红细胞检验

1--红细胞检验主讲人：丁肖华医学技术学院红细胞检查红细胞计数血红蛋白测定血细胞比容红细胞平均指数计算网织红细胞计数嗜碱性点彩红细胞计数红细胞沉降率测定3红细胞检查红细胞的发育过程造血干细胞→早幼红细胞→中幼红细胞→晚幼红细胞→网织红细胞→成熟红细胞上一页下一页返回EPO红系祖细胞→原始红细胞成熟红细胞120天上一页下一页返回铁→铁代谢原卟啉→胆色素代谢珠蛋白→蛋白质代谢衰老红细胞红细胞的发育过程6检测方法1.手工显微镜法：2.血液分析仪法：一、红细胞计数手工显微镜法7定义：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数后，滴入改良Neubauer计数板，在显微镜下计数一定范围内的红细胞数，经换算即可求得每升血液中的红细胞数。8改良牛鲍计数板计数板910红细胞稀释液组成与作用稀释液组成作用备注Hayem液NaCl、Na2SO4、HgCl2调节渗透压、增加红细胞悬浮性和防腐作用高球蛋白血症时，蛋白质沉淀致红细胞凝集枸橼酸钠稀释液NaCl、枸橼酸钠、甲醛NaCl和枸橼酸钠调节渗透压，枸橼酸钠具抗凝，甲醛防腐生理盐水生理盐水急诊时用1%甲醛生理盐水甲醛、生理盐水急诊时用11【操作】1.准备计数板2.加稀释液：2ml3.加血：10μl混匀4.充池5.计数6.计算：红细胞数=N/5*25*10*200*106/L12•1.分析前质量控制•患者准备、标本采集、存储温度和时间•2.分析中质量控制•计数误差（技术误差和固有误差）、白细胞影响•3.分析后质量控制•结合临床资料质量控制131.手工显微镜法（1）血液分析仪的校正（2）白细胞减少时的对照核实。（3）血小板计数受小红细胞干扰时的校正2．血液分析仪法•方法精确，且操作简便、快速，已广泛应用。方法学评价14成年：男性（4～5.5）×1012/L女性（3.5～5.0）×1012/L新生儿：（6.0～7.0）×1012/L参考值151．生理性变化(1)年龄与性别的差异(2)精神因素(3)剧烈体力运动和劳动(4)气压降低(5)妊娠中、后期临床意义162．病理性变化(2)红细胞增多1)原发性红细胞增多2)继发性红细胞增多3)相对性红细胞增多(1)红细胞和血红蛋白量减少1）红细胞生成障碍2）造血原料缺乏3）利用障碍红细胞4）破坏过多和失血临床意义17医学决定水平①高于6.8×l012/L，应采取相应的治疗措施。②低于3.5×1012/L为诊断贫血的界限，应继续寻找原因。③低于1.5×l012／L应考虑输血指该项目结果如高于或低于某一个值时就应该采取一定的措施，为患者处理起提供依据的作用。临床意义血红蛋白(血色素，Hb或HGB)组成二、血红蛋白测定珠蛋白：4条，种属特异性亚铁血红素：4个，无种属特异性19•每个Hb分子由2条α类肽链和2条β类肽链组成，每条珠蛋白肽链含有1个亚铁血红素。在人体不同生长时期，Hb种类与比例不同：21定义：血红蛋白测定是测定外周血液中各种血红蛋白的总浓度，用g/L表示血红蛋白测定22•1．氰化高铁血红蛋白(HiCN)测定法•2．其他测定法•十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法•叠氮高铁血红蛋白(HiN3)法•碱羟血红蛋白法•沙利(Sahli)酸化血红蛋白法•溴代十六烷基三甲胺血红蛋白测定法（CTAB）等检测原理23HiCN转化液：即文齐氏液540nm处有一吸收波峰，用分光光度计测定换算成每升血液中的血红蛋白浓度，或制备标准曲线供查阅。CN-血红蛋白高铁血红蛋白氰化高铁血红蛋白高铁氰化钾540nm血红蛋白浓度吸光度24•血红蛋白浓度计算公式：•Hb(g/L)=Aג540HiCN/44×64458/1000×251=A×367.7uAג540HiCN：测定管吸光度u44：毫摩尔消光系数u64458/1000：1mmol/LHb溶液中所含Hb克数u251为稀释倍数25血红蛋白SDS-HbSDS540nm血红蛋白浓度吸光度十二烷基硫酸钠血红蛋白（SDS-Hb）法方法优点缺点HiCN操作简便、快速(5min)，结果稳定可靠，试剂容易保存，便于质控，为参考方法①KCN有剧毒②高白细胞和高球蛋白可致浑浊。