第六章 一般毒性2-1

毒性评价或安全性评价的基本目的受试物毒作用的表现和性质剂量－反应（效应）研究确定毒作用的靶器官确定损伤的可逆性其它：敏感检测指标和生物学标志、毒作用机制、毒物动力学、中毒的解救措施…毒性试验的设计不是为了证明化学品的安全性，而是为了表征化学品可能产生的毒作用。统计原则实验动物选择原则剂量分组与设计试验期限给受试物途径质量控制实验设计过程应遵循基本原则随机、对照、重复第三节局部毒性试验(Localtoxiceffect)(Localirritanteffect)机体暴露于化学物后，在其接触和暴露部分造成的局部毒性损伤、刺激（如眼刺激、皮肤刺激）和（或）变态反应等农药、化妆品、消毒剂的常规项目刺激性、腐蚀性、致敏性家兔眼刺激性：眼球表面接触受试物后产生的可逆性炎性变化眼腐蚀性：眼球表面接触受试物后产生的不可逆性组织损伤一、眼刺激试验Draize眼刺激试验（标准方法）9只家兔，每只兔的一只眼睛滴入0.1ml受试物。其中3只在滴人后2秒钟用20ml微温水冲洗；3只在4秒后冲洗；3只不作冲洗。于滴入后24h、48h和72h、4d和7d，以肉眼或手提式裂隙灯检查眼的反应。记录结膜（发红、球结膜水肿和分泌物）、角膜（浑浊程度和范围）和虹膜（充血、肿胀、对光反应）的反应程度和持续时间观察期限要足够评价刺激效应的可逆性或不可逆性一般7天，看延长到21天按规定分级标准进行评分，计算染毒后前4d最高总积分平均值和刺激反应持续时间刺激强度分为4级，即无、轻、中、重。部位及损伤情况积分A．混浊程度(以最致密部位为准)无混浊0散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见1半透明区易分辨，虹膜轻度模糊不清2出现灰白色半透明区，虹膜模糊不清，瞳孔大小勉强可见3角膜混浊，虹膜无法辨认4B．角膜受损范围＜1/411/4～l/221/2～3/433/4～14眼各部位损伤评分表积分A×B×5最高积为80角膜虹膜结膜化学品毒性鉴定技术规范染毒后前4天最高总积分平均值刺激反应持续时间（总积分平均值）刺激强度0～第1d≥0无刺激性2.5～第2d≥0轻刺激性15～第4d=0轻刺激性第4d＞0中度刺激性25～第7d≤20，半数以上动物第7d≤10中度刺激性第7d≤20，半数以上动物第7d＞10,但是无任何一只动物7d＞30中度刺激性第7d≤20，半数以上动物第7d＞10,而且有一只动物7d＞30重度刺激性第7d＞20重度刺激性眼刺激强度评价标准化学品毒性鉴定技术规范皮肤刺激：皮肤接触或涂抹受试物后产生的局部可逆性的炎症变化皮肤腐蚀：皮肤接触或涂抹受试物后产生的局部不可逆性组织损伤单次/多次；完整/破损家兔、豚鼠二、皮肤刺激试验下列3种情况可不考虑做皮肤刺激试验：①根据结构与活性关系及理化特性推测可能有腐蚀性的物质（如pH≤2或pH≥11.5）；②受试物有很强的经皮吸收毒性，经皮LD50＜200mg/kg；③在急性经皮毒性试验中染毒剂量达2000mg/kg时仍未产生皮肤刺激体征的物质。皮肤刺激试验试验前24h将动物背部脊柱两侧毛剪掉（不可损伤表皮），去毛范围各约3cm×3cm取受试物0.5ml（g）直接涂在皮肤上（无损伤皮肤或损伤皮肤），对侧作为对照。然后封包、固定，敷用时间为4-24h（应防止动物添食及经呼吸道吸收）。试验结束后，用温水或无刺激性溶剂除去残留受试物于除去受试物后的1、24和48h观察涂抹部位皮肤反应，依据红斑和水肿的情况进行皮肤刺激反应评分一只家兔背部脊柱两侧可各准备3个去毛区进行剂量-反应研究，或测试多种受试物物种差异：有学者用Draize试验测试了40种化学品成分，皮肤反应的敏感顺序：兔豚鼠人猪OECD皮肤腐蚀性体外试验方法分离的大鼠皮肤、重建的人体皮肤、人工膜模拟人体皮肤评价指南规定：经上述体外皮肤腐蚀性试验发现受试物具有皮肤腐蚀性作用，可不再进行动物皮肤刺激/腐蚀试验，并可根据体外结果进行危害分级即过敏性接触性皮炎，是一种对化学物免疫介导的皮肤反应，人体这类反应的特点为瘙痒、红斑、水肿、丘疹、水疱、融合水疱等。其他物种动物的反应可有所不同，可能仅见皮肤红斑和水肿豚鼠豚鼠最大值试验：诱导接触（弗氏佐剂FCA+受试物）→间隔10-14天→激发接触局部淋巴结试验（locallymphnodeassay，LLNA）三、皮肤变态反应试验眼刺激：牛角膜浑浊和渗透性试验，受精鸡卵尿囊绒膜试验，血红蛋白变性试验、兔眼角膜上皮细胞毒性试验…皮肤刺激：体外皮肤刺激试验、单层皮肤细胞培养试验、表皮组织培养模型、器官型人工培养模型皮肤致敏：树突状细胞、T细胞→免疫识别局部毒作用替代试验眼刺激试验：家兔皮肤原发性刺激试验：家兔/豚鼠皮肤致敏实验：豚鼠，诱导接触和激发接触农药、化妆品、消毒剂