动物细胞工程ppt

专题2.2动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体制备细胞核移植动物细胞工程技术动物细胞工程的基础2.2.1动物细胞培养和核移植技术（一）、概念是指从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。（二）、原理细胞分裂增殖（三）、过程幼龄动物剪碎组织原代细胞培养取动物器官和组织细胞悬浮液传代细胞培养胰蛋白酶处理单个细胞胰蛋白酶处理单个细胞细胞贴壁:培养贴附性细胞时,细胞要能贴附于底物上才能生长繁殖.细胞接触抑制细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。有关概念原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。归纳过程取的组织、器官细胞悬浮液酶贴满瓶壁的细胞单个细胞加入液动物胚胎或幼龄动物胰蛋白培养接触抑制原代培养(分装前)1-10代细胞遗传物质改变原代细胞培养加液40—50代细胞(细胞株)未遗传物质改变无限传代（细胞系）已传代培养胰蛋白酶有关概念细胞株：原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。细胞系：细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以无限制传代，这种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别：细胞系的遗传物质改变，具有癌细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。思考题：1、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？因为这些组织或器官，分裂能力旺盛，易于培养。成块组织使细胞靠在一起限制了细胞的生长和增殖，且细胞不能与培养液充分接触，不利于培养。3、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？催化蛋白质水解。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原蛋白等)。4、细胞膜的主要成份是什么？蛋白质和磷脂5、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？能6、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？7、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？注意时间的控制不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生存环境与胰蛋白酶的最适PH较接近1、无菌、无毒的环境保证细胞顺利的生长增殖添加一定量的抗生素，定期更换培养液添加：糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、动物血清等。（四）、动物细胞培养的条件2、营养3、温度和PH培养室中控制,使之达到36.5±0.5℃,7.2~7.4培养箱中提供O2和CO2（95%空气和5%CO2）4、气体环境：（五）、动物细胞培养技术的应用（3）细胞的生理、药理、病理研究（1）培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植（2）基因工程的受体细胞植物组织培养和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养原理细胞的细胞培养基特有成分、植物激素葡萄糖、培养结果植物体培养目的快速繁殖、培育无病毒植株获得全能性增殖蔗糖动物血清细胞株、细胞系细胞,某些蛋白质资料一：培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。资料二：人工关节——软骨再生1.第一次手术:从病人关节软骨中未受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。2.分离软骨细胞并经三星期的体外培养，使细胞数增加约10～20倍。3.第二次手术:清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。资料三：结果:经过复健一年后即可恢复正常的生活。（一）、动物细胞核移植的概念：动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体.克隆动物：用核移植的方法得到的动物。动物核移植是将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中.使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体（二）、分类：胚胎细胞核移植：体细胞核移植：细胞分化程度低，恢复全能性容易细胞分化程度高，恢复全能性困难克隆动物:用核移植方法得到的动物.克隆（clone）是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群，即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体。克隆在希腊语中是“小树枝叶”的意思，用以指无性增殖物。