③HbCO转化慢SDS-Hb不用剧毒试剂、无公害，操作简便，呈色稳定，准确度和精度高①SDS-Hb消光系数未确定②SDS质量差异性大。③SDS溶血活力大，不适于同时进行自动化分析AHD575同HiCN法，不用剧毒试剂不便于自动检测、氯化血红素纯度达不到标准HiN3准确度和精密度高，试剂毒性低HbCO转化慢CTAB溶血活力强，但不破坏白细胞，适合自动化分析精密度和准确性低2627分析前质量控制：同红细胞计数分析中质量控制技术误差：稀释倍数、分光光度计波长、光缝、比色杯光径需校正HiCN转化液：棕色玻璃瓶HiCN参考液：关键质控物：室内质控分析后质量控制：同红细胞计数质量控制28•①成年：男性：120～160g／L；•女性：llO～150g／L。•②新生儿：170～200g／L。•③老年(70岁以上)：•男性：94～122g／L；女性87～112g／L。参考值29①轻度贫血，成年男性Hb＜120g/L，成年女性＜110g/L；②中度贫血＜90g/L；③重度贫血＜60g/L；④极度贫血＜30g/L。临床意义31血细胞比容(HCT)，以前称为红细胞压积，是指在一定条件下经离心沉淀压紧的红细胞在全血标本中所占体积的比值。测定目的：1.诊断贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多2.测定血液稀释和血液浓缩的变化3.计算MCV和MCHC三、血细胞比容测定1.常量法(Wintrobe法)和微量法(microhematocrit)将抗凝血液标本置于孔径统一的温氏管或毛细玻璃管中，以一定转速离心一定时间后，计算红细胞层占全血的体积比。5层：血浆层、血小板层、白细胞和有核红细胞层、还原红细胞层和氧合红细胞层。2.血液分析仪法由红细胞平均体积和红细胞计数两项指标后导出，Hct＝红细胞计数×红细胞平均体积。检测原理方法优点缺点温氏法无需特殊仪器，广泛应用不能完全排除残留血浆，且单独采血，用血量大微量法快速(5min)标本用量小、结果准确、重复性好。WHO推荐的首选参考方法有残留血浆，但较温氏法少电阻抗法简便快速(5-15s)白细胞、血小板增多可引起血液导电异常，使结果不可靠血细胞分析仪法简便快速、精密度高，无需单独采血准确性稍低，结果仅供参考341.操作规范化避免操作误差，如抗凝量不准，混匀不充分，离心速度不均等。2．注意干扰因素①假性增高：红细胞形态异常和红细胞增多时应注明，(细胞变形性减低和数量增多血浆残留量增加)；高网织红细胞或高白细胞等②假性降低：体外溶血、自身凝集等。质量保证参考值男性：0.42—0.49；女性：0.37—0.48临床意义•HCT的临床意义与红细胞计数相似。HCT减低是诊断贫血的指标，HCT的高低与红细胞数量及平均体积、血浆量有关主要用于贫血、真性红细胞增多症和红细胞增多的诊断、血液稀释和血液浓缩变化的测定、计算红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白浓度等。临床意义1．临床补液量的参考各种原因导致脱水时，HCT都会增高，补液时可监测HCT，HCT恢复正常表示血容量得到纠正。2．真性红细胞增多症诊断指标当HCT大于0.7，RBC为(7-10)X1012／L,Hb大于180g／L，即可诊断。临床意义3．红细胞平均指数计算的基础数据红细胞平均值(MCV、MCHC)可用于贫血的形态学分类。4．血液流变学指标HCT增高表明红细胞数量偏高，全血黏度增加，严重者表现为高黏滞综合征，微循环障碍、组织缺氧。HCT与其他血液流变学指标联合应用，可对一些血栓前状态进行监测。40四、红细胞平均值•红细胞平均体积(meancorpuscularvolume，MCV)，指红细胞群体中单个红细胞体积的平均值，以飞升(f1)为单位；•平均红细胞血红蛋白含量(meancorpuscularhe-moglobin，MCH)，指红细胞群体中单个红细胞血红蛋白含量的平均值，以皮克(pg)为单位；•平均红细胞血红蛋白浓度(meancorpuscularHemoglobinconcentration，MCHC)，指测定红细胞比容时被压紧的红细胞血红蛋白浓度(g／L)。