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1.简述现代药物分析教传统药物分析的新特点。传统的药物分析,大多是应用化学方法分析药物分子,控制药品质量。其中容量分析法和重量分析法占有主导和统治地位。从静态发展到动态分析,从体外发展到体内分析,从品质分析发展到生物活性分析,从单一技术发展到联用技术,从小样本分析发展到高通量分析,从人工分析发展到计算机辅助分析。采用的现代仪器分析技术有光谱分析法、色谱分析法、电化学分析法等,使药物分析技术向微量、灵敏、准确、简便、快速、自动化的方向发展。2.现代药物分析的新进展主要有哪些方面。分析领域的发展:药物质量控制、手性药物分析、药物代谢分析、兴奋剂检测等分析技术的发展:分子烙印技术、超临界流体色谱、微乳色谱等。。3.常用的手性固定相有哪些?并简述其各自的原理.手性固定相(chiralstationaryphase,CSP)是通过物理吸附或者化学键合的方法把手性化合物键合到固相载体上,由于样品中的对映体与键合的手性分子形成非对映异构体络合物的结合能力的差异而达到拆分目的。手性固定相可以根据其化学类型分类为:(1)Pirkle型(刷型)CSP:具有确定的化学结构,①被分离溶质与CSP芳环的π-受体和π-授体之间的π-π作用;②CSP上的仲胺、羰基基团与溶质的酸性质子、羟基、氨基之间的氢键作用;③偶极-偶极作用;④大体积非极性基团靠近CSP手性中心而产生的空间立体效应。(2)配体交换型CSP:利用配体交换的分离机制而制成的,一个金属离子可结合一个配体分子和一个对映体溶质分子,形成可逆的非对映体复合物,以达到分离对映体的目的。主要用于拆分氨基酸。(3)蛋白质类CSP:由L-氨基酸组成的高分子聚合物,具有天然的手性选择性质,其具有大量不同的可与样品分子结合的部位,固定相与疏水性溶质之间发生较强的疏水作用。对酸类、胺类药物的拆分较好。(4)冠醚类CSP:冠醚是具有一定大小空腔的大环聚醚化合物,和一定的金属离子形成包容性络合物,手性试剂与其中的金属离子相互作用,从而使对映体得到拆分。溶质分子与手性冠醚环腔形成主客体络合物的稳定常数不同。冠醚的手性“臂障越大,其手性识别能力越高。(5)环糊精类CSP:环糊精的手性识别主要来自环内腔对芳烃或脂肪烃类侧链的包容作用,以及环外壳上的羟基与药物对映体分子发生氢键缔合作用。4.手性高效液相色谱法的分类有哪些?并简述其各自的原理。1)间接法即衍生化试剂法(CDR)采用非手性固定相将光活性试剂SE引入溶质分子内,对映体混合物以手性试剂SA作柱前衍生,形成一非对映异构体对,然后以常规的固定相分离(R)–SA→(R)–SE–(R)–SA(R)–SE+(S)–SA→(R)–SE–(S)–SA2)直接法a.手性固定相法(CSP)利用手性固定相与对映体消旋物相互作用,其中一个与手性固定相生成不稳定的短暂的对映体复合物,使两种异构体在色谱柱上的保留时间不同,从而得到分离。b.手性流动相添加剂法(CMP)将手性试剂添加到流动相中,利用手性试剂与药物消旋物中各对映体结合的稳定常数不同,以及药物与结合物在固定相上分配的差异,实现对映体的分离。5.毛细管电泳的种类有哪些?毛细管电泳分离的驱动力是什么?毛细管电泳比高效液相色谱高效的原因是什么?毛细管电泳CE又称高效毛细管电泳HPCE,是一类以毛细管为分离通道、以高压直流电场为驱动力的新型液相分离技术。分类:毛细管区带电泳CZE:毛细管和电极槽灌有相同的缓冲液胶束电动毛细管色谱MECC:在CZE缓冲液中加入一种或多种胶束毛细管凝胶电泳CGE:管内填充凝胶介质,用CZE缓冲液毛细管等速电泳CITP:使用两种不同的CZE缓冲液毛细管等电聚焦CIEF:管内装pH梯度介质,相当于pH梯度CZE毛细管电动色谱PICEC:在CZE缓冲液中加入可微观分相的高分子离子CE是以高压电场为驱动力细管电泳比高效液相色谱高效的原因:(1)高效CE理论塔板数为几十万,而HPLC一般几千到几万;毛细管电泳中,使用空心毛细管柱,无涡流扩散项,毛细管内壁也不涂渍固定液,消除了组分在固定相与流动相间平衡所需的时间,传质阻抗项趋零,而高效液相色谱中存在两种影响因素,因而CE的柱效高于HPLC。(2)快速CE一般在十几分钟内完成分离;(3)微量CE进样所需的样品体积为nL级,仅为HPLC的几百分之一(4)多模式可根据需要选用不同的分离模式且仅需一台仪器;(5)经济实验消耗不过几毫升缓冲溶液,维持费用很低;(6)自动CE是目前自动化程度较高的分离方法6.HPLC-ESI-MS联用分析条件选择时需考虑的主要因素有哪些?