大理大学病毒学检验备考精华

大理大学病毒学检验期末备考精华责任编辑总结：程家国第1章细胞培养技术一、名词解释1.细胞培养技术(cellculturetechnology):是模拟体内生理环境条件，一共细胞适宜的营养和温度条件，在无菌操作的基础上，使离体组织细胞生长增殖并进行传代的技术。2.细胞系（celllines）：原代培养物经传代培养获得的一群细胞。3.原代细胞培养（primarycell）：将动物或人的胎儿组织经剪碎、酶消化、稀释计数、加营养液，37度培养1~2天后，形成单层细胞或悬浮细胞的方法。4.传代细胞培养（continuouscell）：原代细胞培养过程中，在大多数细胞退化时，少数细胞又能长期传下去，这种能在培养容器内连续多次传代的细胞。5.细胞株（cellstrain）：从原代培养物或细胞系中获得的遗传、生化特性相同的细胞群。二、问答题1.简答空斑形成单位法的原理。答：将不同稀释度的病毒悬液接种于单层细胞上，使病毒吸附于细胞，然后覆盖一层营养琼脂培养基。由于琼脂的限制，病毒只能感染周围的细胞，出现蚀斑现象。加入中性红染料，由于死细胞不能摄入中性红染料，会出现不染色的空斑。一个空斑理论上可认为石油一个病毒粒子感染形成的，称为一个空斑形成单位。可以定量测定病毒的感染力。2.50%终点法的原理和注意事项。答：1.原理：将病毒液经系列稀释后，接种单层细胞，观察细胞病变，计算造成50%细胞发生最终病变的病毒液浓度。2.注意事项：3.细胞的生命周期和一代生存周期各包括哪些阶段？答：1.细胞生命周期：是单个细胞增殖分裂的过程，一个细胞经过前期的物质准备进入分裂期而成为两个新细胞，而两次细胞分裂间间隔的时间为一个细胞周期，包括G1期（DNA合成前期）、S期（DNA合成期）、G2期（分裂前期）、M期（分裂期）。2.培养一代细胞一般要经过：迟缓期、对数期、平衡期和衰亡期。4.体外细胞培养需要哪些理化条件？血清有何作用？答：1.体外培养需要的条件5.常用的消化液有哪些？答：胰蛋白酶、EDTA、胰酶-EDTA。6.细胞培养中预防微生物污染可用哪些抗生素？答：防止细菌污染用青霉素、链霉素和庆大霉素；防止真菌增长用两性霉素；防止支原体污染用卡那霉素和金霉素。7.如何进行鸡胚原代细胞培养？答：8.单层细胞培养上病毒增殖如何检测？答：9.病毒滴度测定有哪些方法？答：10.病毒纯化有何原则？答：11.病毒保存的方法有哪些？各有何特点？答：12.常见病毒纯化的方法有哪些？第2章鸡胚和动物接种技术一、名词解释1.近交系2.封闭群二、问答题1.鸡胚有哪些结构？分别适合何种病毒的接种培养？答：结构：2.活胚的检查有几个方面？3.实验动物如何分类？各有哪些种类？答：普通动物、清洁级动物、SPF、GF第3章病毒核酸杂交技术一、名词解释1.探针（probe）：已知碱基序列的核苷酸片段。2.cDNA探针：指互补与mRNA的DNA分子。3.复性（）4.变性（denaturation）：指核酸双螺旋去的氢键断裂，变成单链，并不涉及共价键的断裂。5.PCR：聚合酶链反应，根据DNA双螺旋结构的半保留复制和在一定条件下可以变性和复性的特性设计的。6.Northernblot：Northern印迹，将RNA样品通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，再转移到固相支持物上，用同位素或生物素标记的核酸探针对固定于膜上的RNA进行杂交。7.Southernblot二、问答题1.简答PCR的原理与反应体系组成。答：1.原理：根据DNA双螺旋结构的半保留复制和在一定条件下可以变性和复性的特性设计的。2.反应体系：DNA模板，引物，反应缓冲液，Mg2+,Dntp,ddH2O,耐热聚合酶。2.简答荧光定量PCR的用途。答：可用于测定DNA和RNA拷贝数。第4章病毒抗原与抗体检测技术一、名词解释1.中和试验（neutralizationtest）：在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再讲混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的一种方法。2.血凝试验HA：某些病毒和病毒表面的血凝素能引起人或某些动物的红细胞发生凝集的现象。3.血凝抑制试验HAI：血清中血凝素抗体能够与病毒血凝素分子的抗原位点发生特异性结合，干扰病毒血凝素与红细胞上受体结合的过程，从而抑制红细胞的凝集。二、问答题1.何为中和试验？有何用途？答：1.中和试验：在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再讲混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的一种方法。2.用途：鉴定病毒；分析病毒抗原的性质；测定免疫血清抗体的效价和疫苗接种后的效果；测定患者血清中的抗体，用于诊断病毒性疾病。