植物病毒病的诊断与鉴定

植物病毒病的诊断与鉴定2010级3班阳植物病毒病的诊断与鉴定植物病毒的形态、结构与组分2植物病毒病的概况1植物病毒的鉴定4植物病毒病的症状特点3植物病毒病的综合防治51.植物病毒病的概况病毒（Virus）是包被在蛋白或脂蛋白保护性衣壳中，只能在适合的寄主细胞内完成自身复制的一个或多个基因组的核酸分子，又称分子寄生物。病毒区别于其他生物的主要特征是：1.病毒是个体微小的分子寄生物，其结构简单；2.专性寄生物，其繁殖需要寄主提供原料和场所。按寄主性的不同，病毒分为寄生植物的植物病毒(PlantVirus)、寄生动物的动物病毒以及寄生细菌的噬菌体等。1.植物病毒病的概述•病毒引起的病害在数量上占植物病害的第二位。由植物病毒引起的植物病害的植物有：禾本科、茄科、豆科、十字花科和葫芦科等。在辽宁省引起毁灭性的植物病毒病有番茄蕨叶病毒病，辣椒花叶病毒病和烟草脉坏死病毒病等。•生产上危害较大的植物病毒病害有：烟草花叶病、黄瓜花叶病、马铃薯病毒病、玉米矮花叶病等。•植物病毒也有可利用的价值，特别在开发基因工程的载体、转基因植物研究等方面，发挥了很大的作用。植物病毒的危害及作用2020/2/1451.植物病毒病的概述植物病毒学研究历史：•1886年梅耶尔(Mayer)证明了烟草花叶病害的摩擦传染性;•1892年伊凡诺夫斯基(Ivanowski)发现了烟草花叶病的病原可以通过细菌过滤器；•1898年伯吉林克(Beijeincku)又发现该病原不是微生物，而是一种传染性活液(contagiumvivumfluidum)，这就是Virus一词的来源；•1935年，美国科学家斯坦利（Stanley）获得了烟草花叶病毒的蛋白结晶,认为病毒是可在活细胞内增殖的蛋白（1946年获NobelPrizeinChemistry)。2020/2/1461.植物病毒病的概述植物病毒学研究历史：•1936年英国科学家鲍登(Bawden)证明提纯的TMV中含有核酸；•l939年Kausch通过电子显微镜观察到植物病毒的形态；•1956年Gierrer证明去掉蛋白质的RNA起重要侵染和繁殖作用；•1971年Diener发现了很小的RNA（250-400bps)称为类病毒（viroid);•1982年发现仅有蛋白质的月元病毒2/14/20202020/2/1471.植物病毒病的概述植物病毒学研究历史：•1981年，A.Lwoff在巴黎举行的第五届病毒学大会上，这一法国病毒研究所所长阿尔．沃夫，认为病毒不是生物，他的观点如下：•生长和分裂独立进化独立的生命体活的•原生生物＋＋＋＋•细胞＋－－＋•线粒体和叶绿体＋－－－•膜＋－－－染色体、质体含核酸－－－－•病毒－－－－•综上所述，认为病毒是有机物，而不是生物。2/14/20202020/2/1481.植物病毒的概述植物病毒的命名•植物病毒的名称目前不采用拉丁文双名法，仍以寄主英文俗名加上症状来命名，如烟草花叶病毒为Tobaccomosaicvirus，缩写为TMV；黄瓜花叶病毒为Cucumbermosaicvirus，缩写为CMV。•属名为专用国际名称，常由典型成员寄主名称(英文或拉丁文)缩写十主要特点描述(英文或拉丁文)缩写十virus拼组而成。如：黄瓜花叶病毒属的学名为Cucu—mo—virus；烟草花叶病毒属为Toba—mo—virus。即植物病毒属的结尾是一virus，科、属名书写时应用斜体，而种和株系的书写不采用斜体。•类病毒(viroid)在命名时遵循相似于病毒的规则，因缩写名易与病毒混淆，新命名规则规定类病毒的缩写为Vd，如马铃薯纺锤块茎类病毒(Potatospindletuberviroid)缩写为PSTVd。2/14/20202020/2/1492.植物病毒的形态、结构与组成2.1植物病毒的形态•观察需要电子显微镜，度量尺度为纳米(nm)。•植物病毒的基本形态为球状、杆状和线条状。