流动相的选择:优先使用低水比例的溶液为流动相,水含量高,降低离子化效果;提高有机相比例可提高离子化效率。一般正离子方式用甲醇,负离子方式用乙腈。不挥发性的盐会在离子源内析出结晶,而表面活性剂会抑制其它化合物电离,与LC/MS不匹配,如磷酸盐、枸橼酸盐、硼酸盐。在LC-MS分析中常用的挥发性酸、碱和盐,如醋酸铵、甲酸铵、甲酸、乙酸、氨水等。为了离子化效果,以上电解质浓度宜小。定性分析时,有时加入NH4+、Li+,帮助判断母离子。但会使图谱复杂。pH的选择:C18柱pH适用范围是2~8。pH值影响离子状态,影响生成气相离子的效率和检测灵敏度。测碱性物质,pH值在(pKa-2),正离子检测。测酸性物质,pH值在(pKa+2),负离子检测。实际工作中,负离子方式检测酸性物质,往往加少量乙酸(<0.05%)可使灵敏度提高。流动相的流速和色谱柱内径的选择:流动相流速受柱子内径和流动相组成影响。对ESI,较小的流速可获得较好离子化效率。尽量选内径小的色谱柱。但是要兼顾分析速度的因素,因此多采用内径2.1mm的色谱柱,0.2~0.4ml/min的流速。只有粗径柱,只能大流量时,可用三通分流以满足MS的流量要求。流动注射(FIA)比柱分离响应强,但混有待测组分外的物质。有些样品很容易吸附在进样阀和管路中,因此实验后要对柱子进行冲洗(纯水—纯甲醇)7.在进行天然药物HPLC-UV分析时,是否可以直接对得到的单一色谱峰进行含量测定?为什么?否。HPLC-UV作定量分析,依据的是峰面积,而峰面积会因多种因素而变化:色谱柱,不流动相,柱温,检测器波长的准确度。天然药物中成分很复杂,所以图中的单一峰有可能包含其他物质,所以可以先做个峰纯度检测,确定是单一成分后用内标法或外标法都可以进行定量。8.简述高速逆流色谱的原理。高速逆流色谱仪(High-speedCountercurrentChromatography,简称HSCCC),于1982年由美国国立卫生院Ito博士研制开发的一种新型的、连续高效的液液分配色谱技术。高速逆流色谱是利用螺旋柱在行星运动时产生的离心力,使互不相溶的两相不断混合,同时保留其中的——相(固定相),利用恒流泵连续输入另一相(流动相),随流动相进入螺旋柱的溶质在两相之间反复分配,按分配系数的次序,被依次洗脱。在流动相中分配比例大的先被洗脱,反之,在固定相中分配比例大的后被洗脱。9.胶束形成的条件和原理以及胶束在分析中的特点。表面活性剂浓度达到临界胶束浓度,缔合形成胶束。表面活性剂溶于水后,首先在溶液表面层聚集形成正吸附,达到饱和后,溶液表面不能再吸附,表面活性剂分子即转入溶液内部。因其分子结构具备两亲性,致使表面活性剂分子亲油基团之间相互吸引,即亲油基团朝内,亲水基团朝外,缔合形成大小不超过胶体粒子范围(1~100nm),且在水中稳定分散的胶束。特点:增敏作用:。胶束可提高荧光和磷光强度。在胶束中粘度很大,减少了分子的自由运动,因而也减少了因碰撞引起的无幅射衰变,增加了量子收率,提高了分析灵敏度。增溶作用:胶束可使原来不溶于水的络合物成为水溶性胶束增溶络合物而溶解,得以水相光度测定,无需溶剂萃取。增稳作用:高配位络合物的生成分子间力加强胶束提供的保护性微环境均使稳定性增强。增加对比度:胶束可以降低某些化合物紫外吸收的检测下限,增加紫外检测的灵敏度。胶束褪色作用:如果溶液中加入过多的表面活性剂溶液中的胶束大大增加则胶束上面的显色剂浓度减小有一些有色配合物被离解即产生了褪色现象在光度分析中可利用表面活性剂褪色功能来提高显色剂反应的选择性。增宽PH值范围:使显色反应的PH值范围增宽,络合物稳定性增强。胶束色谱有利利于梯度洗脱。一般液相色谱在进行梯度洗脱时.由于流动相组成的改变梯度完成之后,柱子需要重新平衡耗时较长。而胶束色谱梯度洗脱之后,柱子不需要重新平衡耗费用低、选择性高胶束用于色谱作为流动相修饰剂,溶质可选择性地分配在胶束集合体匕达到色谱分离洗脱的目的梯度洗脱反相色谱非极性溶液中则形成反相胶束,可用于正时,不需要柱子和流动相之间的再平衡,且不影响电相色谱。胶束色谱的理论是在反相色谱中建立的,如化学检测器的使用改善荧光检测的灵敏度在不特指,胶束色谱一般指反相胶束色谱。