2.中和试验中标准血清的抗体浓度是多少？答：3.简答血凝试验与血凝抑制试验的原理、结果判断和应用。答：1.血凝试验原理：某些病毒和病毒表面的血凝素能引起人或某些动物的红细胞发生凝集的现象。2.血凝试验的结果判断：++++指红细胞均匀铺在管底；+++指红细胞铺在管底，面积稍小，边缘不整齐；++指红细胞形成一个小团，周围有小凝块；+指红细胞形成一个小团，但边缘不整齐有小凝块；-无凝集。以出现++的稀释度的倒数为判定终点。3.血凝抑制试验原理：：血清中血凝素抗体能够与病毒血凝素分子的抗原位点发生特异性结合，干扰病毒血凝素与红细胞上受体结合的过程，从而抑制红细胞的凝集。4.血凝抑制试验的结果判断：血凝抑制效价使完全抑制血凝出现的标准血清最高稀释度的倒数。5.用途：发现和鉴定病毒；用于临床病原学诊断；病毒性活亚型的鉴定；免疫机体后抗体效价的测定；病毒抗原变异分析等。4.4个血凝单位的含意是什么？用途是什么？答：1.含义：5.补体结合试验原理与结果判定？答：1.原理：抗原和抗体形成的复合物吸附并激活补体。包括3个系统即反应系统，补体系统和指示系统（绵阳红细胞与相应溶血素形成的致敏红细胞）。2.结果判定：出现溶血现象时补体结合试验阴性，反之则为阳性。第8章皮肤和粘膜感染病毒及其检验1.疱疹病毒生物学特性怎样？答：基因组为线性双链DNA，有包膜，包膜上有包膜蛋白，有内膜和衣壳。2.单纯疱疹病毒临床表现有哪些？一般潜伏于哪些部位？答：1.HSV-1常引起口唇部的疱疹，一般潜伏于三叉神经节和颈上神经节，并在神经细胞内终身潜伏。2.HSV-2：主要引起生殖器疱疹，潜伏在腰骶神经节和脊髓内。3.EBV所致疾病有哪些？如何做实验室检验？实验室诊断标准有哪些？答：4.水痘-带状疱疹病毒有何感染特点？怎样传播？5.人巨细胞病毒感染类型有哪些？如何做实验室检验？6.乳头瘤病毒形态结构有何特点？7.怎样进行HPV的实验室检验？8.宫颈癌普查常用的方法是什么？第9章眼及心血管感染病毒及其检验RhabdoviridaeandItsDiagnosis一、名词解释1.Negribody二、问答题1.简述狂犬病毒的形态特征和核酸类型。2.狂犬病主要的诊断方法有哪些？3.如何预防与治疗狂犬病？第10章肝炎病毒及其检验PicornaviridaeandItsDiagnosis一、名词解释1.大球形颗粒2.HBsAg和抗-HBs3.HBsAg携带者4.HBcAg和抗-HBc5.HBeAg和抗-HBe6.丁型肝炎病毒（HepatitisDvirus,HDV）7.重叠感染二、问答题1.小RNA病毒有无包膜？基因组的类型是什么？2.小RNA病毒科中包括哪些对人致病的病毒？3.HAV和脊髓灰质炎病毒各分几个血清型？4.HAV和脊髓灰质炎病毒的主要流行病学特征有哪些？5.如何预防和治疗脊髓灰质炎和甲型肝炎？6.HBV有哪三种形态不同的颗粒？7.简述Dane的形态结构。8.HBV基因组有何特殊结构？有哪些编码区？各编码哪些蛋白？9.HBV可以分为哪四个主要的亚型？10.简述HBV的地区分布特点和传播途径。11.简述HBV抗原抗体检测的意义。12.简述HBV实验室检验的主要方面。13.HCV感染的传播途径主要有哪些？第11章出血热病毒及其检验一、问答题1.汉坦病毒所引起的疾病主要有哪几种？2.布尼亚病毒主要的形态特征是什么？有无包膜？3.肾综合症出血热病毒的主要传播途径有哪些？第12章虫媒病毒及其检验一、问答题1.黄病毒的共同特性有哪些？2.乙型脑炎病毒的主要流行病学特征是什么？3.乙型脑炎的检测包括哪三个方面？4.登革病毒的传播途径和所致疾病是什么？第13章逆转录病毒及其检验一、名词解释1.“窗口期”（windowperiod）：在感染两周后从血清和脑脊液液中可检测到HIV抗原P24，并持续数周至数月，但HIV抗体可能还未转阳的这段时间，平均约45天。2.gp120和gp413.HIV二、问答题1.简述HIV的形态结构。2.HIV基因组的特点是什么？有哪些结构基因和调控基因。答：：1.基因组有两条相同单股正链RNA组成；2.结构基因：gag编码多聚蛋白、pol编码逆转录酶、env编码gp120和gp41；3.调控基因：tat、rev、nef、vif、vpu、vpr。3.WHO推荐的HIV灭活方法是什么？HIV保存的最好方法是什么？4.简述艾滋病的主要流行病学特征及其传播途径。5.HIV“窗口期”感染者能否检出HIV抗体或抗原？6.HIV的初筛试验和确证实验各有哪些？7.对疑为HIV感染者进行实验室检验的主要程序有哪些？8.HIV感染者诊断的标准是什么？9.针对HIV如何预防和治疗？第14章朊粒及其检验一、名词解释朊粒（Prion,PrPsc）：又称朊病毒，阮毒体，是一类由宿主细胞基因编码，构象异常的蛋白，其不含核酸，抵抗力强，具有自我复制能力和传染性，可引起多种哺乳动物发生传染性海绵状脑病。