ATP检测讲解

——评价医疗器械清洗效果北京创新世纪生化科技发展有限公司ATP生物荧光检测技术器械清洗的目的：–降低器械上微生物负荷；–去除器械上的有机物和无机物；–控制包装区的污染，达到环境标准要求；–确保灭菌达到无菌保障水平（SAV）10-6ATP检测示意图残留污染物细菌细胞中含有ATP有机污染物中含有ATP＋O2萤光素酶荧光素反应发光细菌含ATP有机物残留清洗质量是保证灭菌成功的前提降低微生物负荷：去除大多数微生物后，再进行消毒和灭菌，才能有效的达到消毒灭菌效果；去除微生物滋生的条件，阻碍残留的微生物繁殖（有机物、温度）减少热源的产生（革兰氏阴性杆菌灭活后，细胞壁释放的内毒素）深度清洁监测中ATP生物荧光法更全面消毒不合格清洁不合格培养法：不合格ATP法：不合格↑↑培养法：合格ATP法：不合格↑培养法：合格ATP法：合格清洁不合格消毒合格、清洁合格有效去除残留的有机物可阻断微生物滋生环境清洗质量是保证灭菌成功的前提•去除有机物或杂质：–覆盖在器械上的有机物或无机物，灭菌剂不易穿透，有效的保护了细菌芽孢的灭活。使用中脱落在病人的体内（转移其他病人），可引起脏器粘连和伤口内感染，甚至危及病人生命。ATP存在于细胞内ATP（三磷酸腺苷）存在于动物细胞、细菌细胞、植物细胞中，同类活细胞内的含量基本一致；体细胞ATP含量大约为1×10-15molATP；细菌细胞中ATP含量大约为2×10-18molATP；细胞在自然凋亡的情况下，ATP含量会有所变化；因此可通过ATP的残留量，直接反映清洁的效果。技术原理•沾染在物体表面、医疗器械上的血液、组织液等体液中含有大量的体细胞和细菌等污染物，这些生物污染可以通过ATP生物荧光法测出。•萤光素酶在Mg2＋、ATP、O2的参与下进行酶促反应放出光子•仪器定量测定加入ATP标准品前后的相对发光值RLU，从而获知污染物中的ATP含量，来判断医疗器械的污染程度和清洗效果。•通过使用体细胞ATP消除技术，也可对残留细菌进行检测。ATP的可重复性实验•以细菌内ATP为指示物，取105大肠埃希菌（ATCC8099）菌悬液50μL，加入无菌离心管中进行ATP含量测定并用菌落计数法对照；上述试验重复三天，每天同一管菌液重复测十次；将每天测的次数与ATP含量之间的关系进行曲线标定。菌落总数（CFU）第一天1.78×104第二天1.23×104第三天1.88×104中国CDC消毒检测中心ATP生物荧光法与细菌计数法的相关性研究金黄色葡萄球菌（ATCC6538）测定结果：菌落计数相对光单位CFULog(CFU)RLULog（RLU）2.79×1088.4545829016.662.78×1077.4423217006.372.76×1066.446999315.852.81×1055.45810964.912.75×1044.4481603.912.82×1033.459852.992.82×1022.451762.252.75×101.441202.08表中cfu和RLU值均为5次试验结果平均值。中国消毒学杂志1001-7658（2008）03-0245-0448小时5秒y=1.3199x-0.8317R2=0.97780.001.002.003.004.005.006.007.008.009.000.001.002.003.004.005.006.007.00relativelightunit(Log10)colonyformingunit(Log10)金黄色葡萄球菌菌落数对数值与RLU对数值的线性关系中国CDC消毒检测中心ATP生物荧光法与血液残留的相关性研究对不同稀释度血液的RLU观察：血液稀释度相对光单位稀释度Log(倍数)RLULog（RLU）1.0×10-2-252977566.721.0×10-3-328780836.461.0×10-4-46065645.781.0×10-5-5738074.875.0×10-6-5.3351734.552.5×