表是胶束不分离除去蛋自质的情况下,尿血清直接进样10.ELISA检测试剂盒的技术和应用是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体(聚苯乙烯微量反应板)表面,使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行,用洗涤法将液相中的游离成分洗除。ELISA检测试剂盒广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(HEV)病毒IgM抗体。在动物检疫方面,ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。11.简述药物分析试验方法学验证的内容及其具体含义、表示手法等.目的:证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求。方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。验证内容有:(一)准确度(accuracy)是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度,用百分回收率表示。数据要求:规定的范围内,至少用9次测定结果评价,如制备三个不同浓度样品各测三次。(二)精密度(precision)(重复性、中间精密度和重现性)精密度是指在规定条件下,同一个均匀样品,经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差(d)、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)(变异系数,CV)表示。偏差(d):测量值与平均值之差xxdi标准(偏)差(SD或S)12nxxSi相对标准(偏)差(RSD),也称变异系数(CV)%100xSRSD1.重复性在相同条件下,由同一个分析人员测定所得结果的精密度;在规定的范围内,至少用9次测定结果评价2.中间精密度同一实验室,不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备3.重现性不同实验室,不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时,应进行重现性试验。(三)专属性(specificity)指有其他成分(杂质、降解物、辅料等)可能存在情况下,采用的方法能准确测定出被测物的特性,能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。(四)检测限(limitofdetection,LOD)检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数,无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。常用的方法:1.非仪器分析目视法用已知浓度的被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。2.信噪比法用于能显示基线噪音的分析方法(仪器分析方法),是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较,算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比(S/N)3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。数据要求:应附测试图谱,说明测试过程和检测限结果。(五)定量限(1imitofquantitation,LOQ)指样品中被测物能被定量测定的最低量,结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。常用信噪比法确定定量限,一般以信噪比(S/N)为10(六)线性在设计的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。数据要求:应列出回归方程、相关系数和线性图。(七)范围指达到一定
本文标题:高等药分试题及答案
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