西南大学硕士学位论文酿酒酵母发酵生产腺苷蛋氨酸及其分离纯化工

西南大学硕士学位论文酿酒酵母发酵生产腺苷蛋氨酸及其分离纯化工艺的研究姓名：林海军申请学位级别：硕士专业：农产品加工及贮藏工程指导教师：张惟广;江均平20080501酿酒酵母发酵生产腺苷蛋氨酸及其分离纯化工艺的研究作者：林海军学位授予单位：西南大学相似文献(4条)1.学位论文陈小龙生物合成法生产腺苷蛋氨酸2002腺苷蛋氨酸的生产制备方法主要有化学合成法、发酵法和酶促转化法3种.化学合成法采用S-腺苷同型半胱氨酸(S-adenosylhomocysteine)和甲基供体(CH,3I)合成,腺苷蛋氨酸有(+)和(-)两种构型,只有(-)构型才有生物活性,但合成产物中含有少量(+)腺苷蛋氨酸,且难以分离.发酵法采用在培养基中添加L-甲硫氨酸,用酵母发酵生产(-)型腺苷蛋氨酸,是60年代至80年代生产腺苷蛋氨酸的主要方法.酶促转化法与化学合成法、发酵法相比,具有终产物积累量高、分离提纯容易、反应周期短以及无污染等优点,因而是较为有效的工业化生产方法.酶促转化法主要利用腺苷蛋氨酸合成酶(S-adenosylmethioninesynthetase,又称ATP:L-methionineS-adenosyltransferase,EC2.5.1.6),催化底物L-甲硫氨酸和ATP生成(-)型腺苷蛋氨酸.该文建立了腺苷蛋氨酸的初步提取工艺,得到了腺苷蛋氨酸对甲苯磺酸盐实验室小样.2.学位论文邓娟娟利用重组毕赤酵母发酵生产S-腺苷甲硫氨酸工艺的研究2006腺苷甲硫氨酸，又称腺苷蛋氨酸，英文名为S-Adenosylmethionine，简称SAM，是甲硫氨酸的活性形式，广泛存在于动物、植物和微生物体内，也是人体内的一种重要生理活性物质。近年来临床研究表明SAM能治疗多种疾病，尤其对治疗肝内胆汁郁积、改善肝功能有良好的效果。SAM的相关药物目前国内还没有生产，完全依靠进口，因此近年来成为国内的研究热点。SAM可以由化学合成、体外酶促合成或经微生物发酵三种途径得到，而通过微生物发酵，再从中提取精制SAM是目前其工业化生产的主要途径。本研究通过在毕赤酵母GS115中导入SAM合成酶基因及敲除胱硫醚合成酶基因CBS两条途径，对该菌株进行了改造，得到一株高产菌株BIB2001，在摇瓶上产量由0.04g／L提高到2.03g／L，比出发菌株提高了51倍。首先通过摇瓶发酵对菌株BIB2001的发酵条件进行了初步的摸索。然后对该菌株的发酵工艺作进一步的研究，在5L发酵罐上对溶氧、pH、搅拌转速、通气量等发酵参数及补料工艺进行了系统的研究和优化，确定了合适的发酵工艺，SAM平均产量达到15g／L。最后在5L工艺基础上将发酵规模扩大到20L，并对工艺作了相关改进，稳定工艺后SAM产量达到22g／L左右。本论文还对SAM的提取纯化工艺作了一定的研究，确定了初步的提取纯化工艺为：先用乙酸乙酯结合硫酸提取，再用弱酸性阳离子交换树脂纯化，用甲醇结晶后，再与对甲苯磺酸反应，生成SAM硫酸对甲苯磺酸双盐，再用丙酮将该稳定盐沉淀下来，收集沉淀冻干得到SAM纯品。采用该工艺获得产品的纯度为88％，回收率在40％左右。3.期刊论文王水莲.张建勇.刘杰.高振不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母发酵生产腺苷蛋氨酸的影响-齐鲁药事2006,25(12)目的考察了不同甲醇流加策略对重组毕赤酵母发酵生产腺苷蛋氨酸(SAMe)的影响.方法在发酵过程中改变甲醇浓度测定外源蛋白表达量.结果当补加甲醇的量为0.5%时,腺苷蛋氨酸表达量最高.结论通过合适的策略控制甲醇的流加可提高外源蛋白表达量.4.会议论文王杰鹏.刘沛溢.王苗苗.谭天伟酿酒酵母发酵法生产S-腺苷蛋氨酸2008以一株具有S-腺苷蛋氨酸积累优势的酿酒酵母菌株SAM1529作为出发菌株。采用紫外线(UV)、LiCl和硫酸二乙酯(DES)为诱变剂,辅以乙硫氨酸平板抗性筛选。使用96孔板进行初筛,250mL摇瓶复筛。经过两轮的诱变处理,最终得到一株能够稳定遗传的优势菌株SAM0801,其摇瓶产量为0.69g/L,比出发菌提高12％。在5L发酵罐中诱变菌株的积累优势得到更加明显的体现,补加40g前体时,最高产量达到13.5g/L,生物量干重大于160g/L,L-蛋氨酸转化率约30％。并且通过在后期流加谷氨酸钠,提高了5L发酵罐发酵实验的稳定性。本文链接：下载时间：2010年6月23日