10-6-5.6194844.291.0×10-6-682073.911.0×10-7-711813.071.0×10-8-82872.461.0×10-9-91792.25中国消毒学杂志1001-7658（2008）03-0245-04y=1.3632x-11.538R2=0.9803-10-9-8-7-6-5-4-3-2-100.001.002.003.004.005.006.007.008.00relativelightunit(Log10)serialdilutionsofblood(Log10)血液稀释倍数对数值与RLU对数值的线性关系型号：BT-112D仪器灵敏度：10-18molatp用途：器械表面洁净度、微生物检测、水质检测等型号：PLUS仪器灵敏度：10-15molatp用途：物表洁净度及手卫生产品介绍微生物检测试剂盒表面、管腔采样器100ul水质采样器ATP技术检测的使用方法•1、取出拭子，涂抹器械表面（采样面积：按照管理规范的要求）•2、取样后放回试管、掰断阀芯•3、挤下试剂并振荡•4、放入仪器内检测•仪器检测时间5秒钟涂抹2掰断阀芯3挤入试剂5秒钟得到检测结果4中国疾病预防控制中心消毒所推荐使用此仪器评价医疗器械清洗效果的参考标准值为RLU≤2000如何使用ATP技术（1）低灵敏度仪器可用于重点科室的物表和手卫生监测–临床医务人员手卫生：–手频繁接触物表：各种设备操作表面、治疗车、床栏、床头柜、门把手、灯开关、水龙头等–低风险器械表面：如血压计袖带、听诊器等–使用科室：ICU、NICU、烧伤病房、感染病房、手术室、新生儿病房、移植病房、透析室、血液科食堂等如何使用ATP技术（3）高灵敏度荧光仪可用于：•器械清洗效果检测：管腔、内镜、外来器械重点监测；•清洗环节监测：酶洗、超声前后的对比建立标准化清洗流程；•水质检测：口腔科用水、血液透析、呼吸机湿化罐、医院水塔等•器械消毒效果检测：消化内镜、呼吸机管路等其他应用•灭菌器械风险评估•医用清洗剂评价•全自动清洗机的清洗评价•水处理设备环节监控•空气微生物检测（配合空气采样器）……..非管腔类器械1、采样时间：清洗后干燥的器械；2、采样面积：100cm2以上只采100cm2,100cm2除手持部位全采；3、采样：佩戴无菌的无粉手套、帽子、口罩，持器械手柄，从试管中取出采样拭子，在器械表面往返涂抹并转动拭子5次，（齿部、关节部、沟槽部可重点涂抹），将拭子放回试管；4、检测：掰断速流阀，挤下试剂，振荡15次，放入仪器检测。5、结果判定：RLU＜2000合格、RLU＜2000＜4000警告、RLU＞4000不合格采样要求某三甲医院重点科室物表冰箱把手2258使用中的尺子2171床把手1815使用中的听诊器1299暖箱窗口把手1057三通管路接头922护士站鼠标893使用中的电话725监护仪按钮667床尾遥控器522呼吸机面板458病历夹399操作台291手卫生（物表)洁净后标准≤30为合格30-100为警告100以上为不合格05001000150020002500冰箱把手使用中的尺子床把手使用中的听诊器暖箱窗口把手三通管路接头护士站鼠标使用中的电话监护仪按钮床尾遥控器呼吸机面板病历夹操作台系列1物表使用中检测标准≤100为合格100-300为警告300以上不合格第一次使用ATP荧光检测仪检测结果数值某三甲医院重点科室物表手卫生（物表)洁净后标准≤30为合格30-100为警告100以上为不合格物表使用中检测标准≤100为合格100-300为警告300以上不合格冰箱把手125使用中的尺子105床把手98使用中的听诊器87暖箱窗口把手79三通管路接头66护士站鼠标54使用中的电话48监护仪按钮35床尾遥控器29呼吸机面板25病历夹21操作台11020406080100120140冰箱把手使用中的尺子床把手使用中的听诊器暖箱窗口把手三通管路接头护士站鼠标使用中的电话监护仪按钮床尾遥控器呼吸机面板病历夹操作台系列1持续使用ATP荧光检测仪干预监督三个月后检测数值手卫生（物表)洁净后标准≤30为合格30-100为警告100以上为不合格物表使用中检测标准≤100为合格100-300为警告300以上不合格某三甲医院ICU感染病房采样部位数值培养结果6床病室内治疗台面11＜0.4cfu/cm2固定护理6床病人护士洗过的手11＜0.4cfu/cm26床床头桌台面562鲍曼不动杆菌、表皮葡萄球菌6床病人手指接触的电线312表皮葡萄球菌6床病人胸前擦拭的皮肤256表皮葡萄球菌6床病人使用心电监护仪按钮56＜0.4cfu/cm26床病人床尾48＜0.4cfu/cm26床病人被服6＜0.4cfu/cm2数值01002003004005006006床病室内治疗台面固定护理6床病人护士洗过的手6床床头桌台面6床病人手指接触的电线6床病人胸前擦拭的皮肤6床病人使用心电监护仪按钮6床病人床尾6床病人被服数值这是某医院ICU6号床物表检测的数值，培养出鲍曼，葡萄球菌的部位，ATP的检测数值非常的高，细菌培养物表合格的，ATP的数值很低。小结：特点1、全面的检测范围：ATP生物荧光检测技术可检测出残留在器械表面上的体细胞、细菌等污染物，可全面评价医疗器械清洗效果，是一种综合评价方法。2、现场快速检测：操作简单，手持机15秒，台式机5秒可得到检测结果，实时快捷。3、定量检测的模式：手持机RLU≤30，台式机RLU≤20004、检测项目：可以做洁净度检测，ATP含量和细菌计数。5、数字化的质量控制：可对清洗效果和操作环节进行质量控制，建立数字化控制体系。检查医院重点部门的污染状况和洁净状况；（手术室、新生儿病房、重症监护室、透析室、内镜室、病房、盥洗室等）广东省某医院临床实验使用2000RLU（相对发光值）对硬式腔镜的操作齿钳、钳柄管腔清洗过程和清洗效果的检测,及医疗器械、器具使用清洗机清洗前后的效果评价钳柄管腔清洗调查•取样面积4.66cm2，取样数量30。•分析1、30例钳柄管腔通过初洗、酶洗、风吹干燥或清洗干燥后ATP含量100%呈下降趋势2、以2000RUL作为合格标准，有28例通过，合格率93%3、超声清洗环节有14例样品ATP有升高现象，表示此超声清洗环节存在二次污染。4、使用本系统可找到清洗过程中的薄弱环节，提高工作效率。1号2号10号11号12号清洗前7223758792810426660213668184416176初洗后11264622474203052688931309酶擦冲水后20911693219713243390超声冲水后4355142023017185744460100000020000003000000400000050000001清洗前初洗后酶擦冲水后超声冲水后风吹干燥后清洗炉干燥后清洗机清洗医疗器械、器具前后的效果评价•取样部位:齿钳类取齿部和关节部位，弯盘等取内部所有部位，吸引器吸头取管腔内壁。•分析1、清洗干燥后ATP含量100%呈下降趋势。2、器械在清洗机中码放密度和码放方式直接影响清洗机的清洗效果。3、管腔类器械在清洗机中清洗效果不好，应使用专用的管腔类清洗设备，或上机前对管腔类器械预先清洗。1号2号3号4号5号………清洗前13278901925951342521365648906786579………清洗后18074678258067016987………020000040000060000080000010000001200000140000012清洗前后ATP含量明显下降系列1ATP生物荧光检测技术可全面评价医疗器械清洗效果•ATP生物荧光检测技术可检测出残留在器械表面上的体细胞、细菌等污染物，使清洗效果检测更加全面，是一种综合评价方法。•使用快捷方便，5秒钟可得到检测结果，操作过程不超过1分钟。•可定量检测清洗效果。（RLU≤2000）•可对清洗效果和操作环节进行质量控制，建立数字化关键点控制体系。•已列入即将颁布的国标“医用清洗剂”质量认定的国标方法。•在已经发布“医院消毒供应中心管理规范