药物分析复习总结

第二章药品质量控制与药物分析方法验证1.SOP（标准操作规程）2.QC（质量控制）3.GLP（药物非临床研究质量管理规范）（Laboratory）4.GCP（药物临床试验质量管理规范）（Clinical）5.GMP（药物生产质量管理规范）（Manufacture）6.系统误差（具有固定的正或负偏差）(方法误差；试剂误差；仪器误差；操作误差)偶然误差（不可定误差）7.RSD即变异系数（相对标准偏差）8.容量分析相对误差（RE）通常在0.2%以下；仪器分析法RE通常为2%~5%9.称量的误差应小于1%10.药典中API未规定含量百分数上限时，即不超过101.0%11.消除系统误差方法：回收试验、校准仪器、对照实验、空白试验（回收试验：考察分析方法能够对样品中被测物给予全量相应的能力验+证试验12.95%的置信区间用1.96σ值进行计算13.方法学验证参数：专属性；准确度（回收率）；精密度（RSD）；定量限；检测限；定量限；线性与范围14.称量时要多称一位，比如要称2.0g，则应称取1.95g~2.05g，而不是1.5g~2.5g15.精密称量指称取重量应准确至所取质量的千分之一16.热水指70~80度的水17.不管鉴别、杂质测定（定量、限度）、含量测定，都需要进行的方法学验证为“专属性”和“耐用性”18.常用化学试剂质量等级：化学纯、分析纯、试剂纯、优质纯19.分析方法验证的主要效能指标：准确度；精密度（重复性，中间精密度，重现性）；专属性；耐用性；线性和范围；检测限和定量限；20.测量不确定度的含义：是表征合理地赋予被测量值的分散性，与测量结果相联系的参数。21.药典附录包括“制剂通则”“通用检测方法”“指导原则”22.杂志检查一般为限度检查第三章样品的前处理和药物提取技术一、生物样品的采集（血浆、血清、全血；尿液；组织样品）血浆：加抗凝剂后，2500~3000r/min离心5~10分钟血清：静止凝固后，2500~3000r/min离心5~10分钟二、生物样品的预处理（目的；影响因素；有机破坏，除蛋白质，结合物的水解，化学衍生化，游离药物分析的样品前处理方法）目的：使药物从结合物中释放；防止杂质干扰；满足专属性；防止仪器污染影响因素：药物理化性质；浓度范围；测定目的；生物样品类型；预处理和分析技术预处理技术：1.有机破坏①.湿法破坏：硝酸-高氯酸（对含氮杂环药物的破坏不够完全）②.干法破坏：马福炉灰化法；低温等离子灰化法；氧瓶燃烧法（常用于卤素）2.除蛋白质①.加入与水相混溶的有机溶剂脱水②.加入中性盐盐析③.加入强酸生成不溶性盐④.加入重金属盐类沉淀剂⑤.加热3.结合物水解：水解法；酶解法；溶剂解法4.化学衍生化5.游离药物分析的样品前处理方法（常用于血液处理中）①.平衡透析法；②.超滤法还有超离心法和凝胶过滤法等三、提取分离及相关技术（液-液提取法；离子对提取法；固相萃取法；固相微萃取技术，微透析，柱切换）液-液提取法：水相的pH很重要，决定药物的存在状态；碱性药物最佳pH要高于pKa值1~2个单位；而酸性则要低于pKa值1~2个单位离子对：提取离子性药物的方法；添加呈相反电荷的反离子物质固相萃取法：即色谱；吸附分配离子交换；柱活化（反相柱需数毫升甲醇打破表面疏水层），加样，柱清洗，柱干燥，样品洗脱，SPE自动化（色谱联用）固相微萃取技术：样品量小，适于分析挥发性与非挥发性物质微透析：插入体内，不破坏生物体内环境柱切换：六通阀。。四、化学衍生化（目的；光谱分析法，色谱分析法）目的：易于分离；提高灵敏度；增强稳定性；提高对光学异构体分离能力光谱：紫外衍生；荧光衍生色谱：分子中含有活泼氢者都可被化学衍生化（硅烷化，酰化，烷基化）（增大非极性）第四章药物鉴别试验一、物理常数测定法1.相对密度（与水的密度之比）2.熔点3.比旋度=旋光度/(厚度*浓度)4.吸收系数（E1%1cm：1%溶液液层厚度为1cm的吸光度值）其它还有黏度、馏程、折光率、解离常数等二、化学鉴别法（颜色变化；沉淀生成；气体生成；荧光反应；制备衍生物熔点鉴别法）1.