药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定

药物量效曲线及竞争性拮抗剂的pA2的测定[适用对象]药学、药剂学专业[实验学时]3学时一、实验目的学习激动剂量效曲线的测定方法，计算竞争性拮抗剂的pA2值二、实验原理在一定范围内药物随剂量或浓度的增加，效应也相应增加。以效应为纵坐标，剂量的对数值为横坐标，可绘制出对称的“S”型曲线。本实验选择对M、N受体有兴奋作用的乙酰胆碱（ACh），应用蟾蜍腹直肌为标本（含N2受体）进行实验，按累积浓度进行实验，观察ACh剂量的增加，肌肉收缩效应的变化，从而绘制量效关系曲线。三、仪器设备动物：蟾蜍1只器材：氧气瓶、器官浴槽、铁支架、双凹夹、肌张力换能器、蛙板、探针、100μl微量注射器、10ml注射器、手术剪、眼科剪、眼科镊、培养皿、烧杯、丝线、计算机试剂：10-4～10-1mol·L-1乙酰胆碱，10-3mol·L-1筒箭毒碱，任氏液四、相关知识点本课程知识点：受体激动药与受体拮抗药、竞争性拮抗、传出神经药物作用机制、量效曲线、pA2多课程知识点：受体学说、计算机操作、数学计算五、方法与步骤1.实验装置的连接：①通过进水口对恒温槽内供水至红线处，接通电源。按下加温开关，使恒温在37℃。②排液口用橡皮管连接到水杯，将任氏液装入浴管内，调节气泡至每秒3～4个。③将张力换能器固定，使其对准浴管的上口。2.标本制备与固定：取蟾蜍一只，断头处死，用探针破坏脑和脊髓，背位固定于蛙板上。剪开腹部皮肤，暴露腹直肌。在耻骨端及胸骨端，各以细线结扎，并自腹白线将两片腹直肌分离。将剪下的腹直肌标本，其一端固定于标本板固定钩上，迅速移至含有10ml任氏液的器官浴槽中，通入混合气体；另一端与张力传感器相连，调节微调器，使标本负荷1g，平衡0.5h，平衡期间每间隔15min更换一次营养液。3．给药方法及曲线描记按半对数摩尔浓度累积给药法，依次加入激动剂ACh，其方法见表：原始浓度（mol·L-1）抽取量（μl）浴槽终浓度（mol·L-1）10-5101×10-810-5203×10-810-5701×10-710-4203×10-710-4701×10-610-3203×10-610-3701×10-510-2203×10-510-2701×10-410-1203×10-410-1701×10-3………………按上述方法给药，当达到最小有效浓度后，每加一次药，将出现一次收缩，待收缩反应达最大时，立即加入下一剂量，直至加药后收缩反应不再增加，即达最大效应，即描记出ACh的量效曲线（第一条量效曲线）。连续用10ml营养液冲洗标本两次，再每间隔15分钟更换一次营养液，直至收缩张力恢复到正常（收缩张力曲线回至基线）。然后，加入拮抗剂筒箭毒碱10-3mol·L-130μl，即浴槽终浓度为3×10-6mol·L-1。10min后按上述方法重复制作ACh第二条量效曲线。4.实验结果分析1）从剂量反应曲线上求出未加入拮抗剂前激动剂引起50%反应所需要的浓度（mol·L-1），以[A0]表示。加入不同浓度筒箭毒碱后，ACh的剂量反应曲线右移。从曲线上求出筒箭毒碱存在时，ACh产生50%反应所需的浓度（mol·L-1），以[AB]表示。2）pA2值的计算以log（AB/A0-1）为纵坐标，相应的筒箭毒碱浓度的负对数（-log[B]）为横坐标，作图得一直线，此直线的方程式为：pAx=-log[B]+log（[AB]/[A0]-1）令[AB]/[A0]=X，则pAx=-log[B]+log(X-1)，其中[B]为拮抗药的浓度（mol·L-1）。pAx反映拮抗药的拮抗效能，表示在[B]浓度的拮抗药存在时，激动剂需加在X倍浓度才能达到未加拮抗药时的效应。pA2表示当某浓度拮抗药存在时，需将激动药的浓度加大1倍才能达到未加拮抗药时的效应，即当[AB]=2[A0]时，log2[A0]/([A0]-1)=0，pA2=-log[B]。上式表示当log(X-1)=0时，-log[B]轴的截距即为pA2值。5．注意事项1）标本勿用手拿，应以镊子取，亦不能在空气中暴露久，以免失去敏感性。2）标本不要触及浴管壁3）浴管中的任氏液量应始终保持一致，否则将影响药效。4）加药时不要滴在管壁上，应直接滴在液面上。5）每只注射器只能用来抽取一种浓度的药液。六、实验报告要求实验报告内容应包括：【实验目的】、【实验原理】、【器材】、【药品与试剂】、【动物】、【实验方法】、【结果】及【讨论】等部分。【结果】要对所得实验数据进行统计分析；【讨论】要对实验中遇到的问题进行描述并分析原因。七、思考题从量效曲线分析效应强度与药物剂量的关系，并指出其重要意义。合用具有协同或拮抗作用的药物，对量效曲线有何影响？八、实验成绩评定原理描述:20分调试过程:10分数据记录:10分解决问题的能力:20分资料搜集:10分实验结果:10分实验效果:10分