药理学与中药药理学实验

药理学与中药药理学实验（供医学、药学专业用）广西中医学院二00五年六月药理学与中药药理学实验（供医学、药学专业用）主编谢金鲜李爱媛编者郑作文张兴燊李萍杨秀芬林国彪杨柯李丽周芳广西中医学院药理教研室编前言《药理学与中药药理学实验》系根据中医药管理局科技教育司组织编写的“新世纪全国高等中医药院校教材”中《药理学》和《中药药理学》教学大纲的要求，结合我院本科教学计划进行编写。部分实验以计算机为主要设备,配以BL—410生物信息显示系统，对实验信号进行实时采集、处理、显示与储存，可直接完成实验数据分析和打印工作，代替了原有的低性能的生物信号观测系统如记纹鼓、记录仪等，使实验教学更具有先进性。本实验教材着重实用性，根据我院的实际情况而定；特色性，结合中医药特点来编写。内容分为三部分，第一部分为药理学实验；第二部分为中药药理学；第三部分为附录：BL—410生物信息显示系统的使用以及常用营养液的组成和配制等。本实验教材仅供我院研究生、医学本科生、药学本科生和专科生使用。限于我们的学识和水平，加上编写时间仓促，错误在所难免，恳请使用此书的广大师生赐教指正。编者二00五年六月目录药理实验教学基本要求……………………………………………………………1第一部分药理学实验一、实验基本操作训练………………………………………………………………4二、总论实验（不同剂量与给药途径对药物作用的影响）……………………11三、传出神经系统药物对麻醉猫血压的影响……………………………………13四、抗惊厥实验……………………………………………………………………16五、安定实验………………………………………………………………………18六、镇痛实验（扭体法）…………………………………………………………21七、镇痛实验（热板法）…………………………………………………………23八、中枢兴奋药物实验……………………………………………………………25九、强心苷对离体蛙心的影响……………………………………………………26十、利尿药物对动物尿量的影响…………………………………………………28十一、药物对离体子宫的影响……………………………………………………30十二、链霉素中毒的抢救…………………………………………………………32十三、半数致死量（LD50）测定…………………………………………………33十四、热原检查……………………………………………………………………35十五、溶血与凝聚检查法…………………………………………………………38十六、未知药测定…………………………………………………………………40第二部分中药药理学实验一、大黄、芒硝及两者配伍的泻下作用（碳末法）……………………………42二、华千金的镇痛作用（扭体法）………………………………………………43三、附子、强心苷对离体蛙心的作用……………………………………………46四、青皮对家兔离体肠平滑肌的影响……………………………………………47五、田七粉对小鼠凝血时间的影响………………………………………………49六、小鼠肠系膜微循环实验………………………………………………………51七、远志对小鼠的祛痰作用（酚红法）…………………………………………53八、钩藤、枳实对猫血压的影响…………………………………………………56第三部分附录附录1BL-410智能型生物信号显示与处理系统…………………………………59附录2常用血液抗凝剂……………………………………………………………65附录3实验动物的采血方法………………………………………………………66附录4几种易变质药物溶液的配制和保存方法…………………………………68附录5t值表………………………………………………………………………70附录6药理实验常用符号…………………………………………………………71附录7常用营养液的组成和配制…………………………………………………72附录8常用非挥发性麻醉药的剂量………………………………………………73附录9常用实验动物的注射量和使用针头规格…………………………………74实验六镇痛实验（扭体法）【目的】1、掌握镇痛药的实验法。