(1)MCV=每升血液中红细胞体积/每升血液中红细胞个数=Hct/RB(f1)(2)MCH=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞个数=Hb/RBC(pg)(3)MCHC=每升血液中血红蛋白含量/每升血液中红细胞比容=Hb/Hct41[检测原理]1．手工法同时计数红细胞，测定血红蛋白和血细胞比容，计算出红细胞3个平均指数。例：RBC为3.50X1012／L，Hct为0.36，Hb为120g/LHct0.36MCV＝——（fl）＝——————＝103（fl）RBC3.50X1012／LHbHbMCH＝——（pg），MCHC＝——（g／L）RBCHct[检测原理]2．血液分析仪能直接导出MCV的值，再结合仪器直接测定的RBC和Hb，计算出MCH和MCHCMCH＝Hb／RBC，MCHC＝Hb／(RBC×MCV)。44参考值临床意义贫血分类MCVMCHMCHC贫血正细胞贫血正常正常正常再生障碍性贫血、急性失血性贫血、某些溶血性贫血大细胞贫血增高增高正常各种造血物质缺乏或利用不良的贫血单纯小细胞贫血减低减低正常慢性感染、慢性肝肾疾病性贫血小细胞低色素贫血减低减低减低缺铁性贫血及铁利用不良贫血，慢性失血性贫血作为贫血的红细胞形态学分类47五、网织红细胞计数网织红细胞(reticulocyte，Ret)是晚幼红细胞脱核后到完全成熟红细胞间的过渡细胞胞质中残存嗜碱性物质核糖核酸(RNA)，经煌焦油蓝等活体染色后，嗜碱性物质凝聚成蓝黑色颗粒，连缀成线，线连接成网。属于尚未完全成熟的红细胞(当嗜碱性物质消耗殆尽后才被视为成熟红细胞)，一般为8～9.5μm。4849[检测原理]1.普通光学显微镜法活体染色（新亚甲蓝或煌焦油蓝)的碱性着色基团网织红细胞RNA的磷酸基(带负电荷)RNA胶体间的负电荷减少而发生凝缩，蓝色的点状、线状或网状结构，显微镜下计数1000个红细胞中所占的网织红细胞数，以百分比或分数数表示。[检测原理]流式细胞仪法2．仪器法网织红细胞计数仪血液分析仪法。荧光染料与网织红细胞中RNA结合，发出特定颜色的荧光进行RNA定量•精确计数网织红细胞占成熟红细胞的百分数(Ret％)。•将网织红细胞分成高、中、低荧光强度网织红细胞比率(HFR、MFR、LFR)•并计算网织红细胞其他参数。血液分析仪法提供与网织红细胞相关的多个参数，网织红细胞绝对值、网织红细胞百分比、网织红细胞平均体积、网织红细胞血红蛋白分布宽度、网织红细胞血红蛋白浓度、网织红细胞平均血红蛋白浓度、LFR、MFR、HFR、网织红细胞成熟指数。53【质量保证】以手工计数法为重点。1．染料选择【质量保证】2．正确辨认网织红细胞外周血中网织红细胞主要为Ⅳ型，凡含有2个以上网织颗粒的红细胞均应计为网织红细胞。3．网织红细胞计数方法(1)Miller窥盘：(2)显微成像系统：计算机和细胞形态分析软件，①HFR：粗颗粒堆积成网状。②MFR：粗颗粒在10个以上，或细小颗粒超过15个。③LFR：细胞内含15个以下细小颗粒①网织红细胞百分数：成人和儿童:0.005～0.025新生儿:0.02～0.06②网织红细胞绝对数：成人和儿童:(24～84)X109／L参考值临床意义1．评价骨髓增生能力，判断贫血类型。(1)网织红细胞增多：表示骨髓造血功能旺盛，各种增生性贫血(2)网织红细胞减少：常见于再生障碍性贫血(3)鉴别贫血：临床意义2．评价疗效(1)观察贫血疗效：贫血随访缺铁贫或巨幼贫有效治疗后，2～3d后Ret开始上升，7～10d达到最高峰(约10％)，2周后渐降至正常。(2)骨髓移植后监测骨髓造血恢复：骨髓移植后第21天，如Ret大于15X109／L，常表示无移植并发症；若骨髓开始恢复造血功能，首先HFR和MFR上升，其次为网织红细胞计数值上升。临床意义3．放疗和化疗的监测•指导临床适时调整治疗方