新药申报资料4

中药注册分类6第一部分：综述资料编号4泽泻白术胶囊申报资料对主要研究结果的总结及评价项目负责人：吴义权资料整理者：石海霞资料审读者：吴义权联系人：李璐华联系电话：[phone]新药申报单位：安徽滴石制药股份有限公司对主要研究结果的总结及评价一、处方规格及制备工艺1.处方：泽泻156.25g、白术62.5g2.规格：0.5g/粒3.制备工艺：①泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可4.生产工艺4.1．泽泻胶囊的工艺选择泽泻胶囊由泽泻与白术组成,有清热解毒之功,对晕动症有良效。按标准规定项下的提取方法,两味药材的有效成分提取率太低,且操作麻烦,生产周期长,现采用新的提取方法,提取率大幅度增高,成本大幅度下降。本试验采用与质量标准项下相同的方法对泽泻中的有效成分泽泻醇B乙酸酯与白术中的有效成分苍术酮的测定。对提取工艺进行考察,为泽泻胶囊制备工艺的确定,提供实验依据。4.1.1实验材料泽泻与白术(购于和义堂中药饮片公司),泽泻醇B乙酸酯与苍术酮(购于中国药品生物制品检定所),SSIPC2000高效液相色谱仪,泵:seriesⅢ型,检测器型号Mode1-500,所用溶剂均为分析纯,流动相配制用色谱纯,水为重蒸馏水色谱柱:C18ODS柱(250mm、4.6mm、5mm)(天津市兰博实验仪器设备有限公司)。4.1.2方法与结果4.1.2.1工艺设计泽泻的有效成分为泽泻醇B乙酸酯,白术有效成份为苍术酮。根据二者的性质,采用乙醇回流法。将提取后的提取物皆干燥成粉末,再测其含量,计算其提取率。以二者的提取率(提取物中有效成份的量除以原药材中有效成份的量)为指标,以乙醇浓度,溶媒倍数、提取时间、提取次数为影响提取率的四个关键因素,每个因素取3个水平,用正交表L9(34)安排试验,见表1。表1泽泻、白术提取率的因素水平表水平ABCD乙醇浓度提取次数溶媒倍数提取时间（h）160%1812370%80%2310121.524.2.样品制备分别取泽泻(泽泻醇B乙酸酯含量3.2%)与白术(苍术酮含量10.9%)各10kg按表2的设计方案进行。4.2.3含量测定4.2.3.1泽泻提取物中泽泻醇B乙酸酯的含量测定色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,乙晴-0.4%磷酸溶液(13∶87)为流动相,检测波长为327nm,理论板数按泽泻醇B乙酸酯峰计算应不低于1000。对照品溶液制备:精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量,置棕色瓶中,加50%乙醇制成1ml含40μg的溶液,即得(10℃以下保存)。供试品溶液制备:取泽泻干粉0.2g,精密称定,精密加入50%甲醇100ml,称定重量,超声处理30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量、摇匀、滤过,精密量取续滤液5ml置25ml棕色量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,即可。测定法:吸取供试品与对照品各10μl,注入液相色谱仪,即可。4.2.3.2白术提取物中苍术酮的含量测定色谱条件与系统适用性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相;检测波长为280nm。理论板数按苍术酮峰计算应不低于2500。对照品溶液的制备:精密称取在60℃减压干燥4h的苍术酮对照品适量,加甲醇制成每1ml含60μg的溶液。供试品溶液的制备:取本品粉末约0.1g,精密称定,加70%乙醇50ml,加热回流3h,放冷,滤过,滤液置100ml量瓶中,用少量70%乙醇分次洗涤容器和残渣,洗液滤入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,摇匀。精密量取1ml,置10ml量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得。测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。4.2.4结果判定表2泽泻、白术样品制备设计表组号ABCD泽泻醇B乙酸酯苍术酮提取率%提取率%浓度次数倍数时间11(60%)18130.340.872.487.184.294.451.535.291.674.392.285.247.829.278.156.488.663.6212101.531312242(70%)123522316231273(80%)1328321393321泽泻醇K1187130200210212213B乙酸K2235242212乙酯K3214265223R48.4135233.3苍K1222105182178201186术K2194217185.9酮K3149243197R73.113815.522.8表3泽泻、白术提取新工艺与标准工艺比较名称浸膏得率浸膏含量提取率（%）新工艺泽泻21.613.994.2（泽泻醇B）白术44.323.394.7（苍术酮）泽泻13.813.658.6（泽泻醇B）标准工艺白术16.534.151.6（苍术酮）由表2R值可知,在先定的因素条件下,在泽泻的工艺中以泽泻醇B乙酸酯的提取率为考察指标,因素BACD,以次数为影响提取效果的最显著因素,乙醇浓度次之。提取时间最小,结合K值分析,最佳工艺为:70%乙醇提取3次,加12倍量提取2h。为节省成本,采用70%的乙醇提取3次,加12倍量,提取1h。在白术的工艺中,以苍术酮的提取率为考察指标,因素BADC,提取次数为影响提取效果的最显著因素。乙醇的浓度次之,加溶剂的倍数影响最小,结合K值分析,最佳工艺为60%乙醇提取3次,加溶剂12倍,提取1.5h,为节省成本,采用60%乙醇,提取3次,加溶剂8倍,提取1.5h。4.2.5对比试验将上述筛选的最佳工艺条件与原标准项下工艺比较。(药材同上批)经以上比较知该工艺明显优于原标准项下工艺,因此新工艺切实可靠、经济、省时,成本大幅度降低,可作为金银花和黄芩的提取工艺。