河北科技大学药物检验工第04讲_药物的鉴别

第六章药物的鉴别内容化学鉴别法2光谱鉴别法3色谱鉴别法4概述1第一节概述目的：鉴别药物真伪。而非对未知物的鉴别。化学反应仪器分析测定物理常数综合分析药物鉴别特点？已知物的确证试验1鉴别试验为个别分析，2通常采用不同方法鉴别，综合分析3原料药鉴别项下试验项目为3～4有的仅1～2个，制剂鉴别项目一般比原料药少4药物鉴别方法方法化学鉴别法光谱鉴别法色谱鉴别法生物学法四、鉴别方法化学鉴别法光谱鉴别法生物学法HPLC、GC鉴别法薄层色谱鉴别法纸色谱鉴别法呈色反应鉴别法紫外光谱鉴别法红外光谱鉴别法沉淀生成反应鉴别法色谱鉴别法气体生成反应鉴别法测定生成物的熔点荧光反应鉴别法第二节化学鉴别法Ch.P、USP一般鉴别试验不同的称号JP、BP定性反应一、一般鉴别试验（generalidentificationtest）（一）概念、特点及试验项目以药物的化学结构及其物理化学性质为依据，通过化学反应来鉴别药物真伪无机药物：根据其组成的阴离子和阳离子的特殊反应，并以药典附录III项下的一般鉴别试验为依据。有机药物：采用典型的官能团反应。一般鉴别试验的项目（2005版药典有35项）。一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物。一般鉴别试验仅供确认单一的化学药物，如为数种化学药物的混合物或有干扰物质存在时，除另有规定外，应不适用。通过一般鉴别试验只能证实是某一类药物，而不能证实是哪一种药物。（二）化学鉴别方法气体产生荧光出现沉淀生成颜色改变真伪药物有效成分的有无判断1、焰色试验：常用干法。利用某些元素所具有的特异焰色，可鉴别它们为哪一类盐类药物。方法：取铂丝，用盐酸湿润后，蘸取供试品，在无色火焰中燃烧，使火焰显出特殊的颜色。2、显色反应鉴别法系指供试品溶液中加入适当的试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观测的有色产物。在鉴别试验中最为常用的反应类型有：1）三氯化铁呈变色反应——酚羟基或水解后产生酚羟基2）异羟肟酸铁反应——多为芳酸及其酯类、酰胺类；酯与羟胺作用可生成异羟肟酸，再与三氯化铁作用即生成红色的异羟肟酸铁：羧酸衍生物均能进行上述反应，这是识别这类化合物与其他类型化合物的一种常用的方法。3）茚三酮呈色反应——脂肪氨基（氨基酸）；苯并戊三酮，茚三酮所有氨基酸及具有游离α-氨基的肽与茚三酮反应都产生蓝紫色物质，只有脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生（亮）黄色物质。茚三酮反应分为两步：第一步是将氨基酸氧化形成CO2、NH3和醛，而水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮和另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成蓝紫色有色物质。称为罗曼紫（Ruhemann'spurple）。此化合物最大吸收峰在570nm波长处。由于此吸收峰的大小与氨基酸释放的氨量成正比，因此可作为氨基酸的定量分析方法法,医学上这个反应被用于鉴定指纹。4）重氮化-偶合显色反应——芳伯氨基或能产生芳伯氨基；5）氧化还原显色反应及其它颜色反应。银镜反应、菲林试剂、高锰酸钾3、沉淀生成反应鉴别法常用的这类反应有：1）与重金属离子的沉淀反应——在一定条件下，药物和重金属离子反应，生成不同形式的沉淀；2）与硫氰化铬铵（雷氏盐）的沉淀反应——多为生物碱及其盐，具有芳香环的有机碱及其盐；4、荧光反应鉴别法常用的荧光发射形式有以下类型：1）药物本身可在可见光下发射荧光；2）药物溶液加硫酸使呈酸性后，在可见光下发射荧光；3）药物和溴反应后，于可见光下发射出荧光；4）药物和间苯二酚反应后，发射出荧光及药物经其它反应后，发射荧光。