蔬菜中多种苯甲酰脲类农药残留的LC-MS-MS检测方法研究

蔬菜中多种苯甲酰脲类农药残留的LC-MS/MS检测方法研究技术报告21苯甲酰脲类农药的结构和性质及国内外限量在我国已商品化生产实际应用的苯甲酰脲类农药主要有：氯吡苯脲、除虫脲、灭幼脲、杀铃脲、氟铃脲、氟丙氧脲、氟苯脲、氟啶蜱脲、氟虫脲、丁醚脲、氟啶脲等，其结构和性质见表1，欧盟、日本、美国、加拿大、中国对各类蔬菜中苯甲酰脲的最大残留限量均大于等于0.01mg/kg〔3〕,本课题研究方法的测定低限为0.01mg/kg，满足国内外残留限量的要求。表111种苯甲酰脲的中英文通用名、分子式、结构式、分子量、CAS号信息〔1，2〕中英文通用名CAS号分子式分子量结构式除虫脲diflubenzuron35367-38-5C14H9ClF2N2O2310.7灭幼脲chlorbenzuron35409-97-3C14H10N2O2Cl2309.1杀铃脲triflumuron64628-44-0C15H10ClF3N2O3358.7氟苯脲Teflubenzuron83121-18-0C14H6Cl2F4N2O2381.13氟虫脲flufenoxuron101463-69-8C21H11ClF6N2O3488.8氟啶脲Chlorfluazuron71422-67-8C20H9Cl3F5N3O3540.7丁醚脲diafenthiuron80060-09-9C23H32N2OS384氟丙氧脲lufenuron103055-07-8C17H8C12F8N2O3511.1氟鈴脲hexaflumuron86479-06-3C16H8Cl2F6N2O3461.1氯吡苯脲forchlorfenuron68157-60-8C12H10ClN3O247.7氟啶蜱脲Fluazuron86811-57-8C20H10Cl2F5N3O3506.242试验部分2.1仪器和设备2.1.1Thermo—FinnigenTSQQuantumUltra液相色谱-串联四极杆质谱仪，配电喷雾电离源(ESI)（美国Thermo公司），Surveyor液相色谱系统（美国Finnigen公司）；2.1.2均质器；2.1.3离心机（SorvallLegendMach1.6/R，ThermoScientific，ThermoLegeivomicro17R）；2.1.4涡旋混匀器（WH-866，太仓市科教器材厂）；2.1.5超纯水发生器（美国Millipore公司）。2.1.6分析天平（感量0.01g，DT300A，江苏常熟长青仪器仪表厂；感量0.1mg，AE260，METTLER）；2.1.7移液器（100、200、1000μL，Gilson）；2.1.850mL聚丙烯具塞塑料离心管、100mL浓缩瓶、1.5mL具塞塑料离心管等器皿、一次性无菌注射器，1.0mL、2.0mL、5.0mL带刻度玻璃移液管等。2.2试剂和材料2.2.1乙腈、甲醇：HPLC级（迪马公司）；2.2.2醋酸铵：HPLC级（美国Tedia）；2.2.3高纯水：桶装娃哈哈纯净水,临用经超纯水发生器净化；2.2.4醋酸铵溶液，0.005mol/L：称取0.19g醋酸铵，用高纯水溶解定容至1000mL，当天配制。2.2.5N-丙基乙二胺（PSA）填料：粒径40µm～100µm；2.2.6十八烷基硅烷(C18)键合相：40µm～100µm；2.2.7石墨化炭黑吸附剂：120µm～400µm；2.2.8微孔过滤膜：0.2µm，双相通用。2.2.9标准品：氯吡苯脲、除虫脲、灭幼脲、杀铃脲、氟铃脲、氟丙氧脲、氟苯脲、氟啶蜱脲、氟虫脲、丁醚脲、氟啶脲等11种苯甲酰脲，纯度大于99.5％（德国Sigma公司）。52.2.10标准储备液，200μg/mL：分别准确称取每种苯甲酰脲标准品0.0100g，用乙腈溶解并定容至50mL。2.2.11中间浓度混合标准储备液，1μg/mL：分别准确移取每种苯甲酰脲标准储备液0.25mL,用乙腈混合定容至50mL。2.2.12标准工作液，5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL分别准确移取上述1μg/mL的标准储备液0.25mL、0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL、10.0mL至50mL容量瓶，用乙腈定容至刻度，混匀，（该溶液可在冰箱中0℃～4℃保存6个月）2.2.13校正工作溶液配制：将标准工作液用按2.3.1处理的空白样品溶液稀释成浓度为0.5、1、2、5、10、20ng/mL。即空白样品溶液0.9mL,分别加0.1mL浓度为10ng/mL、20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的标准工作液（该溶液需临用新配）。2.3实验方法2.3.1提取和净化称取蔬菜样品5g(精确到0.01)，准确加入25mL乙腈，在均质器上以10000r/min均质0.5min，加入5g氯化钠，摇匀，并于3000r/min离心3min。吸取1mL左右上层有机相于1.5mL具塞离心管中，加N-丙基乙二胺（PSA）和C18填料各0.02g，在涡旋混匀器上混匀1min，静至5min，100000r/min离心3min。取上清液过0.2µm滤膜。供液相色谱-串联质谱测定，外标法定量。2.3.2仪器参数与测定条件2.3.2.1液相色谱测定条件a)色谱柱：色谱柱：AgilentXDB-C182.1mm×100mm粒径3.5μm；b)流动相：甲醇(A)一0.005mol／L的醋酸铵溶液(B)，梯度洗脱条件见表2；c)流速：250μL／min；d)进样体积:10μL；e)柱温：室温。6表2梯度洗脱条件时间/min甲醇%0.005mol／L的醋酸铵溶液030701710002010002130702530702.3.2.2质谱条件a)离子源：电喷雾离子源ESI；b)扫描方式：负离子扫描模式；c)检测方式：选择反应检测(SRM)；d)电喷雾电压3500V；e)离子源温度350℃；f)鞘气压力40psi；辅助气压力10psi。