国家自然科学基金技术路线图大全,共95份

多变量药物技术路线生物学特性检测形态学观察、倍增时间、细胞活率检测免疫组化、FACS特异标志物、RT-PCR检测染色体核型分析、AP检测mES标准体系培养mES非分化增殖mESniche模拟培养mES分化为EBs流式细胞术、RT-PCR检测EBs形态学观察LN,FN,E-cadherin表达差异检测RT-PCR检测免疫组化检测FACS检测甲基化修饰检测MSP检测Nanog等CpG岛甲基化状态免疫组化检测H3R2等的表达ChIP检测H3修饰的位置甲基化抑制/启动剂作用EBs后的基因表达分析技术路线：临床资料淋巴瘤患者病理活检常规病理组织学诊断与分型制成单个核RT-PCR诊断：t（14；18）,细胞悬液t（11；18）,t（11；14）,t（8；14）,t（9；14）,t（2；5）等染色体易位后形成的融合基因相关探针直接间期FISH：CCND1，BCL2，BCL6，PAX5，ALK，NPM，MYC，IgH分析中药以PGC-1α依赖的途径为核心的相关基因表达的影分析中药对以上途径相关蛋白表达的影响揭示中药影响ROS和葡萄糖/能量代谢调节平衡的作用物质、靶点和调控网络microarray二维电泳-质谱正常脑神经细胞过氧化氢造成葡萄糖消耗降低，能量生成减少对象药物比较药物对ROS、抗氧化酶活力的影质谱检测流式细胞检测仪有效中药的化学成分分析分离有效组分/成分的制备HPLC-MS半制备液相色谱比较药物对葡萄糖消耗的影响代表性药物文献研究样品采集、提取物制备毒性及其致毒机制（肝微粒体、线粒体功能）效应物质基础（色谱、质谱、核磁、联用技术…)生理/病理状态下机体对毒性物质的应答差异表达（系统生物学）有毒中药的安全使用窗口（毒性与药效的相关分析）代表性药物文献研究样品采集、提取物制备毒性及其致毒机制（肝微粒体、线粒体功能）效应物质基础（色谱、质谱、核磁、联用技术…)生理/病理状态下机体对毒性物质的应答差异表达（系统生物学）有毒中药的安全使用窗口（毒性与药效的相关分析）培养基改良肉膏培养基生活废水培养基绿豆水培养基培养条件优化工艺流程优化纯度检测、药效检测a-溶血链球菌33#菌株绿豆水培养基葡萄糖及12种氨基酸标准品快速HPLC方法确定最优MS条件确定样品前处理方法葡萄糖氨基酸消耗量高精密度检测方法MCF7、K562细胞模型加入多品种、多剂量已知细胞凋亡诱导药品显微形态及凝胶电泳鉴别细胞状态不同细胞凋亡状态标准训练集人工制造多种不同细胞凋亡状态的细胞抗癌细胞药理评价新方法中药组分传统方法评价结果新方法评价结果对新方法的总结评价新方法的推广应用化学计量学数据处理相互比对相互补充技术路线铝染毒大鼠神经细胞Caspase-3,LC3-II基因/蛋白表达神经行为改变APP、Tau蛋白水平Nec-1阻断神经细胞坏死性凋亡通路与铝致痴呆的关系铝致神经细胞死亡的方式检测铝染毒SD大鼠氧化应激水平Nec-1和/或不同死亡通路阻断剂处理60岁以上铝接触人群及对照遗传基因多态性检测铝接触剂量/尿铝含量调查外周血淋巴细胞M受体表达尿铝含量与Caspase-3,LC3-II蛋白表达的关系认知功能检查，MCI诊断，AD诊断，脑部核磁及磁共振波谱分析铝致神经细胞丢失和/或遗传因素与MCI、AD的关系尿铝含量与年龄和细胞丢失的关系神经细胞凋亡/坏死/坏死性凋亡/自吞噬生理负荷超负荷基因芯片基因芯片基因芯片基因芯片激光捕获激光捕获生理负荷超负荷体外培养的成骨细胞(OB)和破骨细胞(OC)体外培养的成骨(OB)细胞和破骨细胞(OC)体内种植体—骨界面区域的骨组织提取骨界面取材的OB和OC体外OB、OC基因表达谱的时序变化体外OB、OC基因表达谱的时序变化1、RT-PCR法检测OB、OC表达差异最大的几个基因；2、结合基因数据库，明确“标记”基因及功能。骨界面OB、OC基因表达谱的时序变化体内种植体—骨界面区域的骨组织提取骨界面取材的OB和OC骨界面OB、OC基因表达谱的时序变化研究骨形成到骨吸收质的变化过程中，OB、OC基因调控机理。打靶载体注射入胚泡中植入子宫通过鉴定，获得嵌合体小鼠繁殖，获基因敲除纯合体小鼠SD大鼠分组正常组、模型1组和模型2组各10条件应激制备内脏高敏感大鼠模型正常组腹腔注射白蛋白制备内脏高敏感大鼠模型正常组和模型1、2组样品的制备DIGE试剂(Cy2、Cy3、Cy5)标记蛋白样品的IEF和PAGE电泳分离荧光扫描、分析差异蛋白质胰酶对脱色后蛋白质的消化质谱的多肽指纹图、微测序分析健康人和IBS患者各6例结肠黏膜WesternBlot验证初步筛选出IBS差异蛋白质和分子标记物差异蛋白质点的切取生物信息学分析，获得差异蛋白质DNA序列大鼠结肠黏膜WesternBlot验证筛选某个差异蛋白质进行功能研究根据其DNA序列，按照同源重组原理，建立打靶载体导入胚胎干细胞（ES）ES细胞培养,以筛选发生定点重组的ES细胞1.观察和检测其基因敲除小鼠生物学特征的改变，以明确此基因功能2.用AWR评分评估此基因敲除小鼠的内脏敏感性，以明确此基因是否为IBS的致病原因粘膜免疫细胞免疫体液免疫重组乳酸杆菌测定肠道菌群测定免疫指标微生态指标仔猪Lactobacillus口服免疫pMJ69-LTB-ST1转化pMJ69LTB-ST1融合LTB基因ST1基因连接PCRSP基因pMJ68连接PCREry敲除EGFP基因pMJ67构建携带DcR3基因的腺相关病毒载体体外表达鉴定、收集AAV病毒颗粒转染从雄性近交系Wistar大鼠股骨、胫骨抽取骨髓，分离、纯化HSC体外试验：表达DcR3基因的肝干细胞抑制FasL诱导淋巴细胞凋亡试验、抑制FasL诱导的淋巴细胞趋化试验植入雌性近交系Lewis大鼠动物实验：分别于术后3天、7天、14天、21天、28天取血液及肝脏标本，采用常规生化法检测肝功能，Northernblot、Westernblot检测DcR3基因在肝脏中的表达情况，免疫组化法检测受体CD4+、CD8+淋巴细胞在供肝中的浸润情况，TUNEL法检测供肝中细胞凋亡情况，常规石蜡切片HE染色观察移植排斥反应的发生情况切取雌性近交系Wistar大鼠肝脏经门静脉注入供