5、气体生成反应鉴别法1）大多数的胺（铵）类药物、酰脲类药物以及某些酰胺类药物，可经强碱处理后，加热，产生氨（胺）气；2）化学结构中含硫的药物，可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；3）含碘有机药物经直火加热，可生成紫色碘蒸气；4）含醋酸酯和乙酰胺类药物，经硫酸水解后，加乙醇可产生乙酸乙酯的香味。芳香第一胺类的鉴别橙黄到猩红色沉淀供试品稀盐酸1ml0.1mol/L亚硝酸钠碱性β-萘酚试液（三）化学鉴别法实例NH2R+HNO2H+RN+N+OHNNROHNaOH加三氯化铁试液1滴即显紫色供试品加稀盐酸即析出白色水杨酸沉淀分离沉淀在醋酸铵试液中溶解水杨酸盐的鉴别苯甲酸盐取供试品的中性溶液，加三氯化铁试液，即生成赭色沉淀；加稀盐酸，变为白色沉淀。取供试品，置干燥试管中，加硫酸后，加热，不炭化，但析出苯甲酸，在试管内壁凝结成白色升华物。FeCl3反应，生成游离加稀HCl，沉淀分解COOH白色COONa73FeCl32OH-中性溶液COO6Fe3(OH)2OOC7NaCl2Cl-碱式苯甲酸铁盐（赭色沉淀）钠盐的鉴别铂丝盐酸无色火焰中燃烧供试品中性溶液醋酸氧铀锌试液火焰即显鲜黄色发生黄色沉淀Zn(UO2)3(CH3COO)9硫酸盐的鉴别白色沉淀分离沉淀不溶解供试品溶液白色沉淀分离沉淀溶解加入氯化钡试液加入醋酸铅试液二、专属鉴别试验（specificidentificationtest）根据每一种药物化学结构的差异及其所引起的物理化学特性的不同，选用某些特有的灵敏定性反应，来鉴别药物真伪的。是证实某一种药物的依据。第三节光谱鉴别法一、紫外光谱鉴别法1、原理、特点及适用范围原理：有机药物具有能吸收紫外可见光的基团，则显示特征的吸收光谱，不同结构的物质可产生不同的紫外－可见吸收光谱特点：具有一定的专属性，仪器普及率高，操作简单，应用范围广。缺点是光谱较简单，曲线性状变化不大，专属性小于IR。适用范围：含有芳环或共轭双键的药物在紫外光区有特征吸收，含有生色团和助色团的药物在可见光区有吸收。紫外光谱是物质在200～400nm的近紫外光区和400～800nm的可见光区的吸收光谱。UV图提供两个重要数据：吸收峰的位置和光吸收强度。由于药物分子中多含有紫外光区的生色基，因此紫外分光光度法广泛应用于药品检验。2、常用的方法对比吸收曲线一致性对比最大吸收波长和相应吸光度的一致性对比吸收系数的一致性对比最大、最小吸收波长和相应吸光度比值的一致性经化学处理后，测定其反应产物的吸收光谱特性。对比最大吸收波长和同时测定最小吸收波长的一致性规定一定浓度的供试品在最大吸收波长处的吸收度规定吸收波长和吸收系数法规定吸收波长和吸收度比值法二、红外光谱鉴别法特点：能反映出药物分子的结构特点，专属性强，准确率高。不单独使用本方法进行鉴别。方法：标准图谱对照法试样制备方法：压片法、糊法、膜法、溶液法第四节色谱鉴别法进行鉴别比移值Rf保留时间色谱鉴别法原理：不同物质在不同色谱条件下，产生各自的特征色谱行为。与对照品在相同条件下进行色谱分离，并比较其保留行为和检测结果是否一致来验证真伪。方法：（1）薄层色谱鉴别法在实际工作中，一般采用对照品（或标准品）比较法，要求供试品斑点的Rf值应与对照品斑点一致。(Rf的最佳范围0.3-0.5,可用范围0.2-0.8)薄层色谱法比移值(Rf)——定性参数原点到斑点中心距离原点到溶剂前沿距离Rf==ll0原点•l0l1l2前沿1、2——样品3——标准品前沿原点•••123配展开剂-饱和-点样-展开-显色。各步骤的注意事项化合物的极性越大，对固定相硅胶吸附力大，Rf小。反之，极性越小，对固定相为硅胶吸附力小，易于洗脱，Rf大展开剂的极性越大，对化合物的洗脱力也越大，Rf大。反之，极性越小，对化合物的洗脱力也越小，Rf小（2）高效液相色谱鉴别法和气相色谱鉴别法一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行试验。要求供试品和对照品色谱峰的保留时间应一致。含量测定方法为内标法时，可要求供试品溶液和对照品溶液色谱图中药物峰保留时间与内标物峰的保留时间比值应相同。