生物制品化学规定规程

生物制品化学规定规程本规程载人的化学检定项目，如采用其他方法测定，其结果与本规程所列应无显著差异。如遇制品质量存在疑问时，其最后判定应以本规程所列方法测定结果为准。标准液的配制与标定方法参看最新版《中国药典》。PH值测定（电位法）1仪器校准（定位）用标准缓冲溶液应使用分析纯标准缓冲物质配制。1.10.05mol/L邻苯二甲酸氢钾溶液称取于115±5℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4）10.12±0.01g，溶于蒸馏水，并稀释至1000ml。1.20.025mol/L磷酸氢二钠和0.025mol/L磷酸二氢钾混合溶液分别称取在115±5℃干燥2～3小时的磷酸氢二钠（Na2HPO4）3.53±0.01g和磷酸二氢钾（KH2PO4）3.39±0.01g，溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。1.30.01mol/L硼砂溶液称取硼砂（Na2B4O7·10H2O）3.80±0.01g（注意：不能烘！），溶于预先煮沸过15～30分钟并迅速冷却的蒸馏水中，并稀释至1000ml。置聚乙烯塑料瓶中密闭保存。标准缓冲溶液于0～50℃的标准pH值温度(℃)0.05mol/L邻苯二甲酸氢钾0.025mol/L混合磷酸盐0.01mol/L硼砂04.016.989.4654.006.959.39104.006.929.33154.006.909.28204.006.889.23254.006.869.18304.016.859.14354.026.849.10404.036.849.07454.046.839.04504.066.839.022操作使用玻璃电极酸度计测定，操作方法按仪器说明书进行。用两种标准缓冲溶液校正或核对，相差不得超过0.05。固体总量测定甲、105℃干烤法1操作精确量取一定体积样品于干燥至恒重的扁称量瓶中，置105℃烤箱中烘至恒重。2计算烘干后样品重量样品固体总量%（g/ml）=──────────×100样品ml数乙、50℃干烤法1操作精确量取1mlA群脑膜炎球菌多糖菌苗半成品原液于已干燥至恒重的称量瓶（2×2.5cm）中，置50℃干燥箱中，干燥至恒重。2计算同105℃干烤法。半微量定氮法1试剂1.1硫酸化学纯，比重1.84。1.2消化剂硫酸铜（CuSO4·5H2O）1份与硫酸钾（K2SO4）10份共同研细混匀即成。1.312.5mol/L氢氧化钠液取氢氧化钠500g，加蒸馏水至1000ml，摇匀。1.42%硼酸吸收液硼酸20g加蒸馏水使溶解成1000ml，加混合指标剂10ml，摇匀。1.5混合指示剂0.2%（g/ml）溴甲酚绿酒精溶液5份与0.1%（g/ml）甲基红酒精溶液2份混合配成。1.6标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸溶液。2操作2.1消化准确量取一定体积样品（含氮量在1～2mg左右）于凯氏定氮瓶中，加消化剂约0.3g，浓硫酸1.0ml进行消化，至澄明蓝绿色，继续消化约60分钟，同时做空白。2.2蒸馏与滴定取10ml硼酸吸收液于100ml三角瓶内，将凯氏蒸馏器冷凝管末端浸入硼酸吸收液内，将消化好的样品移入凯氏蒸馏器内，用蒸馏水洗定氮瓶3～4次，洗液亦移入蒸馏器内，再加5ml12.5mol/L氢氧化钠溶液，然后进行蒸馏，待接收液总体积约35～50ml,将冷凝管末端取出液面，让蒸汽冲洗约1分钟，再用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，接收液用标准0.01mol/L盐酸或0.005mol/L硫酸进行滴定，至溶液显著变色。3计算（样品滴定数–空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14样品总氮含量(mg/ml)────────────────────────样品ml数附注1.蒸馏前应蒸洗蒸馏器15分钟。2.蒸汽发生瓶内应加数滴硫酸及甲基红指示剂至呈明显红色。蛋白质含量测定甲、钨酸沉淀法1试剂1.110%钨酸钠溶液取钨酸钠10g，加蒸馏水使溶解成100ml。