细胞培养的设施与基本条件

第一章细胞培养的设施与基本条件1.细胞工程实验室的设置2.常用的仪器与设备3.实验室的生物安全⑴动物细胞工程实验室的设置⑵植物细胞工程实验室的设置①无菌操作室：更衣间、缓冲间、操作间②培养与观察室：培养箱、显微镜③制备室：天平、PH计、磁力搅拌器④储藏室：冰箱、液氮罐、储物柜⑤清洗和灭菌室：消毒柜、干燥箱、纯水设备①无菌室操作室：超净工作台或接种箱②培养室：培养架、摇床③鉴定室：各种显微镜④清洗室：干燥箱、清洗器械⑤灭菌室：灭菌装置、过滤器⑥制备室：冰箱、药品柜、器械柜⑦驯化移植室：温室、弥雾装置、荫棚、移植床、塑料布、粗沙等温度：25±2℃光照：散射光湿度：＞50%⑴动物与植物细胞工程实验室通用的仪器设备⑵动物细胞工程实验室的常用仪器设备⑶植物细胞工程实验室的常用仪器设备①超净工作台②倒置显微镜③电热干燥箱④水纯化装置⑤冰箱⑥压力蒸汽消毒器⑦细胞记数板和电子细胞记数仪⑧过滤除菌装置⑨离心机（离心管）⑩移液管和吸管移液器天平超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。■烘干和干热灭菌玻璃器皿■100度以下时再打开箱门■金属器械、塑料制品、橡胶等不能在干燥箱内消毒电热鼓风干燥箱：温度均匀、效果较好。蒸馏式：三重纯水蒸馏器过滤式：超纯水装置系统普通冰箱：储存各种溶液及短期保存组织标本-200C冰箱：储存需要冷冻保持生物活性（酶、血清）及长期存放的制剂电子细胞计数仪细胞记数板高速冷冻离心机培养箱显微操作仪细胞融合仪细胞冷冻储存器培养用器皿手术器械CO2培养箱设定的条件为37℃，5％CO2。使用CO2培养箱培养细胞时应注意的问题：①用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。②保持培养箱内空气干净。定期消毒（90℃，14h)。③箱内灭菌蒸馏水3000毫升蒸馏水槽中以保持箱内湿度，避免培养液蒸发。显微操作/注射仪：细胞核移植、染色体操作、显微注射、胚胎切割等细胞电融合仪程序化冷冻仪液氮罐旋转培养器多孔培养板4、6、24、96孔培养皿30、60、100毫米培养瓶500毫升、250毫升、100毫升器械解剖刀解剖剪虹膜剪镊子注意保护刀锋，钝刀对组织有伤害，不利细胞生长光照培养箱人工气候室摇床培养瓶人工气候室根据密封程度分：P1、P2、P3、P4四个等级（P为protect的缩写）三不：培养物不被污染实验人员不被污染环境不被污染SARS实验室生物安全防护水平（BSL）由一级防护屏障（安全设备）和二级防护屏障（实验室设施）组合构成四级生物安全水平。一级生物安全防护水平（BSL－1）二级生物安全防护水平（BSL－2）三级生物安全防护水平（BSL－3）四级生物安全防护水平（BSL－4）生物安全一级(BSL-1)：适合于非常熟悉的病源，不会经常引发健康成人疾病，对实验人员和环境潜在危险小。一般也不使用特殊的遏制设备和设施。生物安全二级(BSL—2)：适合于对人和环境有中度潜在危险的病源，应在生物安全柜中或其它物理遏制设备中进行。生物安全三级(BSL—3)：该会引发严重的、可能致死的疾病的病源。在生物安全柜或其他物理遏制装置中进行，或由穿戴合适防护服及设施的实验人员进行。实验室经过特殊设计和施工。生物安全四级(BSL—4)：处理特别危险的传染源Pneumococcus:肺炎球菌Salmonella：沙门氏菌Hepatitis:肝炎LymeDisease：莱姆病Influenza:流感Ebola:埃博拉Lassa：拉沙热Hantavirus:汉坦病毒无菌条件：净化工作室，高效过滤器，生物安全柜，超净工作台，紫外灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶，CO2培养箱，培养基，血清细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪，微孔板震荡器，高速离心机，移液器细胞保存条件：液氮罐实验室安全：生物实验室安全，P1,P2,P3实验室安全Summary：细胞培养的基本条件Anthrax:炭疽Typhus：斑疹伤寒HIV:培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角培养室一角倒置显微镜超低温冰箱无菌培养室光照培养室菌种培养室细胞培养室四川省种子管理站建人工气候室对农作物种子进行发芽试验和幼苗鉴定，通过技术手段检测监督种子质量北京大学人类疾病基因研究中心成立。该中心首批将启动32项研究课题，在人类疾病基因组学、人类功能基因组学方面开展研究与开发工作。苍蝇，人类的新资源