去核卵细胞供体细胞电刺激使两细胞融合重组细胞重组胚胎新个体代孕母牛C胚胎移植卵细胞培养无性生殖（三）、体细胞的核移植过程高产奶牛A供体细胞培养供卵奶牛B（四）、体细胞核移植技术的应用前景1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程2、保护濒危物种3、生产医用蛋白质及组织器官的移植的供体（五）、体细胞核移植技术存在的问题1、克隆动物基因组重新编程的机制尚不清楚。2、克隆技术效率低，畸形率高、死亡率高、易出现早衰等问题。3、生产克隆动物费用昂贵。4、一般说来，动物细胞体外培养需要满足以下条件（）①无毒的环境②无菌的环境③培养基需要加入血清④温度与动物体温相似⑤需要O2，不需要CO2⑥CO2能调节培养液PHA、①②③④⑤⑥B、①②③④C、①③④⑤⑥D、①②③④⑥D5、动物细胞培养的特点（）①细胞贴壁②有丝分裂③细胞分化④接触抑制⑤减数分裂⑥原代培养一般传1－10代A、①②④⑥B、②③④⑤C、①③④⑥D、③④⑤⑥A6、下图是动物细胞培养的基本过程示意图。请据此回答：（1）容器A中放置的是动物器官或组织。它一般取自______________________。（2）容器A中的动物器官或组织首先要进行的处理是，然后用酶处理，这是为了使细胞分散开来，这样做的目的是。动物胚胎或幼龄动物剪碎胰蛋白使细胞与培养液充分接触，便于培养（3）培养首先在B瓶中进行，瓶中的培养基成分有________________等。在此瓶中培养一段时间后，有许多细胞衰老死亡，这是培养到第代，到这时的培养称为__。（4）为了把B瓶中的细胞分装到C瓶中，用处理，然后配置成，再分装。`动物血清10原代培养胰蛋白酶细胞悬浮液一、动物细胞融合受精作用动物细胞融合细胞A细胞B杂种细胞灭活的病毒物理法化学法用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程细胞核病毒颗粒细胞核细胞融合与融合诱导细胞融合物质诱导剂：病毒、聚乙二醇诱导细胞融合的病毒必须灭活。思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？二、单克隆抗体什么是抗体？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞产生抗体。单克隆抗体由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。特点：特异性强、灵敏度高单克隆抗体制备过程注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体如何大量生产单克隆抗体？利用淋巴细胞产生抗体的功能利用肿瘤细胞无限增殖的特性利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞思考：1、本过程利用了哪些原理？免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体单克隆抗体的应用与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高。应用主要有：1、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤资料：目前世界各国已经研制出数以百计的单克隆抗体。许多缺乏良好诊断手段的传染病、免疫性疾病、血液病、内分泌疾病和遗传病，用单克隆抗体作为诊断手段，是一个必然趋势。另外，用单克隆抗体做体内诊断，借以鉴别和定位体内“病灶”也引起人们的注意，目前，主要用于肿瘤追踪及心肌梗塞的诊断。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞融合的方法去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合诱导方法物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒用途获得杂种植株制备单克隆抗体下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC1.动物细胞工程技术的基础是：（）A．动物细胞融合B．胚胎移植C．动物细胞培养D．核移植Ｃ２．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同Ｂ３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．②④B．①③⑤C．①②③④D．②③C(2006年北京卷1题）以下不能说明细胞全能性的实验是A.胡萝卜韧皮部细胞培育出植株B.紫色糯性王米种子培育出植株C.转入抗虫基因的棉花细胞培育出植株D.番茄与马铃薯体细胞杂交后培育出植株(2006年全国卷Ⅰ3题）下列关于动物细胞培养的叙述，正确的是A．培养中的人效应T细胞能产生单克隆抗体B．培养中的人B细胞能够无限地增殖C．人的成熟红细胞经过培养能形成细胞株D．用胰蛋白酶处理肝组织可获得单个肝细胞动物细胞工程技术的基础是（）A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养右图是某种淋巴细胞，膜外颗粒状物质为抗体。据图回答：（1）这是细胞，它是由分化而来。（2）抗体从开始合成到分泌出细胞，经过的细胞结构顺序是（填标号）。抗体的分泌说明细胞的各种生物膜在结构上具有。并以［］的形式转变。（4）抗体的化学本质是，它能与发生特异性结合，发挥免疫效应。该过程属于免疫的阶段。（5）若该抗体是单克隆抗体，则该细胞名称为。在制备单克隆抗体的过程中，应用的动物细胞工程的技术手段是。（3）在分泌抗体时要消耗由［］提供的能量。（1）效应B；B细胞或记忆性B细胞（2）④→⑤→③→①；一定的连续性；②具膜小泡（3）⑥线粒体（4）球蛋白；相应的抗原；体液；效应（5）杂交瘤细胞；动物细胞融合、动物细胞培养