g)11种化合物的定性/定量离子对、轰击能量及保留时间见表3。表311种待测物的定性/定量离子对、轰击能量及保留时间化合物定性离子对m/z定量离子对m/z碰撞能量(V)保留时间(min)氯吡苯脲forchlorfenuron245.8/126.9,245.8/91.0245.8/126.914,3011.32除虫脲diflubenzuron308.9/288.9,308.9/93.0308.9/288.911,4914.29灭幼脲chlorbenzuron307.0/126.0,307/154.1307.0/126.024,1114.68杀铃脲triflumuron356.8/175.9,356.8/85.1356.8/175.926,4815.25氟鈴脲hexaflumuron458.9/438.9,458.9/402.9458.9/438.913,1515.88氟丙氧脲lufenuron508.9/489.0,508.9/338.9508.9/489.011,1416.94氟苯脲teflubenzuron378.7/338.8,378.7/359.0378.7/338.814,1017.00氟啶蜱脲fluazuron503.7/304.9,503.7/483.9503.7/304.916,1417.30氟虫脲flufenoxuron487.0/329.0,487.0/411.0487.0/329.022,1717.61丁醚脲diafenthiuron383.2/268.1,383.2/191.1383.2/268.123,3517.78氟啶脲chlorfluazuron539.9/519.9,539.9/356.9539.9/519.916,2018.143．结果和数据3.1.线性范围，最低检测限7将浓度为0.5、1、2、5、10、20ng/mL的标准工作液（由于样品经前处理稀释了5倍。标准溶液的浓度相当样品中残留的苯甲酰脲的质量浓度为2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、25μg/kg、50μg/kg、100μg/kg）在本方法所确定的仪器条件下进样测定，绘制标准曲线，在上述浓度范围内，11种苯甲酰脲的质量浓度与相应的峰面积呈良好的线性关系。以每种苯甲酰脲峰面积的信噪比大于5确定为方法的最低检出限（LOD），信噪比大于10确定为方法的最低定量限（LOQ）,本方法11种苯甲酰脲的最低检出限（LOD）为2.5μg/kg，最低定量限（LOQ）为10μg/kg。具体结果见表4。表411种苯甲酰脲类农药的线性范围、线性方程、相关系数与最低检出限化合物LODμg/kgLOQμg/kg线性范围ng/mL线性方程相关系数r氯吡苯脲forchlorfenuron2.5100.5～20Y=4.97×104X+3.22×1030.9986除虫脲diflubenzuron2.5100.5～20Y=3.05×106X-1.80×1050.9995灭幼脲chlorbenzuron2.5100.5～20Y=1.95×105X-2.65×1030.9984杀铃脲triflumuron2.5100.5～20Y=2.30×105X-1.89×1020.9991氟鈴脲hexaflumuron2.5100.5～20Y=6.15×105X+1.04×1040.9999氟丙氧脲lufenuron2.5100.5～20Y=4.56×105X-3.38×1030.9960氟苯脲Teflubenzuron2.5100.5～20Y=7.94×104X+6.32×1030.9989氟啶蜱脲Fluazuron2.5100.5～20Y=3.80×104X+4.03×1030.9980氟虫脲flufenoxuron2.5100.5～20Y=2.52×104X+2.70×1040.9994丁醚脲diafenthiuron2.5100.5～20Y=3.65×104X-2.96×1030.9969氟啶脲Chlorfluazuron2.5100.5～20Y=3.45×105X-1.88×1030.99993.2方法的精密度和回收率将11种苯甲酰脲的标准工作液添加到空白绿花菜和青刀豆中，按方法操作步骤进行测试，得到的回收率和精密度试验结果见表5。8表5方法回收率和精密度结果（n=6）青刀豆绿花菜化合物添加浓度μg/kg回收率%变异系数s%添加浓度μg/kg回收率%变异系数s%氯吡苯脲forchlorfenuron1082.0～98.312.71076.6～96.814.62083.2～10214.92078.0～97.512.75091.8～98.813.95078.8～10412.1除虫脲diflubenzuron1077.2～10213.91079.6～97.515.32077.0～10414.32081.6～95.414.35078.4～10413.15083.0～10314.6灭幼脲chlorbenzuron1068.8～10614.81081.2～10015.42078.2～11214.42080.8～10215.95077.6～10411.85081.0～10113.2杀铃脲triflumuron1078.0～10615.61084.0～91.412.32077.6～10715.62084.8～10211.65076.4～10311.25082.4～10314.8氟鈴脲hexaflumuron1074.8～10815.11081.4～10415.82073.4～98.213.22083.8～10814.45073.2～10413.05079.6～10514.3氟丙氧脲lufenuron1076.8～11012.31079.2～10416.22075.0～10613.92080.0～10215.25073.6～10615.15080.0～10215.9氟苯脲Teflubenzuron1079.4～10314.61082.0～10513.62077.0～10915