芳香第一胺反应（重氮化-耦合反应）：加稀HCl溶解，滴加少量NaNO2，再加b-萘酚，生成橙黄色到猩红色沉淀2.有机氟化物：氧瓶燃烧法有机破坏成无机氟化物，与茜素氟蓝、硝酸亚铈在pH=4.3的弱酸下生成蓝紫色配位化合物3.水杨酸盐：加FeCl3，显紫色；加稀盐酸，生成水杨酸沉淀（加乙酸铵成盐再次溶解）4.苯甲酸盐：加FeCl3，显赭色沉淀，加稀盐酸，变白色沉淀5.钠盐：焦锑酸钾反应，钠离子与焦锑酸钾作用生成难溶的沉淀（法二：焰色反应）6.钾盐：四苯硼钠反应，钠离子与四苯硼钠溶液反应生成白色沉淀（法二：焰色反应）7.铵盐：加过量NaOH加热，遇用水湿润的石蕊试纸，变蓝色（法二：气体使亚硝酸汞试液湿润的滤纸显黑色。法三：溶液加入碱性碘化汞钾产生红棕色沉淀）8.铁盐（亚铁）：滕氏蓝反应：滴加铁氰化钾，深蓝色沉淀，且沉淀在稀盐酸中不溶，在NaOH中变成红棕色氢氧化铁沉淀（法二：与邻二氮菲反应呈红棕色）9.铁盐（三价铁）：普鲁士蓝反应：滴加亚铁氰化钾，深蓝色沉淀，且沉淀在稀盐酸中不溶，在NaOH中变成红棕色氢氧化铁沉淀（法二：与硫氰酸铵反应呈血红色）10.硫酸盐：加氯化钡，沉淀（法二：加乙酸铅，沉淀，但在碱性下沉淀溶解）（加盐酸不沉淀，与硫代硫酸盐区分）11.硝酸盐：界面显色反应：加浓硫酸（成为硝酸），小心加入硫酸亚铁，密度不同形成界面，界面亚铁被氧化，产生棕色环状物（法二：酸性下与铜丝反应，加热，产生红棕色蒸气）（加高锰酸钾不反应，与亚硝酸盐区分）12.氯化盐：加AgNO3产生白色沉淀，加氨水后沉淀溶解（银氨配合物），加硝酸后沉淀再生成（法二：加二氧化锰氧化，生成氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色）13.乳酸盐：加溴水浴氧化（溴褪色），生成乙醛，再加亚硝基铁氰化钾，静置后界面处产生暗绿色的环14.枸橼酸盐：加高锰酸钾氧化（紫色退去），加硫酸汞（或溴），均产生白色沉淀（法二：加吡啶-醋酐，溶液变黄色到红色或紫红色的溶液）15.酒石酸盐：加硝酸银氧化（银被还原），产生银镜（法二：生成配合物，在乙酸溶液中，加入硫酸亚铁和过氧化氢，再加NaOH碱化，生成紫色配合物）16.巴比妥类：丙二酰脲反应17.托烷生物碱类：Vitaili反应三、光谱鉴别法1.紫外：方法：①.光谱特征参数：核定λmax；核定的λmax，λmin；核定λmax，λmin，及肩峰；核定一定浓度的λmax及吸光度（A）②.比较吸光度比值③.与对照品比较专属性较差，常与其他方法配合2.红外：（专属性最强）①.标准谱图对照法②.对照品对比法四、色谱鉴别法1.TLC（薄层色谱）系统适用性参数：检测灵敏度，比移值，分离效能与对照品比较Rf值；与相似结构物质比较Rf值不同2.HPLC系统适用性参数有：理论板数，分离度、重复性、拖尾因子与对照品比较保留时间（内标法时，对照品与内标的保留时间比值一致）3.GC用于挥发性药物含量测定五、晶型分析熔点测定法；热分析法；X衍射等六、鉴别的方法学验证（可见第二章，注意区分鉴别、杂质鉴定、含量分析的方法学验证）专属性、耐用性、检测限（而不是定量限！！！）1.仪器分析为主、化学分析为辅2.仪器分析首选IR、HPLC，其次是TLC、GC、DSC（其中IR尤为广泛，原料药与制剂多采用IR，制剂往往是萃取分离后的IR法）第五章杂质分析一、药物中的杂质和杂质限量1.化学试剂的纯度与药物的纯度不能互相替代2.杂质来源：生产过程中引入；贮藏过程中药物理化性质变化3.杂质分类：一般杂质、特殊杂质4.杂质限量：药物中所含杂质的最大允许量（杂质最大允许量占供试品总量的百分比）5.对于杂质的控制，一般进行限量检查，必要时对杂质进行定量测定6.限量检查法即不要求测定其准确含量，只需检查杂质是否超过限量（具体方法包括对照法，灵敏度法，比较法）①.对照法：被检杂质标准溶液与供试品比较，看供试品是否超过标准品②.灵敏度法：加入一定量的试剂，不得有阳性结果③.