2、比较度冷丁与罗通定的镇痛作用。【原理】应用化学刺激物注入小鼠腹腔内，引起深部的大面积而较久的疼痛刺激，致使小鼠产生扭体反应（腹部收缩成“S”形，躯干与后腿伸张、臀部高起及蠕行等）。以小鼠出现扭体的次数为痛反应指标，判断药物是否具有镇痛作用。【器材】鼠笼、天平、注射器等。【药品】0.2%度冷丁、0.2%罗通定、NS、0.6%冰醋酸【动物】小白鼠【方法】1、取小白鼠6只，称重，编号，随机分成3组。2、给药:一组0.2%罗通定0.2ml/10g体重，ip。二组0.2%度冷丁0.2ml/10g体重，ip。三组NS0.2ml/10g体重，ip。给药后20min，ip0.6%冰醋酸0.2ml/只，然后观察记录20min内小鼠出现扭体反应（腹部收缩成“S”形、身体扭曲、后肢伸展及蠕行等）及扭体次数。【结果】填入表6-1、2。1、汇总全班数据，进行统计学分析（两组间t检验）。2、计算公式：（1）22212121nsnsxxt+-=(用于例数相等)自由度（f）=n1+n2-2（2）()()⎟⎟⎠⎞⎜⎜⎝⎛+×-+-+--=21212221212111211nnnnnsnsxxt（用于例数不等）（3）()%100%×-=对照组扭体次数均值用药组扭体次数均值对照组扭体次数均值镇痛率表6-1度冷丁与罗通定的镇痛作用组别扭体次数生理盐水罗通定度冷丁12345678910表6-2度冷丁、罗通定对小鼠扭体法痛阈的影响（sx±）组别动物数扭体出现时间扭体次数镇痛率（n）（min）（20min内）（%）NS度冷丁罗通定【注意】1、镇痛百分率大于50%时，才能认为有镇痛效力。2、冰醋酸必须临用前配，存放过久作用减弱。【思考题】吗啡类镇痛药与解热镇痛药的作用机理有何不同？实验十六未知药测定【目的】1、掌握未知药的研究方法。2、学习离体肠平滑肌的实验方法。【原理】利用已知的药物，通过实验验证未知药物的作用。【器材】恒温浴槽、张力传感器、手术器材等。【药品】未知药1号、2号、0.002%组胺、0.1%阿托品、0.001%乙酰胆碱、台氏液。【动物】豚鼠、家兔或大鼠、小鼠【方法】1、装好恒温浴槽装置，加台氏液至第一刻度处（40ml），浴槽恒温至38±0.5℃。2、取豚鼠1只，击其头枕部处死，迅速解剖自回肓瓣上5cm处取回肠段，剪去肠系膜并洗净肠内容物，剪成2cm长短，对角穿线置于恒温浴槽内稳定15～30min。3、实验装置的准备(1)打开BL-410智能型生物信号显示与处理系统→输入信号或实验项目→消化实验（D）→消化道平滑肌的生理特性（2）。(2)开始实验（此时启动自动记录）→速度调节为8或16s/dir→记录正常曲线，张力调至0.5～1g。（实验过程不要随意点击记录的红色园点，否则会中断记录）。4、按设计好的给药顺序加药，每种药量为1ml。5、实验结束(1)单击“■”停止试验→输文件名→保存→反演→压缩→图形剪辑。(2)相关内容设置（S）实验标题（H）→实验人员（P）→实验相关数据（R）。(3)打印设置文件→打印预览（V）→4张/组→打印设置（R）→属性（P）→自定义（S）省墨→打印（P）→打印份数（C）。【结果】根据实验结果进行分析，并下结论。【注意】1、平滑肌槽加入35～40ml台氏液，每次换液后容量必须恒定。2、每次换液后需稳定15min。【思考题】利用已知工具药，通过实验观察，判断1、2号药是哪一类药？作用于什么受体？实验六小鼠肠系膜微循环实验【目的】1、学习动物微循环显微观察方法。2、观察药物对小鼠肠系膜微循环障碍的影响。【原理】借助微循环显微观察系统，直接观察微血管特别是毛细血管的数量和形态，血液特别是血细胞在血管内的流动状态，以及毛血管周围状态，了解用药前后肠系膜微循环的变化。【器材】显微镜或显微录像系统、冷光源、小鼠肠系膜观察台、恒温水浴、手术器材、注射器等。