09-3第九章 黄酮类化合物

第九章黄酮类化合物Flavonoids第九章黄酮类化合物•第一节黄酮类化合物的结构类型•第二节黄酮类化合物的理化性质•第三节黄酮类化合物的提取和分离•第四节黄酮类化合物的检识与结构测定•第五节黄酮类化合物的生物活性与药用价值333第三节黄酮类化合物的提取和分离原理：黄酮类化合物的溶解性和酸性相似相溶与酸碱理论提取：苷元：极性小的溶剂，如氯仿、乙醚、乙酸乙酯等回流提取苷及极性大的苷元：用丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、醇-水加热提取极性稍大的苷元一般指：羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查尔酮多糖苷类：一般用沸水提取444黄酮类化合物的提取溶剂萃取法（系统分离法）碱提酸沉法炭粉吸附法第三节黄酮类化合物的提取和分离55药材水或醇-水，加热提取提取液浓缩，加3-4倍醇醇水液沉淀（水杂）浓缩，回收醇，加水水液依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取石油醚层氯仿层乙酸乙酯层正丁醇层水层叶绿素等脂溶性成分黄酮苷元大极性苷元小极性的苷黄酮苷多糖蛋白质溶剂萃取法原理：利用黄酮类与其它杂质极性不同，选不同溶剂进行萃取第三节黄酮类化合物的提取和分离66碱提酸沉法原理：酚羟基与碱成盐，溶于水；加酸后析出碱：常用Ca(OH)2，即石灰乳(石灰水)优点A：使含酚羟基化合物成盐溶解B：使含羧基杂质（果胶、粘液质、蛋白质等）形成沉淀注意a：提取时，碱液浓度不宜过高。b：加酸酸化时，酸性也不宜过强。应用芦丁和槲皮素的提取、分离和鉴定第三节黄酮类化合物的提取和分离777活性炭吸附法原理：活性炭吸附黄酮苷类化合物用途：主要用于含量较高的黄酮苷类的精制操作：植物的甲醇提取物中，分次加入活性炭，搅拌，静置，定性检查上清液无黄酮反应时为止。过滤，收集活性炭，依次用沸水、沸甲醇、7%酚/水、15%酚/醇溶剂进行梯度洗脱，对各部分洗脱液进行定性检查。大部分黄酮苷类可以用7%酚/水洗下。第三节黄酮类化合物的提取和分离88极性氢键分子大小（量）酸性特殊结构硅胶聚酰胺凝胶梯度pH萃取法金属盐络合法柱色谱法分离方法第三节黄酮类化合物的提取和分离99硅胶是一种高活性吸附材料，其化学分子式为mSiO2·nH2O硅胶柱色谱应用范围：主要分离小极性和中等极性的化合物，应用最为广泛。异黄酮、二氢黄酮（醇）、高度甲基化（乙酰化）的黄、酮及黄酮醇多羟基黄酮、黄酮醇及其苷类：硅胶加水去活化吸附规律：极性大吸附能力强eg：A苷元B二糖苷C单糖苷Rf：ACB第三节黄酮类化合物的提取和分离1010聚酰胺柱色谱原理：氢键吸附（作用）洗脱规律：（先—后）母核上羟基增加，洗脱顺序递减羟基数目相同时，有缔合羟基无缔合羟基苷元相同：三糖苷双糖苷单糖苷苷元不同类型黄酮类化合物的洗脱先后顺序为：异黄酮＞二氢黄酮醇＞黄酮＞黄酮醇。分子中芳香程度高、共轭双键多，则聚酰胺对其的吸附力强，故难于洗脱。应用范围：适合各种类型的黄酮类化合物，包括苷、苷元、查耳酮及二氢黄酮第三节黄酮类化合物的提取和分离1111葡聚糖凝胶柱色谱常用型号：Sephadex-G和Sephadex-LH20原理：吸附作用和分子筛对游离黄酮，主要是吸附作用,吸附程度取决于游离酚羟基的数目，苷元的羟基数目越多，越难洗脱。对黄酮苷，主要是分子筛原理,洗脱时按分子量由大到小先后洗脱下来。常用洗脱剂：碱性水溶液（0.1mol/LNH4OH），盐水溶液(0.05mol/LNaCl)醇及含水醇，如甲醇，甲醇-水，乙醇等。