比较法：测定特定待检杂质的特征参数（如吸光度）与规定限量比较，不得更大二、药物中杂质的检查方法1.化学法①.产生沉淀：比浊法②.产生颜色：比色法③.产生气体：气体检查法2.光谱法①.紫外②.红外：主要用于药物中无效或低效晶型的检查（不同晶型属于不同药物）③.原子吸收光谱法3.色谱法①.TLC：杂质对照品法；供试品溶液自身稀释对照法；杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用（多种杂质，有对照品用对照品，没对照品自身稀释）；母体药物对照法②.HPLC：外标法；自身稀释对照法（又分加校正因子的和不加校正因子的，加校正因子的有杂质对照，但已经计算出校正因子，所以实际操作时不需要再用对照品，而不加校正因子的纯粹只是因为没有杂质对照品）；面积归一化法（粗略考察杂质含量，在各杂质均有较强吸收波长作为检测波长）③.GC：在HPLC四个方法基础上，还有一个“标准溶液加入法”（加入定量标准溶液，看变化，也可以加入不同量画图反推）④.毛细管电泳法4.热分析法①.热重分析TGA：质量随温度增加变化（结晶水）②.差热分析DTA：试样与参比随温度增加，本身温度的变化情况（试样会脱水吸热）（吸热峰向下）③.差示扫描量热法DSC：试样与参比随温度变化，保持相同温度外界所需提供能量差异（可以保持与参比温度相同，比DTA更好的控制变量）药物与杂质的低共融行为是DSC测定纯度的基础，杂质的存在使药物的熔点下降，并使熔融曲线变宽，可通过方程计算出杂质含量中国药典对恒重的定义是：连续两次干燥或炽灼的重量差小于0.3mg。5.示例①.氯化物：生成AgCl，纳氏比色法，限量：10ug/ml②.硫酸盐：生成BaSO4，纳氏比色法，限量：100ug/ml③.铁盐：与SCN-反应溶液变红色，纳氏比色法，限量：10ug/ml④.重金属：基本原理：生成硫化物，与重金属沉淀，限量：10ug/ml具体分为：硫代乙酰胺法（易溶于水）；炽灼后的硫代乙酰胺法（难溶于水）；硫化钠法（溶于碱水）硫代乙酰胺在弱酸性条件下水解，产生硫化氢与重金属生成混悬液⑤.砷盐：基本原理：锌与酸反应生成氢气，砷盐与氢气反应产生砷化氢，限量：1ug/ml古蔡法：砷化氢与溴化汞试纸反应（注意点：加入KI和氯化亚锡，可将五价砷还原为三价砷，加快反应；此外KI和氯化亚锡还可以抑制碲化氢生成；第三，氯化亚锡可与锌作用，表面形成原电池，使氢气均匀连续产生；第四：反应时，醋酸铅棉花是为了吸收多余的H2S，防止干扰实验；第五，环状有机药物在反应前要先有机破坏；第六，含锑药物可改用“白田道夫法”）Ag（DDC）法：砷化氢与Ag（DDC）反应生成红色胶态银⑥.酸碱滴定法⑦.残留溶剂检查：GC法色谱柱可采用“直接进样法”与“顶空进样法”（等温与升温；等温用于有机溶剂少且极性相差不大；升温用于有机溶剂多且极性相差较大）（检测器常用FID火焰离子化检测器，含卤素药物用ECE检测器）理论塔板数应大于5000/柱，分离度大于1.5，内标法：待测物比内标峰面积比的RSD不超过5%，外标法：待测物峰面积RSD不超过10%.三、降解物与杂质的分离与鉴定杂志结构鉴定常用：杂质对照品法；分离制备杂质样品法；两者结合法（多种杂质）四、杂质分析方法验证专属性，准确性，线性与范围，灵敏度第六章药物的含量测定一、概述含量测定：能用理化方法测定效价测定：只能用生物学方法（包括生物检定和微生物检定）或酶学方法测定药物效价的对原料药含量测定方法选择强调结果的“精密度”对制剂的含量测定方法偏重于方法的“选择性”（因为存在辅料等杂质）API以百分含量表示，一般换算成干燥品的含量二、容量分析法（滴定分析）1.优缺点：耐用性好、精密度高；但取样量大，专属性差2.分类：可分为直接滴定法和间接滴定法（剩余滴定法、置换滴定法）3.滴定度：1ml滴定液能滴定待测物的质量mg，单位为mg/ml4.直接滴定法：样品百分数=V*F*T/m5.剩余滴定法：样品百分数=(V0-V)*F*T/m6.滴定液的校正因子F=基准物质实际称量质量/基准物质滴定