维生素C的定量测定

实验八维生素C的定量测定1）学习和掌握用2,6-二氯酚靛酚滴定法测定植物材料中抗坏血酸含量的原理与方法。2）学习和掌握滴定法的基本操作过程；3）了解并掌握绿豆芽中维生素C的含量测定。实验目的实验原理Vc是人类营养中最重要的维生素之一，它与体内其它还原剂共同维持细胞正常的氧化还原电势和有关酶系统的活性。Vc能促进细胞间质的合成，如果人体缺乏Vc时则会出现坏血病，因而Vc又称为抗坏血酸。水果和蔬菜是人体抗坏血酸的主要来源。不同栽培条件、不同成熟度和不同的加工贮藏方法，都可以影响水果、蔬菜的抗坏血酸含量。测定抗坏血酸含量是了解果蔬品质高低及其加工工艺成效的重要指标。Vc具有很强的还原性。它可分为还原型和脱氢型。金属铜和酶（抗坏血酸氧化酶）可以催化Vc氧化为脱氢型。根据它具有的还原性质可测定其含量。2,6-二氯酚靛酚是一种染料，在碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。抗坏血酸具有强还原性，能使2,6-二氯酚靛酚还原为无色。当用2,6-二氯酚靛酚滴定含有抗坏血酸的酸性溶液时，滴下的2,6-二氯酚靛酚被还原成无色；当溶液中的抗坏血酸全部被氧化成脱氢抗坏血酸时，滴入的2,6-二氯酚靛酚立即使溶液呈现红色。因此用这种染料滴定抗坏血酸至溶液呈淡红色，即为滴定终点（表示溶液中的Ｖc刚刚全部被氧化），如无其它杂质干扰，样品提取液所还原的标准染料量与样品中所含的还原型抗坏血酸量成正比。根据染料消耗量即可计算出样品中还原型抗坏血酸的含量。CCCCCHCH2OHOOHOHHOHONO-OClClNOHOClCl+（蓝色）OH-H+抗坏血酸2,6-二氯酚靛酚（红色）CCCCCHCH2OHOOOHOHONOHOHClClH还原型2,6-二氯酚靛酚（无色）+脱氢抗坏血酸还原型氧化型实验材料、主要仪器和试剂实验材料：柚子仪器：天平、研钵、容量瓶、吸管、锥形瓶、微量滴定管、纱布试剂：2％草酸、1％草酸标准抗坏血酸溶液（0.1mg/mL）：用1％草酸溶液溶解。临用现配。0.１％的2,6-二氯酚靛酚溶液：２50mg2,6-二氯酚靛酚溶于１５0mL含５２mg碳酸氢钠的热水中，冷却后再用蒸馏水稀释至２５０mL，滤去不溶物，贮棕色瓶内，4℃保存一周有效。一、提取称取新鲜柚子20g，加入2％草酸溶液500ml，研磨成匀浆，滤纸过滤。滤渣用2％草酸洗几次，合并滤液，记录滤液总体积。操作步骤二、标准液滴定准确吸取１.0mL抗坏血酸标准液（含0.１mg抗坏血酸）于100mL锥形瓶中，加９mL1％草酸溶液，用2,6-二氯酚靛酚滴定至淡红色（15S内不褪色即为终点）。记录所用染料溶液的体积V标（mL），计算出1mL染料相当于多少mg抗坏血酸的量（mg）（记作T）。取１０ml1％草酸作空白对照，按以上方法滴定（ＶＢ）。三、样品滴定准确吸取样品提取液（上清液或滤液）两份，每份１0.0mL，分别放入２个100mL锥形瓶中，按上面的操作进行滴定并记录所用染料溶液体积（mL）。记作ＶＡ四、结果计算取两份样品滴定所用染料体积平均值，代入下式计算100g样品中还原型抗坏血酸的含量：ＶＣ含量（mg/100g样品）W×Ｄ（VＡ－ＶＢ）×T×Ｃ×100＝式中：VＡ—滴定样品提取液消耗染料平均值（mL）ＶＢ—滴定空白对照所耗用的染料的平均ml数T—１mL染料所能氧化抗坏血酸mg数Ｃ—样品提取液的总ml数Ｄ—滴定时所取的样品提取液ml数W—样品重量（g）W×Ｄ（VＡ－ＶＢ）×T×Ｃ×100＝ＶＣ含量（mg/100g样品）（1）样品提取液定容时若泡沫过多，可加几滴辛醇或丁醇消泡。（２）样品的提取液制备和滴定过程，要避免阳光照射和与铜、铁器具接触，以免抗坏血酸被破坏。（３）滴定过程宜迅速，一般不超过2min。样品滴定消耗染料1～4mL为宜，如果超出此范围，应增加或减少样品提取液用量。附注（４）２％草酸有抑制抗坏血酸氧化酶的作用，而１％草酸无此作用。（５）提取的浆状物如不易过滤，也可离心，留取上清液进行滴定。１、该法测定抗坏血酸有何不足？２、用2%草酸提取样品的目的是什么？思考题1．用本法测定抗坏血酸含量虽简便易行，可以一次测定大量的样品。但有下述缺点：第一，本法只能测定还原型抗坏血酸，不能测出具有同样生理功能的氧化型抗坏血酸和结合型抗坏血酸。第二，样品中的色素经常干扰对终点的判断，可预先用白陶土脱色，或加入2～3ml二氯乙烷，以二氯乙烷层变红为终点。2．用2％草酸制备样品提取液，可有效地抑制抗坏血酸氧化酶，以免抗坏血酸为氧化型而无法滴定。如果样品中有较多亚铁离子（Fe2＋）时，亦会使染料还原而影响测定，这时应改为8％乙酸制备样品提取液。参考答案