中药制剂的鉴别

第二章中药制剂的鉴别第一节定性鉴别定性鉴别：利用各单味药材的形态、组织学特征及其所含化学成分的结构特性、化学反应、光谱特性、色谱特性及某些物理化学常数来鉴别中药制剂中各单味药材的真伪及存在与否的分析方法。方法：•1.性状鉴别•2.显微鉴别法•3.理化鉴别法1）一般化学反应法2）升华法3）荧光法4）光谱法5）色谱法性状鉴别一、基本内容二、主要中药剂型形状要求形状、大小、颜色、表面特征、气、味、其他丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、锭剂、煎膏剂、糖浆剂、合剂、滴丸剂、胶囊剂、酒剂、酊剂、膏剂、贴膏剂、胶剂•中药制剂的显微鉴别利用显微镜来观察中药制剂中原药材的组织碎片、细胞或内含物等特征，从而鉴别制剂的处方组成。•凡以药材粉碎成细粉后直接制成制剂或添加有部分药材粉末的制剂，由于其在制作过程中原药材的显微特征仍保留到制剂中去，因此均可用显微定性鉴别法进行鉴别。显微鉴别制片方法：散剂、胶囊剂：取粉末少量，选用适当的试液处理后直接进行显微观察。片剂：切开，刮取少量样品，观察；粉末及粗则先研细；糖衣片除去糖衣再研细。水丸、颗粒剂：于乳钵内研成粉末后观察。蜜丸：可取1丸从正中切开后，刮取少量样品进行观察注意：•在本法鉴别中，只有药材原有组织结构特征能保留到制剂中，才有意义。全部由溶剂提取的制剂，不用此法进行鉴别。•不同剂型其制片方法不同。•应选择在该制剂中没有干扰又能表明该味药存在的显微特征作为鉴别依据。应用实例----六味地黄丸的显微定性鉴别[显微鉴别]：取本品置显微镜下观察，(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物。(熟地黄)(2)果皮表皮细胞橙黄色，表面观类多角形，垂周壁略连珠状增厚。(山茱萸）(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直径24—40um，脐点短缝状或人字状。(山药)3a草酸钙针晶束3b淀粉粒(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中(5)不规则分枝状团块无色，遇水合氯醛溶化；菌丝无色，直径4-6um。(茯苓)(6)薄壁细胞类圆形，有椭圆形纹孔。显微特征Microscopicalcharacters生物显微镜-数码成像系统F.unibracteataF.cirrhosaF.przewalskiiF.thunbergii浙贝母川贝母及其伪品浙贝母幼小鳞茎的性状和显微特征两者性状和显微特征难以区别人参（主根）横切面TransversesectionofginsengMainrootCork木栓层草酸钙簇晶Clustersofcalciumoxalate树脂道ResincanalsCortex皮层Phloem韧皮部Cambium形成层Xylem木质部1、水牛角浓缩粉2、麝香3、珍珠4、朱砂5、雄黄6、黄连7、栀子8、郁金9、黄芩安宫牛黄丸郁金—糊化淀粉团块栀子—种皮石细胞黄芩—纤维黄连—纤维朱砂—不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色理化鉴别显色、↓、↑、荧光例二妙丸中苍术的鉴别褪色醚层样品乙醚4KMnO苍术酮苍术炔试剂组分一般化学反应法（GeneralChemicalReaction）利用检测试剂与制剂中的指标性成分发生化学反应，根据所产生的颜色、沉淀或气体等现象，来判断某些成分或某些药味的有无。中药制剂一般选择有效成分、特征成分作为鉴别的对象。一般化学反应鉴别法多在试管中用湿法反应进行，制剂样品要先制成适宜的供试液。一般情形下用50％-70％乙醇回流提取制备供试液。二．特点1.一般化学反应法具有操作简便，适用性较强等特点。2.其否定功能往往强于肯定功能,专属性较差。3.易发生假阳性或假阴性反应一般化学反应法应该注意以下几点：(1)慎重使用专属性不好的分析反应，如泡沫生成反应、三氯化铁显色反应等。(2)在分析前对样品进行分离、精制，除去干扰分析反应的物质，借此改善鉴别方法的专属性。