微生物、细菌分类鉴定方案

细菌分类签定方案在这次我们对几个酒厂的采样分离中，得到上百株的细菌，由于菌株数量庞大限制了我们对每株菌作详细系统的分类签定实验，所以我们将根据伯杰氏手册有选择性有针对性的做签定实验，以达到分类签定的目的。首先根据取样来来源可初步断定这批菌为好氧或廉性厌氧的化能异氧菌。据此，我们分为两个部分进行签定，将首先对各菌作菌落形态¸菌落颜色¸是否产色素等宏观特征作初步签定，然后将对各菌种作以下更详细具体的生理生化实验的签定：第一部分1革兰氏染色利用光学显微镜和革兰氏染色技术，对菌体进行细胞染色，然后观察并确定细菌的形态（杆状或球状）和分别所属革兰阴性还是阳性类别。同时可以利用测微尺测定细菌菌体的大小。方法制做装片，菌体固定。草酸铵结晶紫染1分钟。自来水冲洗。加碘液覆盖涂面染3分钟。水洗，用吸水纸吸去水分。加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，20秒后水洗，吸去水分。蕃红梁色液染10秒钟后，自来水冲洗。干燥。镜检。革兰氏阳性菌体都呈紫色，阴生菌体都呈红色。2芽孢染色利用光学显微镜和芽孢染色技术，确定细菌芽孢的类属。方法将培养24小时左右菌，作涂片、干燥、固定。滴加3—5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。玻片在火焰上加热，使染液冒蒸汽但勿沸腾，切忌使染液蒸干，必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4—5分钟。倾去染液，待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。用番红水溶液复染1分钟，水洗。待干燥后，置油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。3葡萄糖氧化发酵通过本实验确定该细菌是发酵型还是氧化型，同时还可利用软硬合适的琼脂同时观察细菌的运动性（琼脂的浓度以倒放试管不流动，轻轻敲打则琼脂柱破碎为宜，一般为0.5%～0.6%的琼脂）。方法以18～24小时的幼龄菌作种子，穿刺接种，每株四支。其中2支用灭菌的凡士林石蜡油封盖，约0.5～1cm厚，以隔绝空气。另两支不封油为开管，同时还要有不接种的闭管和开管作对照。37。C培养，观察结果只有开管产酸变黄为氧化型，开管和闭管均产酸变黄为发酵型。通过以上实验基本可以把菌株归于那一类群，这样就可以将上百株菌株合理大致的分为几个大的类别，然后再对没一个类别作签定工作，减小工作量，避免上百株菌同时作签定的工作。为了更为精确的确定每株细菌的种类，继续对每一个大的类别作进一步签定第二部分4明胶液化方法取18～24小时培养菌作菌种穿刺接种于明胶培养基，并作两支未接种的空白对照于20℃培养7天，观察明胶液化现象。如室温高，培养基自行溶化时，可与冰箱内放置30分钟，然后取出观察结果，不再凝固时为阳性，凝固则为阴性。5过氧化氢酶方法将24小时培养的菌种，以接种环取一小环涂抹于已滴有3%的过氧化氢的玻片上如有气泡产生则为阳性，无气泡则为阴性6硫化氢方法将肉汤琼脂和10%的硫代硫酸钠溶液及10%的醋酸铅溶液分别灭菌，冷却至60。C，三者混合均匀，无菌分装试管达5～6cm高，放入冷水中使冷凝成琼脂高层。用接种针取菌种作穿刺培养，于37℃1～2天后观察，必要时可延长5～7天。培养基变黑色者为阳性。反之则为阴性。7淀粉水解方法有肉汁胨中加入0.2%可溶性淀粉制备培养基倒平板。取幼龄菌种点种于平板上，适温培养。待形成明显菌落后，在平板上滴加碘液，平板呈蓝黑色，菌落周围如有不变色透明圈，表示淀粉水解阳性，仍是蓝黑色则为阴性。