【药品】复方扶芳藤合剂（原液）不含糖醇提物、0.004%去甲肾上腺素（NA）、0.4%戊巴比妥钠溶液【动物】小白鼠【方法】1、选取禁食12h以上小鼠10只，体重20～22g，雌雄各半。2、麻醉：0.4%戊巴比妥钠溶液0.2ml/10g体重，ip。3、手术：腹部切开一小口→轻轻拉出一段回肠→平铺于特制的有机玻璃灌流小池上，内盛有37±1℃任台氏液，以保持活体标本的恒温、恒湿、恒pH和一定的离子浓度。4、用显微镜放大100倍，选择肠系膜微血管（选用毛细血管与1mm横线相交点）进行观察。(1)在视野下局部滴注NA0.1ml造成微循环障碍。(2)在视野下局部滴注受试药物0.1ml（对照组给予同体积的NS），观察药后血流速度的变化。血流速度：①线流：血流快，呈光滑的索状，毫无颗粒感。②线粒流：血流快，呈光滑的索状，稍有颗粒感。③粒线流：血较流快，连续成线，有明显颗粒感。④粒流：血较流快，轴流，缘流混杂，如泥沙流。⑤粒缓流：血流呈泥沙状，连续缓慢流动。⑥粒摆流：血流呈泥沙状，前后摆动，仍能流动。⑦停滞：血流停滞不动。【结果】观察微血管开放时间（min）的变化，结果填入表4。本实验对正常动物微循环血液流速无明显影响。表4复方扶芳藤合剂对小鼠肠系膜微血管开放的影响（sx±）组别动物数（n）给药后血管开放时间（min）NS复方扶芳藤合剂【注意】1、温度对肠系膜微循环影响较大，应保持活体肠系膜标本在37±1℃。2、腹部切口以1.5～2cm为宜,切口过大肠管易涌出影响观察,切口过小寻找观察部位不便且影响循环。3、本实验是观察对正常小鼠微循环的影响，可预先复制微循环障碍动物模型，观察活血化瘀方药对微循环障碍的影响。【思考题】1、常见的动物微循环观察部位有哪些？2、活血化瘀方药对微循环的影响有何临床意义？实验三附子对离体蛙心的作用【目的】1、学习斯氏离体蛙心灌注法。2、观察附子对离体蛙心的作用。【原理】青蛙的心脏离体后，把含有任氏液的蛙心套管插入心室，用这种人工灌流的方法保持心脏新陈代谢的顺利进行，以维持蛙心有节律地收缩和舒张。通过生物信号处理系统，记录心脏搏动情况。本实验采用离体蛙心，观察制附子的强心作用。【器材】大剪刀、蛙板、眼科剪、眼科镊、蛙心夹、注射器。【药品】5％附子、任氏液、任钙任氏液。【动物】青蛙【方法】1、离体蛙心准备操作步骤：破坏大脑脊髓，仰位固定于蛙板上，剪开胸廓、心包膜，暴露心脏。结扎右主A，于左主A下穿线备用。于左主A剪一“V”形口，将装有任氏液的蛙心套管插入，并在心脏收缩时通过主Ａ球，转向右后方插入心室，将管内带血的任氏液吸出，洗净余血，结扎稳，轻提心脏，在静脉窦下方结扎其余血管，剪断，离体出心脏。2、实验装置的准备（1）将离体蛙心与传感器连接。（2）打开BL-410智能型生物信号显示与处理系统→输入信号或实验项目→循环实验（C）→蛙心灌流（1）。（4）开始实验（此时启动自动记录）→速度调节为4或8s/dir→记录正常曲线，张力调至0.5～1g。（实验过程不要随意点击记录的红色园点，否则会中断记录）。3、按下列顺序给药：（1）描记正常曲线→附子1～2d观察曲线变化→换液。（2）换低钙液(曲线出现明显改变后)→附子1～2d（逐滴加入）然后继续加附子至出现中毒。4、实验结束单击“■”停止试验→输文件名→保存→反演→压缩→图形剪辑。5、相关内容设置（S）实验标题（H）→实验人员（P）→实验相关数据（R）。6、打印设置文件→打印预览（V）→4张/组→打印设置（R）→属性（P）→自定义（S）省墨→打印（P）→打印份数（C）。【结果】记录附子强心作用的有效量及中毒量【注意】1、蛙心套管一定要插入心室，插管时切忌用力过大，插入过深，避免损伤心肌。2、结扎静脉时，要远离静脉窦。3、套管内的液面要恒定。4、换液时注意勿使空气进入心脏。【思考题】附子对正常和心衰离体蛙心作用如何？实验八钩藤、枳实对猫血压的影响【目的】1、观察钩藤总碱、枳实对猫血压的影响。2、分析它们的作用机制。【原理】利用直