(3)采用阴性对照和阳性对照的方式，对拟定的鉴别方法进行反复验证，防止出现假阳性。三、常用的一般化学反应主要用于制剂中生物碱、黄酮类、蒽醌类、皂苷、香豆素、萜类以及各种矿物类成分的鉴别（一）生物碱1.碘化铋钾反应产生红棕色沉淀2.碘化汞钾反应产生类白色沉淀3.硅钨酸反应产生白色沉淀4.苦味酸反应产生黄色结晶性沉淀需在酸性条件下进行。注意事先排除其它成分的干扰。少数生物碱不与上述通用沉淀试剂反应，而具有专属性较强的其它反应。（二）黄酮类化合物最多使用的检识反应为盐酸—镁粉反应，呈紫红色。大山楂丸（山楂）、抗骨增生丸（淫羊藿）、参茸保胎丸（黄芩）等。此外，黄芩提取物采用二氯氧锆-盐酸显色反应进行检识。（三）蒽醌类化合物主要应用碱液反应（Borntrager反应），阳性反应呈红色，加酸红色褪去呈黄色。例如大黄流浸膏。（四）皂苷常用的定性鉴别反应有：①泡沫反应样品水溶液振摇后，产生持久性泡沫。②醋酐—浓硫酸反应甾体皂苷呈现污绿色，三萜皂苷呈现红、红紫色。③浓硫酸反应呈现红、红紫色。④三氯化锑或五氯化锑反应氯仿液呈紫兰色。⑤氯仿—浓硫酸反应氯仿层出现红色或兰色，并具绿色荧光。例：地奥心血康胶囊（黄山药和穿山龙薯蓣的提取物）、养心定悸膏（甘草、红参、麦冬）。（五）香豆素、内酯类和酚类常用的检识反应有：①氯亚氨基-2，6-二氯醌-四硼酸钠反应（Gibbs反应），呈现蓝色。②异羟肟酸铁反应呈红色。应用品种有：养阴清肺膏（牡丹皮）、前列舒丸（牡丹皮）等。（六）挥发性成分主要使用香草醛—浓硫酸反应检识此类成分，正反应呈红、红紫色。应用品种主要有：万应锭（冰片）、牛黄解毒片（冰片）、养心定悸膏（桂枝、生姜）等。（七）矿物药朱砂、石膏、雄黄等为中成药中常见的矿药。1.朱砂（主含HgS）主要采用铜片反应。HgS+2HCl+Cu→CuCl2+Hg（白△↑）+H2S天王补心丹等中成药中朱砂的鉴定。2.石膏、牡蛎、海螵蛸等此类药物均富含钙盐，主要采用草酸铵反应。CaSO4+(NH4)2C2O4→CaC2O4（白）↓+(NH4)2SO4CaC2O4溶于盐酸，难溶于醋酸。CaC2O4+2HCl→CaCl2+H2C2O4止咳桔红口服液（石膏）、安胃片（海螵蛸）、龙牡壮骨颗粒（牡蛎、龙骨、乳酸钙、葡萄糖酸钙等）3.雄黄（主含As2S2）（1）氯化钡沉淀法（检出硫）As2S2+KClO3+4HNO32K3AsO3+H2SO4+Cl2↑+4NO↑H2SO4+BaCl2BaSO4↓（白）牙痛一粒丸（2）硫化氢反应（检出砷）2As2S2+7O22As2O3+4SO2↑As2O3+3H2O2H3AsO32H3AsO3+3H2SAs2S3(黄)+6H2OAs2S3在盐酸中析出黄色沉淀，并溶于碳酸铵中4As2S3+12(NH4)2CO34(NH4)3AsO3+4(NH4)3AsS3+12CO2↑小儿惊风散等。[o]（八）动物药常含有较多的蛋白质或氨基酸，故鉴别此类药物，常使用茚三酮反应，正反应呈红紫色。例如：龟龄集（鹿茸、海马、等）、参茸保胎丸（阿胶、鹿茸）等。四、操作方法（1）供试液的制备（见前述）（2）操作方式大多为试管反应，或在检测试纸上、或在蒸发皿（坩埚）中进行反应五、结果判断将反应现象或结果与药品标准对照，若一致则符合规定。若不一致则判定为不符合规定。六、注意事项①试管反应一般使用2×10cm试管，取供试液1~2ml。加入检测试液时，试管应稍倾斜，试液应沿试管内壁逐滴加入，滴管下口不得触及内壁。②加入反应试液后一般需振摇试管，使之与供试液混匀。振摇时应缓缓摇摆振摇，不得上下振摇，手指不允许堵塞试管口，若需层反应，则不得振摇试管。③一般需在白色背景下观察反应所产生的颜色或沉淀，若沉淀为白色或类白色则需在黑色背景下观察。④如果反应需加热，一般在水浴中加热。用试管夹夹持试管，内容物不得超过容积的2/3，试管应倾斜45度，试管口不得闭塞，并不得朝向人。加热有机溶液绝对不允许使用明火热源。⑤如果反应需无水条件，必须保持试管、蒸发皿等容器的干燥，例如醋酐—浓硫酸反应。七、应用实例1.千柏鼻炎片2.小儿清热止咳口服液3.茴香橘核丸4.地奥心血康胶囊5.养阴清肺膏6.安胃片7.天王补心丹8.牙痛一粒丸9.