hW1/20.5h0.607hW0tt0tR生物学法是利用微生物或实验动物鉴别法仪器鉴别方法增加快（2:1）UV,IR,HPLC(USP),TLC,PC(BP)药物鉴别方法新动向制剂广泛采用IR鉴别鉴别方法简练，专属性强平均每个品种收载2个鉴别反应其他鉴别方法（略）鉴别试验条件（一）溶液的浓度溶液的浓度主要指被鉴别物质的浓度，其大小影响结果的判断。如化学法中要观察沉淀、颜色；UV法中λmax,A、（二）溶液的温度温度过高可使产物分解，导致颜色变浅，甚至观察不到结果。%11cmE（三）溶液的酸碱度使反应物处于活化状态、反应产物处于稳定和以观察状态。（四）试验时间有机化合物的化学反应较慢，需要一定的反应时间和条件。（五）干扰成分的存在药物制剂的鉴别，其它成分则会干扰检查结果的现象观察。复习1、药物鉴别目的？鉴别药物真伪。而非对未知物的鉴别。2、典型鉴别反应？三氯化铁呈变色反应——酚羟基或水解后产生酚羟基茚三酮呈色反应——脂肪氨基重氮化-偶合显色反应——芳伯氨基或能产生芳伯氨基；3、紫外、红外光谱常见官能团位置4、薄层色谱：比移值大小、过程、点样大小、饱和目的、展缸使用、极性与比移值关系、1、某化合物可与三氯化铁试液反应产生绿色，该化合物为：（D）A．含酮基化合物B．含氮杂环化合物C．含酯基化合物D．含酚羟基化合物2、能与Fehling（斐林试剂）试剂生成红色沉淀的是：（A）A．含醛基的化合物B．含酮基的化合物C．含酚羟基的化合物D．含酯基的化合物3、能与茚三酮试液反应生成蓝色到蓝－紫色的化合物是：（A）A．氨基酸类B．多糖类C．生物碱类D．甾体类4、用于药物分析的紫外光区的波长范围是（B）A．190～270nmB．200～400nmC．400～900nmD．4000～400cm-1E．25～1000μm5、芳香第一胺类的药物可用下列哪种反应来鉴别(A)A．重氮化-偶合反应B．茚三酮反应C．高锰酸钾褪色反应D．焰色反应6.蔗糖加硫酸煮沸后，用氢氧化钠试液中和，再加何种试液，产生红色沉淀(C)A过氧化氢试液B硝酸银试液C碱性酒石酸铜试液D亚硫酸钠试液E硫代乙酰胺试液蔗糖是含有半缩醛基的双糖分子，其结构中含有醛基，具有还原性，能与碱性酒石酸铜(Fehling试液)反应，生成红色的氧化亚铜沉淀7、在薄层层析中化合物斑点的Rf值是指：（C）A．溶剂前沿移离薄层板底边的距离与化合物斑点移离薄层板底边的距离的比值B．溶剂前沿移离原点的距离与化合物斑点移离原点的距离的比值C．化合物斑点移离原点的距离与溶剂前沿移离原点的距离的比值D．化合物斑点移离薄层板底边的距离与溶剂前沿移离薄层板底边的距离的比值8、化合物A、B、C的极性大小顺序为ABC，在硅胶薄层板上展开的顺序为（Rf值由大到小）：（c）A．ABCB．BCAC．CBAD．ACB11、通常在薄层板展开前进行的“饱和”操作是为了：（B）A．减小化合物的Rf值B．减少边缘效应C．增大化合物的Rf值D．增加化合物之间的分离度12、硅胶薄层层析，用三氯甲烷－甲醇－水（7：1：2）（不能混溶）的混合溶剂为展开剂时，应取用：（）A．静置分层后的下层B．振摇1分种后的混合液C．静置分层后的上层D．搅拌均匀的混合液13、药物的紫外光谱参数，可供指认A、确认是何种药物B、分子结构中的各种基团C、分子中共轭骨架的有、无及主要属性D、分子量的大小E.分子中是否含杂原子。【答案】C16、三氯化铁试剂可用于芳胺类某些药物的区别：具三氯化铁反应的是A、利多卡因B、醋氨苯砜C、苯佐卡因D、对乙酰氨基酚E、普鲁卡因【答案】D对羟基苯基乙酰胺；扑热息痛；对乙酰氨基苯酚；对羟基乙酰苯胺；醋氨酚17、一种药物其水溶液加醋酸铅试液，加氢氧化钠试液生白色沉淀，加热变黑色沉淀是(D)A、维生素CB、水杨酸C、对乙酰氨基酚D、硫喷妥钠硫喷妥钠：静脉麻醉药[22-25]红外吸收光谱主要特征峰的波数是A.3750~3000cm-1B.2400~2100cm-1C.1900~1650cm-1D.1300~1000cm-1E.1000~650cm-122.υCN（B）23.υO-H（A）24.υ