4.3泽泻胶囊的生产工艺○1泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可。4.4中试一般研究资料4.4.1泽泻胶囊中试按上述确定的制备工艺技术路线进行三批泽泻胶囊中试，并对三批中试样品进行质量检查，以考察工艺技术路线的稳定性和合理性，结果见表1-1。表1-1三批泽泻胶囊中式数据批号配方量（万粒）药材量（kg）浸膏量（万粒）成品数（万粒）成品率（%）111201145.6251.2480.9898111202145.6251.2480.97597.5111203145.6251.2480.97597.54.4.1.1崩解时限取泽泻胶囊6粒，照《中国药典》2010年版一部(附录ⅫA)检查，分别置于崩解仪吊篮的玻璃管中，开动崩解仪，使吊篮浸入1000mL烧杯中，烧杯中盛有37±1℃的水，观察崩解情况，并记录时间。结果见表1-2。三批泽泻胶囊均在30分钟内完全崩解。表1-2泽泻胶囊崩解时限检查结果批号123456平均（min）111201101010109.7109.9511120210109.79.9101110.05111203101010101010104.4.1.2装量差异取三批泽泻胶囊各20粒，照《中国药典》2010年版一部(附录IL)检查重量差异，结果见表1—3，三批样品均未超出10％的重量差异限度。表1-3三批供试品重量差异检查结果：装量（g）供试品批号11120111120211120310.51070.50260.507820.50500.51050.505530.51040.50840.519540.51070.51460.507050.50890.59740.509960.51000.51470.510670.50160.50970.510980.50520.51960.599590.50820.51170.5179100.51090.50950.5051110.50510.50950.5178120.50750.51940.5095130.51150.50950.5114140.50770.51420.5055150.50950.50280.5015160.50910.51440.5152170.50900.51070.5097180.51150.51760.5055190.50950.50250.5175200.50480.50280.5025平均装量0.50780.51510.51424.4.2色谱条件与系统适用性试验色谱柱：德国Nucleosil-CJ，(4．6nmxl50mm,5pm)；甲醇一O．5％醋酸(10：90)为流动相；检测波长为312nm。理论板数按原峰计算应不低于1800。4.4.2.1精密称取泽泻醇B乙酸酯对照品适量，加甲醇制成每lml含10ug的溶液，即得。4.4.2.2供试品溶液的制备取装量差异项下本品，混匀，取适量，研细，取约0．29，精密称定，精密加甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率：160W，频率：50kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，用0．45um微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。4.4.2.3测定方法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10u1、20u1，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品每粒含泽泻中泽泻醇B乙酸酯计，不得少于0．9mg。三批泽泻胶囊含量测定结果见表2-4。表2-4泽泻胶囊中泽泻醇B乙酸酯含量测定批号111201111202111203含量0.93mg/粒0.91mg/粒0.91mg/粒4.4.3结果结果表明三批中试样品崩解度检查均在30分钟内全部崩解，装量检查未超出10％的重量差异限度，泽泻醇B乙酸酯含量分别为0．93mg／粒、0．91mg／粒和0．9mg／粒，说明工艺技术路线稳定、合理。二、质量标准研究泽泻胶囊ZeXiejiaonang【处方】泽泻白术【制作】○1泽泻用70%乙醇提取3次，各加12倍量溶媒每次提取1h,提取液过滤后,回收乙醇减压浓缩至相对密度为1.2的稠膏;②另将白术用60%乙醇提取3次,各加8倍量溶媒,每次提取1.5h,提取液过滤后回收乙醇减压浓缩、干燥即可。③将①②与适量淀粉混匀、干燥、充填胶囊,过塑、包装即可。【性状】本品为硬胶囊，内容物为棕褐色的颗粒；味微苦。【鉴别】(1)取本品2粒，研细，加石油醚30ml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，滤过，残渣再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。另取泽泻对照药材10g，按照供试品溶液制备方法制备，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取供试品溶液10μl,、对照品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿一甲醇一水(65:35:10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。(2)取本品2粒，用70%乙醇溶解，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。另取白术对照药材20g，加石油醚3Oml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80Hz)，滤过，残渣加70%乙醇3Oml，超声处理20分钟(温度30℃，功率80HZ)，滤过，残渣，再超声提取一次，合并提取液，浓缩并用70%乙醇定容至10ml，作为供试品溶液。取苍术酮标准品0.5mg，甲醇定容至10ml，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二甲苯一醋酸乙酷一异丙醇一甲醇一浓氨试液(5:3二1.5:1.5:0.5)为展开剂，另槽加入等体积的