中风回春片取本品6片(去包衣)，研细，加乙醇10ml，温热10分钟，过滤，滤液作如下反应：(1)取滤液5ml，加镁粉少量与盐酸0.5ml，加热，即显红色。（黄芩中有大量黄酮）(2)另取滤液4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有羟基蒽醌）实例：牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应附：显微化学鉴别法(一)取药材的切片、粉末或中成药粉末，置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察产生的结晶或沉淀，以及特殊的颜色等，作为鉴别的特征。例：穿心莲用水湿润，切成横切片，滴加乙醇后加Kedde试液，叶肉组织显紫红色(穿心莲内酯成分的不饱和内酯环反应)。(二)取药材粗粉加适当的溶剂浸提，将浸提液置载玻片上，滴加各种试剂，加盖玻片，在显微镜下观察反应。例如：槟榔粉末0.5g，加水3～4ml及稀盐酸1滴，微热数分钟，过滤，取滤液1滴于载玻片上，加碘化铋钾试液1滴，即发生混浊，放置后可见石榴红球形或方形结晶(槟榔碱)。(三)取药材切片或粉末，滴加各种试剂，直接观察反应现象。例如：钟乳石少许，加浓盐酸数滴，能产生大量气泡(碳酸盐分解产生CO2)。番木鳖胚乳薄片，加1％钒酸铵-硫酸试液1滴，胚乳速显紫色(番木鳖碱)，另取切片加发烟硝酸1滴，即显橙红色(马钱子碱)。升华鉴别法（Sublimation）一、原理本法是利用某些成分的升华性，在一定温度下将其从制剂中升华分离出来，并以升华物所具有的某些理化性质作为制剂鉴别的依据。二、特点升华法具有简便、实用等特点，由于升华性仅为少数中药化学成分所具有且升华物纯度较高，故该法专属性亦较好。三、操作方法大多采用微量升华法，少数使用坩埚法或蒸发皿法，在此，仅介绍微量升华。六味地黄丸中冰片升华物六味地黄丸中冰片升华物显微镜下观六味地黄丸中冰片升华物香草醛浓硫酸显色四、注意事项①升华时应缓缓加热，温度过高，易使药粉焦化，在载玻片上产生焦油状物，影响对升华物的观察或检识。温度的控制可通过调整酒精灯火焰与石棉板的间距来实现。②样品粉末用量一般约0.5g，过少不易产生足够量的升华物。③可在载玻片上滴加少量水降温，促使升华物凝集析出。④无金属片，可用载玻片代替。五、应用实例(一)万应锭的鉴别（二）小儿惊风散的鉴别（三）明目地黄丸的鉴别实例牛黄解毒丸微量升华鉴别取本品进行微量升华，先得白色升华物后（冰片），继得黄色升华物（大黄中蒽醌）。将升华物分别置显微镜下观察：白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的1％香草醛硫酸溶液，渐显紫红色，黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。荧光鉴别法（Fluorescence）一、原理荧光鉴别法是利用制剂中某些成分，如黄酮类、蒽醌类、香豆素类等在可见光或紫外光照射下能产生一定颜色荧光的性质，对中药制剂进行鉴别。有的成分本身不具荧光性，但加酸、碱处理后，或经其它化学方法处理后也可产生荧光供鉴别用。二．特点本法操作简便、灵敏，具有一定的专属性。例如大黄和土大黄，前者显棕色至棕红色荧光，而后者显亮蓝色荧光，很容易区分。三、操作方法取中成药的提取液点加于滤纸上或加入蒸发皿中，置紫外光灯（365nm）下约10cm处观察所产生的荧光。必要时可在供试品上加酸、碱或其它试剂，再观察荧光及其变化。四、注意事项①荧光强度较弱，故一般需在暗室中观察荧光。②供试液一般用毛细管吸取，少量多次点加在滤纸上，使斑点集中且具有一定浓度。③紫外光对人的眼睛和皮肤有损伤，操作者应避免与紫外光较长时间接触。五、应用实例（一）元胡止痛片（二）五味麝香丸（三）热炎宁颗粒紫外-可见光谱鉴别法(UltravioletandVisibleSpectroscopy)一、原理某些中药或中成药经适当处理后，所得紫外吸收光谱是由其各组分的特征吸收叠加而成的。若将中药制剂作为一个特定的整体，在一定测试条件下，只要各药味及其成分的组成与含量相对稳定，则其紫外吸收光谱具有一定的特征性和重现性