•球状病毒的直径大多在20一35nm，少数可以达到70-80nm，球状病毒也称为多面体病毒或二十面体(icosahedralparticle)病毒。•杆状病毒多为20-80nm×100-250nm，两端平齐；少数两端钝圆，线状病毒多为11—13nm×750nm，个别可以达到2000nm以上。•还有少数病毒与以上形态不同，它们有的看上去是两个球状病毒联合在一起，被称为双联病毒(或双生病毒)；有的像弹头，被称为弹状病毒；还有的呈丝线状，柔软不定形。2/14/20202020/2/14102.2植物病毒的结构•中间核酸，外为蛋白质衣壳，由许多蛋白质亚基组成，核酸和蛋白质亚基均呈螺旋状排列。杆状或条状病毒的粒体是空心的。•TMV为棒状，CMV球状的。•球状病毒：20面体，蛋白质亚基为60个或60的倍数，蛋白质亚基在每个面上不呈螺旋状排列，镶嵌在表面，粒体中心也是空的。核酸链排列还不清楚。2/14/20202020/2/14112.3植物病毒的组成•植物病毒主要成分是核酸和蛋白质，核酸在内部，外部由蛋白质包被，称为外壳，有的病毒粒体中还含有少量的糖蛋白或脂类。•构成病毒的成分：核酸5--40%，蛋白质60-95%，还有水分和矿物质等。•类病毒和拟病毒无蛋白衣壳，无专化性血清学反应，真病毒有专化性血清反应。2/14/20202020/2/14122/14/2020植物病毒主要类型1.长而弯曲的线状粒体2.僵直的杆状粒体3.示杆状或线状病毒核酸与蛋白亚基的排列4.杆菌状粒体5.杆菌状粒体横切面6.多角体病毒粒体7.二十面体的核酸与蛋白亚基的排列2020/2/14133.植物病毒病的症状特征一、外部症状(Symptom)：•病毒病害在症状表现上多为系统发病，表现为变色、畸形，少数引起坏死、腐烂，萎蔫极少发生。•变色：花叶(mosaic)，黄化(yellow)。•坏死(negrosis)：也称作枯斑反应，如TMV侵染心叶烟表现为坏死枯斑，马铃薯Ｙ病毒的某些株系侵染烟草可产生脉坏死。•畸形：抑制型：矮化(dwarf)，卷叶(leafroll)，皱叶(rugose)，蕨叶(fernleaf)。刺激型：丛生(rosette)，肿瘤(tumor)。2/14/20202020/2/14142/14/20202020/2/14152/14/2020花叶（变色界限明显）2020/2/14162/14/2020叶片卷曲2020/2/14173.植物病毒病的症状特征二、病组织的内部和细胞的变化：•1.组织变化：•组织坏死：如烟草花叶病毒TMV，它侵染心叶烟引起薄壁组织坏死，有些引起茎部维管束和叶部坏死，烟草花叶病毒侵染大豆引起顶芽和侧枝坏死。一般引起黄化类型的病毒病多是因输导组织、韧皮部坏死引起。•组织增生：病毒侵染后，寄主植物体内代谢失调，产生激素，引起增生。2/14/20202020/2/14182/14/20202020/2/14193.植物病毒病的症状特征2.细胞的变化：花叶和斑驳是由于细胞内叶绿素遭到破坏所致。内含体(inclussion)：某些植物被病毒侵染后，在病组织中产生的一种特殊结构，存在于细胞质或细胞核中，在显微镜下可以观察到。分为不定型内含体Ｘ－体和结晶体。结晶体：有六角型、长条型、正四面体型等，个别的还有皿状，无色透明，主要是由病毒粒体和寄主的蛋白质有规则地排列形成。Ｘ－体：无一定形状，半透明，通常外有一层膜，也是由病毒粒体和寄主物质构成内含体的作用：①植物患病毒病后才有，因此，可作为一种诊断的指标。②但并不是所有的病毒病都有内含体，有些必须发育到一定阶段才形成，同时一种病毒还可有多种形态的内含体，因此，单靠内含体诊断还有一定的局限性。2/14/20202020/2/14202/14/20202020/2/14213.植物病毒病的症状特征三、患病植物的生理变化：表现为：①病毒侵染后呼吸强度先上升，后下降。②碳水化合物含量下降。③淀粉在叶部积累引起黄化。④多酚氧化酶和细胞色素氧化酶的活性增强，使细胞中毒坏死。⑤光合作用下降，破坏了寄主的叶绿素。