其它溶剂：含水丙酮、甲醇-氯仿(凝胶会膨胀，体积变大)。第三节黄酮类化合物的提取和分离1212黄酮类化合物取代情况Ve/Vo芹菜素5,7,4’－三OH5.3木犀草素5,7,3’,4’－四OH6.3槲皮素3,5,7,3’,4’－五OH8.3杨梅素3,5,7,3’,4’,5’－六OH9.2山柰酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠李糖苷三糖苷3.3槲皮素-3-芸香糖苷双糖苷4.0槲皮素-3-鼠李糖苷单糖苷4.9第三节黄酮类化合物的提取和分离1313葡聚糖凝胶柱色谱规律：苷元的羟基数越多，Ve/Vo越大，越难以洗脱。吸附作用苷的分子量越大,其上联结糖的数目越多,Ve/Vo越小,容易洗脱。分子筛原理苷比苷元先洗脱。第三节黄酮类化合物的提取和分离1414梯度pH萃取法原理：黄酮类化合物具有酸性、且不同数目和不同位置的酚羟基的酸性强弱不同适用范围：适用于分离酸性强弱不同的黄酮苷元酸性：7,4′-OH＞7-或4′-OH＞一般酚OH＞5-OH溶于5%NaHCO3溶于5%NaCO3溶于不同浓度NaOH第三节黄酮类化合物的提取和分离1515乙醚液（脂杂）乙醚液乙醚液乙醚液乙醚液碱液(3或5-OH黄酮)碱液(一般酚OH黄酮)碱液(7,4’-二OH黄酮)碱液(7或4’-OH黄酮)5%NaHCO35%Na2CO30.2%NaOH4%NaOH梯度pH萃取法第三节黄酮类化合物的提取和分离1616金属盐络合法原理：利用分子中某些特定官能团性质进行分离具有邻二酚羟基的成分，用醋酸铅沉淀不具有邻二酚羟基的成分，用碱式醋酸铅沉淀具有邻二酚羟基的黄酮类化合物还可以与硼酸反应形成溶于水的硼酸络合物，可以与不具有邻二酚羟基的其它黄酮类化合物分离第三节黄酮类化合物的提取和分离1717提取分离实例从柠檬果皮中分离降血压有效成分第三节黄酮类化合物的提取和分离柠檬柑橘类（Citrusspp.）果皮热水提取物对自发性高血压大鼠（SHR）及自发性高血压大鼠脑卒中型（SHP-SP）有明显的降压作用，为探讨含有的降压有效成分，进行了以下分离。1818第三节黄酮类化合物的提取和分离柠檬果皮2400g搅碎成匀浆，热水浸提，过滤滤液浓缩至小体积，加三倍量EtOH,静置一夜，滤过，滤液浓缩，冷冻干燥水提取物（183g）取179g进行下面实验用500ml水溶解，过滤滤液用正己烷、正丁醇进行萃取水提醇沉法使要得到的化合物溶解，而使蛋白质、黏液质等大极性成分形成沉淀除去1919第三节黄酮类化合物的提取和分离正己烷提取物正丁醇提取物水溶性部分（3.6g）（39g）（134g）溶于1500ml水中，加入22gPb(OH)Ac饱和水溶液，静置后过滤黄色铅盐沉淀加入20gNaHCO3饱和水溶液，搅拌1小时，静置，过滤滤液6mol/LHCl调pH至5.3，正丁醇萃取5次，每次500ml正丁醇萃取物（4.3g，粗黄酮类）水层溶剂萃取法铅盐沉淀法溶剂萃取法2020第三节黄酮类化合物的提取和分离凝胶过滤（TSKgel-HW-40）Frs.A-HFrs.I-PFrs.O-K（Ph5酸水洗脱部分)（Ph7水洗脱部分）（Ph9氨水洗脱部分）分别进行硅胶柱色谱（Wakogel-C-300）洗脱剂：CHCl3-MeOH-HOAc-H2O（70:15:12:3）或（60:20:15:5）反复重结晶化合物L-1~L-11凝胶柱色谱法硅胶柱色谱法重结晶法2121第三节黄酮类化合物的提取和分离2222第三节黄酮类化合物的提取和分离2323第三节黄酮类化合物的提取和分离总结：一次成功的分离是一个系统工程，要针对目标化合物的理化性质和结构特征，将上述色谱法与各种经典方法相互配合应用，以达到较好的分离效果。