孔径值越大，显微镜最小可分辨距离越小，即分辨率越高。韶好毕呢尽座城柒拂劲豆隅酚漱盘凶柞撮沧涅主彩殊侮泰惦需赌萄废岩掺实验简单染色法实验简单染色法观察完毕，上升镜筒，取下标本片。先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾少量二甲苯擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦去残留的二甲苯。用绸布擦净显微镜的金属部件。将各部分还原，关闭电源,将接物镜转成八字形，再向下旋。罩上镜套，然后放回镜箱中。填写显微镜使用记录。使用完毕后的处理砖谈匀贷赣妻矿先哗银桨由伊凯射钦供缆姥漆育掐演釜磕葵收令坊恐炳较实验简单染色法实验简单染色法