⑥植物内源激素水平失去平衡，造成畸形。2/14/20202020/2/14223.植物病毒病的症状特征四、症状变化：一种病毒引起的症状可因病毒、寄主和环境三方面的因素而改变。1.病毒本身：①病毒的株系(Strain)：同一种病毒在致病性上也有差异，也称为病毒的生理小种，为了便于与真菌生理小种的区别，称为株系。有强株系(症状表现明显，危害较大)和弱株系(症状不太明显)。如：TMV(弱株系)番茄花叶或斑驳•TMV番茄条斑株系(强株系)坏死，条斑•TMV弱株系侵染烟草引起轻微斑驳，强株系则引起严重花叶。2/14/2020TMV（烟草花叶病毒）2020/2/14233.植物病毒病的症状特征•②交互保护作用(crossprotection)：同一种病毒的弱株系先接种植物后，就可以保护寄主免受病毒强株系的严重伤害，即先侵染的病毒可以保护植物不再受亲缘关系较近的另一种病毒的侵染。•如果两种病毒无亲缘关系则没有这种保护作用。•③拮抗作用和协生作用：•拮抗作用：一种病毒侵染寄主植物后，可抑制另一种病毒再对植物的侵染。如烟草蚀纹病毒可抑制天仙子花叶病毒和马铃薯Ｙ病毒对烟草的侵染。•协生作用：两种病毒侵染一种寄主植物后，可使症状比单独侵染时更为严重，加剧为害。如：番茄花叶病毒轻微斑驳番茄坏死•马铃薯Ｘ病毒轻微斑驳2/14/20202020/2/14243.植物病毒病的症状特征2.寄主因素：①一种病毒在不同寄主上可表现不同症状。•如：TMV普通烟──全株型花叶症状•心叶烟──局部性坏死枯斑②潜伏侵染：一种病毒感染某些植物后，可以侵染但不表现症状的现象。如：小麦黄矮病毒在除小麦之外的禾本科作物上不表现症状。③同一种病毒侵染同种寄主的不同品种上表现不同：•a.抗病品种：产生局部枯斑反应。TMV──心叶烟。•b.高抗或免疫品种品种：病毒侵入后增殖量很少或不能增殖。•c.耐病品种：侵染寄主后可大量繁殖，但表现症状很轻微，这与真菌耐病性不同。2/14/20202020/2/14253.植物病毒病的症状特征3.环境因素：环境因素可抑制或改变症状的表现。（1）温度：〉35℃或〈10℃病害症状轻微，特别是对于花叶病，如油菜花叶病和TMV。•隐症：已经表现病毒病症状的植株，由于环境条件改变，症状消失的现象。这种隐症在条件合适时又可重新表现症状。•隐症：条件不同。潜伏侵染：寄主不同。（2）光照：过强、过弱都会影响症状的表现。多数在光弱时花叶病症状容易表现，接种易成功2/14/20202020/2/1426•植物病毒的分类是将已知病毒按一定标准、相似程度或相关性的顺序排列，拼成一个系统，即分类系统。•植物病毒鉴定的主要目的是确定一种病毒在分类系统中的地位，由于植物病毒个体微小，结构简单，对寄主的依赖性强，鉴定工作难度大，技术性强，对工作条件的要求高。•鉴定植物病毒过去大多采用病毒间生物学特性的差异，如所致症状类型、传播方式、寄主范围等；现在则增加了病毒核酸、蛋白分子生物学、生物化学等方面的方法。•常用的方法有生物学实验、血清学检测和电子显微镜观察等。2/14/20204.植物病毒的鉴定2020/2/1427一、生物学实验•生物学实验的目的是确定病原的侵染性，用实验方法证明病毒与病害的直接相关性。•生物学实验还可以确定病毒的传播方式，明确病毒所致病害的症状类型和寄主范围。在分子生物学技术尚欠发展的过去，只有生物学方法可以区分在遗传信息上一个核苷酸或者蛋白质中一个氨基酸的变异，因此生物学实验是其它实验方法所不可取代的。•生物学实验中应用最多的是鉴别寄主，即用来鉴别病毒或其株系的具有待定反应的植物。•凡是病毒侵染后能产生快而稳定、并具有特征性症状的植物都可作为鉴别寄主。•组合使用的几种或一套鉴别寄主称为鉴别寄主谱。鉴别寄主谱中一般包括可系统侵柒的寄主、局部侵染的寄主和不受侵染的寄主。如若区分经常出现的黄瓜花叶病毒属的三个成员，采用表4—1的鉴别寄主。•。2/14/20202020/2/1428表4-1黄瓜花叶病毒属三种病毒在鉴别寄主植物