1.20.33mol/L硫酸溶液量取化学纯硫酸1.86ml，缓缓注入适量的蒸馏水中，待冷加水稀释至100ml。1.30.145mol/L氯化钠溶液取氯化钠9g，加蒸馏水使溶解成1000ml。2操作2.1钨酸除蛋白质精确量取样品2ml加蒸馏水14ml，加10%钨酸钠2ml，0.33mol/L硫酸2ml，摇匀，静置30分钟过滤。2.2精确量取样品1ml，用0.145mol/L氯化钠溶液准确稀释至每ml含氮量1mg左右。2.3精确量取稀释液1ml及除蛋白质滤液5ml，分别移入凯氏定氮瓶中，用半微量定氮法测定样品的总氮及非蛋白氮含量。3计算样品总氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×稀释倍数样品非蛋白氮含量(mg/ml)=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×12样品蛋白质含量(g/ml)=（总氮-非蛋白氮）×6.25×1/10附注1.样品蛋白质含量如超过10%(g/ml)，除蛋白质时应适当加大样品稀释倍数，10%钨酸钠及0.33mol/L硫酸用量相应地按比例增加，使溶液钨酸浓度仍保持1%。2.总氮与非蛋白氮可用同一空白。乙、三氯醋酸沉淀法12%三氯醋酸溶液取三氯醋酸12g，加蒸馏水溶解至100ml。2操作精确量取一定体积的样品（含蛋白质6～12mg左右，于10ml尖底离心管中，加等体积的12%三氯醋酸混匀，放置半小时后3000r/min离心30分钟，倾净上清，沉淀用蒸馏水约3ml（分数次）洗入凯氏烧瓶，按半数量定氮法测定氮含量。3计算（样品滴定数–空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14样品蛋白质含量(mg/ml)──────────────────────×6.25样品ml数丙、微量法（Lowry法）1.试剂1.14%碳酸钠溶液取4g碳酸钠，加蒸馏水溶解成100ml。1.20.2mol/L氢氧化钠溶液取0.8g氢氧化钠加蒸馏水，溶解成100ml。1.30.04mol/L硫酸铜溶液取1gCuSO4·5H2O加蒸馏水溶解成100ml。1.42%酒石酸钾（或0.1mol/L酒石酸钠）取2g酒石酸钾（或酒石酸钠），加蒸馏水溶解成100ml。1.5碱性铜液临用前取试剂1.1和1.2各25ml，试剂1.3和1.3各0.5ml混匀配制而成。1.6酚试剂称取100g钨酸钠(Na2WO4·2H2O),25g钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)，置1500ml烧瓶中，加入700ml蒸馏水，50ml85%磷酸及100ml浓盐酸，上联回流管（使用木塞或锡纸包裹的橡皮塞）微沸加流10小时，取下回流管，加入150g硫酸锂，50ml蒸馏水，几滴溴液，煮沸约15分钟，驱除过量的溴。冷却，加蒸馏水稀释至1000ml，过滤，为酚试剂贮备液。酚试剂贮备液经标准氢氧化钠液滴定，测定酸浓度，而后用蒸馏水稀释至相当1mol/L盐酸浓度，即为酚试剂。1.7标准蛋白质溶液取牛血清白蛋白标准品（由检定所统一标定发给），准确稀释至1mg/ml(含0.02%NaN3)，为标准蛋白质贮备液。精确量取标准蛋白质贮备液2.5ml于25ml容量瓶中，用含0.02%NaN3的蒸馏水稀释至刻度，为标准蛋白质溶液（100μg/ml）。2操作2.1样品精确量取一定体积样品（含蛋白质50μg左右）于试管中，加5ml碱性铜液，混匀，于室温放置10分钟，快速加入0.5ml酚试剂，摇匀，于室温放置30分钟，用650nm波长或红色滤光片比色（呈色后，如发现混浊，经3000r/min离心15分钟后再比色）。2.2标准曲线精确量取标准蛋白质溶液（100μg/ml）0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，分别置于试管中，加蒸馏水补至1ml，其余操作同样品，可得一标准曲线。3计算从标准曲线查出样品相当标准蛋白质溶液之ml数A；A×0.01%样品蛋白质含量（g/ml）=────────样品ml数附注检测A群脑膜炎多糖抗原半成品原液可取1ml（含抗原3～10mg）。硫酸铵含量测定1试剂1.11mol/L氢氧化钠液取化学纯氢氧化钠20g，加蒸馏水溶解成500ml。