实验49 维生素C含量测定方法综述

维生素C含量测定方法综述实验49概述维生素C是可溶于水的无色结晶，是一种分子结构最简单的维生素。维生素C有防治坏血病的功能，所以在医药上常把它叫做抗坏血酸。维生素C能保持巯基酶的活性和谷胱甘肽的还原状态，起解毒作用等。其广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑橘等食品中含量尤为丰富。准确测定维生素C的含量，对饮食健康、医疗保健都具有十分重要的意义。近年来报道的测定方法主要有滴定法、光度法、高效液相色谱法等。维生素C的结构式维生素C：六碳的多羟基内酯CCCHOHOCHOOCHHOCH2OH测定方法滴定法测定维生素C分光光度测定维生素C高效液相色谱法测定维生素C1滴定法测定维生素C1.12，6一二氯靛酚法1.2微量滴定法2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素CCCOHOHCCCHOHOCHOOCHHOCH2OHOClClNOHOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO维生素C2,6-二氯酚靛酚维生素C2,6-二氯酚靛酚（还原型）（氧化型，粉红色）（氧化型）（还原型）++====2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。碘量法原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VCEC6H6O6/C6H8O6=0.18,EI2/I-=0.535终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点反应式：碘量法碘的浓度由已知浓度的Na2S2O3标准溶液标定反应式：计算式：Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%222234622ISOISO碘量法•注意！测定时：加HAC使溶液呈弱酸性•原因:•(1)Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚•(2)I2在碱性介质中会发生歧化反应•加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差电位滴定法原理：根据滴定过程中电池电动势的变化来确定反应终点.Pt为指示电极，甘汞作参比电极E池＝E+-E-+E液接电位＝EI2/I-+k(常数)电位滴定法原理(具体来说:)随着滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；从而指示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。电位滴定法右图：电位滴定法基本仪器装置计算式：(与碘量法相同)Wvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%优点：解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题2分光光度测定维生素C2.12，4一二硝基苯肼分光光度法2.2钼蓝比色法2.3其他方法2，4一二硝基苯肼分光光度法原理：维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸反应式：2，4一二硝基苯肼分光光度法pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸二酮古洛糖酸OHCCCCCOOHOOOHHOHHOHCH2,4一二硝基苯肼分光光度法•脱氢抗坏血酸，二酮古洛糖酸均能和2，4－二硝基苯肼生成可溶于硫酸的脎•脎在500nm波长有最大吸收•脎的结构：RCCNNRNNHH分光光度法样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理500nm处测吸光度下图：721型分光光度计钼蓝比色法马占玲等用钼蓝比色法测定青椒中还原型维生素C含量的基本原理和方法。测定波长839nm，维生素C含量在0．004～0．024mg／mL范围内呈线性关系，回收率为97．2％。该方法简单、快速、准确。钼蓝比色法逯家辉等提出了一种测定维生素C的新方法，它是基于FolinB试剂与抗坏血酸在pH=3的三氯乙酸酸性介质中反应生成脱氢抗坏血酸，反应产物在910nm波长处有最大吸光度进行定量分析。该方法的线性范围为0～50．0μg／mL，相关系数r=0．99986，回收率为98．12％～102．15％。——差示旋光法选定pH为2.2和6.23高效液相色谱法测定维生素C3.1HYPERSIL—C8色谱柱法3.2VenusilXBP—C18柱法3.3其他方法HYPERSIL—C8色谱柱法采用HYPERSIL—C8色谱柱，用0．1％低浓度的草酸作流动相，陈昌云等采用0．05mol／L磷酸二氢钾缓冲液：甲醇=80：20(v／v)作流动相。流速为1．0mL／min，二极管阵列检测器，检测波长为254nm。3.2VenusilXBP—C18柱法系统采用VenusilXBP—C18柱(4．6x250mm，5μg)，用0．2％的偏磷酸的水溶液作为流动相，流速1ml／min，检测波长240nm；维生素C浓度在0．1-1．0mg／mL范围内有良好的线性关系。该方法回收率99．89％，标准偏差0．91，操作简便、灵敏、可靠薄层扫描法原理维生素C具有较强还原性，可使蓝色染料2，6-二氯靛酚钠定量地还原成无色的酚亚胺，而本身被氧化成去氢抗坏血酸，利用此特征进行薄层扫描法测定含量。结束语总之，维生素C的测定方法很多，各种方法各有特点，常用的滴定法方法简单，但在滴定有色物质终点不易判断，分光光度法操作费时，高效液相色谱法是目前发展较快的一种方法，方法灵敏，选择性好，有较好的发展前景。毛细管电泳n51是近几年新兴的分析方法，具有效率高、分析时间短、样品处理简单等特点，但有待于进一步完善。