2操作2.1除蛋白质方法同蛋白质含量测定。2.2蒸馏精确量取除蛋白质滤液10ml于凯氏蒸馏器内，加1mol/L氢氧化钠1ml，加少量蒸馏水，按半微量定氮法进行蒸馏、滴定。3计算样品硫酸铵含量%（g/ml）=（样品滴定数-空白滴定数）×标准盐酸mol/L×14×4.715×1/10氯化钠含量测定1试剂1.10.1mol/L硝酸银溶液取硝酸银17g，加蒸馏水溶解成1000ml。1.2标准0.05mol/L硫氰酸铵溶液1.35.5mol/L硝酸1.48%硫酸铁铵指示液取8g硫酸铁铵，加蒸馏水溶解成100ml。1.5饱和高锰酸钾取高锰酸钾6.5g，加蒸馏水溶解成100ml。2操作2.1精确吸取样品1ml，准确加入0.1mol/L硝酸银溶液5ml，混匀（蛋白质含量高者加2ml饱和高锰酸钾），加10ml硝酸(5.5mol/L)，直接加热消化至溶液澄清为止。待冷，加蒸馏水50ml,8%硫酸铁铵指示液1ml,用标准0.05mol/L硫氰酸铵溶液滴定至溶液呈淡棕红色，振摇匀仍不退色，即为终点。2.2空白试验准确量陬0.1mol/L硝酸银溶液5ml，加硝酸(5.5mol/L)10ml，可不消化，其余操作同样品。3计算样品氯化钠含量%(g/ml)＝（空白滴定数－样品滴定数）×硫氰酸铵mol/L×5.845钠离子含量测定（火焰光度法）1试剂标准钠溶液：精确称取于110℃干燥至恒重的NaCl2.9227g,用双蒸水溶解并稀释至1000ml,为500mmol/L标准钠溶液。2操作2.1样品精确量取样品0.5ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计，589nm波长（或黄色滤光片）测其透光度。2.2标准曲线精确量取标准钠溶液0.9、1.1、1.3、1.5、1.7ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钠含量分别为0.9、1.1、1.3、1.5、1.7mmol/L，其余操作同样品。3计算由标准曲线上查出稀释后样品钠含量为ammol/L。样品钠含量(mmol/L)=A×100钾离子含量测定（火焰光度法1试剂标准钾溶液：精确称取于110℃干燥至恒重的KCl0.3728g，用双蒸水溶解并稀释至500ml，为10mmol/L标准钾溶液。2操作2.1样品精确量取样品2ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于火焰光度计769nm波长（或红色滤光片）测其透光度。2.2标准曲线精确量取标准钾溶液0.15、0.30、0.45、0.60、0.75ml于50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，钾含量分别为0.03、0.06、0.09、0.12、0.15mmol/L，其余操作同样品。3计算由标准曲线上查出稀释后样品钾含量为Ammol/L。样品钾含量(mmol/L)=A×25枸橼酸离子含量测定1试剂1.1标准枸橼酸钠浓溶液精确称取枸橼酸钠(Na3C6H标准5O7·2H2O)0.5882g,加蒸馏水溶解，并准确稀释至100ml，为20mmol/L枸橼酸钠液。1.2标准枸橼酸钠溶液精密量取标准枸橼酸钠浓溶液5ml，用5%三氯醋酸准确稀释至50ml，为2mmol/L枸橼酸钠标准液。1.310%三氯醋酸：称取三氯醋酸10g，用蒸馏水稀释至100ml。1.45%三氯醋酸：称取三氯醋酸5g，用蒸馏水稀释至100ml。1.5砒啶(A·R)。1.6醋酸酐(A·R)。2操作2.1样品精确量取0.5ml样品，加4.5ml蒸馏水，加5ml10%三氯醋酸，混匀，置60℃水浴5分钟，离心去沉淀。精确量取1ml上清液于25ml玻塞试管中，加1.3ml吡啶，混匀，加5.7ml醋酸酐，立即混匀并置于31℃水浴，准确培育35分钟后，于425nm波长下测OD值，同时做空白试验：取1ml5%三氯醋酸代替1ml去蛋白后样品上清液，其余操作同样品。2.2标准曲线精确量取标准枸橼酸钠溶液0.0、0.25、0.50、0.75、1.0ml,分别加5%三氯醋酸1.0、0.75、0.5、0.25、0.0ml（其相应的枸橼酸钠离子含量为0、0.5、1.0、1.5、2.0mmol