第4章消毒灭菌

第4章消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全Disinfection、Sterilizationandbiosecurityoflaboratory灭菌(sterilization)：Theprocessofdestroyingallmicrobialforms.Asterileobjectisfreeofallmicrobialforms,includingbacterialspores.用理化方法杀灭物体上所有微生物的方法。(包括杀灭病原微生物和非病原微生物、细菌的繁殖体和芽胞)要求比消毒高。概念：消毒(disinfection)：Thereductionoreliminationofpathogenicmicroorganismsinoronmaterials,sotheyarenolongerahealthhazard.用理化方法杀死物体上病原微生物的方法,称为消毒。(不一定能杀死含芽胞的细菌和非病原微生物).用于消毒的化学药物称为消毒剂(disinfectant)。消毒剂在常用浓度下只对繁殖体有效，对芽胞需提高浓度和作用时间。防腐(antisepsis)：Useofchemicalagentsonskinorotherlivingtissuetoinhibitoreliminatemicrobes;nosporicidalactionisimplied.利用理化因素抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药物在高浓度时为消毒剂，低浓度时为防腐剂。抑菌（bacteriostasis）：抑制体内或体外细菌繁殖。抗生素等为常用的抑菌剂。无菌(asepsis)：Nolivingmicroorganismsexists.无菌操作(antiseptictechnique)：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。清洁(cleaning)：通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。第二节消毒灭菌的方法一、物理消毒灭菌法（一）热力灭菌法（二）辐射杀菌法（三）滤过除菌法（四）干燥与低温抑菌法二、化学消毒灭菌法(一)热力灭菌法HighTemperature原理：高温杀灭细菌无芽胞细菌经55℃-60℃作用30-60分钟死亡;湿热80℃经5-6分钟可杀灭所有细菌繁殖体、真菌和酵母菌。干热灭菌法Dryheat湿热灭菌法Moistheat1.干热灭菌法dryheatsterilizationA.原理:脱水干燥和大分子变性。B.方法:⑴焚烧：废弃物、尸体;⑵烧灼:接种环和试管口的灭菌;⑶干烤:烤箱灭菌;171℃,1h;160℃,2h;121℃,16h适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品,例玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器等的灭菌。(4)微波：高频电磁波，热效应和综合效应，用于食品和药品的消毒。(5)红外线：0.7-1000μm电磁波，1-10μm热效应强；照射表面灭菌，不能使物体均匀加热，医疗器械灭菌.2.湿热灭菌法moistheatsterilizationA．巴氏消毒法(pasteurization)：法国巴斯德创用⑴61.1-62.8℃，30分钟；⑵71.7℃15-30秒主要用于牛乳消毒。B.煮沸法:100℃5min(繁殖体)~2h(芽胞)2%碳酸氢钠食具、刀剪、镊子C.流动蒸气灭菌法:又称常压蒸气灭菌法,水蒸汽100℃15~30min(繁殖体)D.间歇蒸气灭菌法:Arnold(阿诺氏灭菌器)此法用于不耐高热的含糖、牛奶等培养基的消毒。E.高压蒸气灭菌法（autoclaving）:最有效的一种灭菌方法1.05kg/cm2(15磅)、121.3℃，15-20分钟。用于一般培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温耐湿等物品的灭菌。高压蒸汽灭菌器湿热灭菌与干热灭菌的比较同一温度下，湿热灭菌比干热灭菌效果好原因1、湿热中细菌菌体蛋白较易凝固2、湿热的穿透力比干热大3、湿热的蒸汽有潜热物理消毒灭菌法（二）辐射杀菌法紫外线波长240~300m的紫外线具有杀菌作用杀菌机理：干扰DNA的复制与转录紫外线穿透力较弱不耐热物品的表面消毒特点：应用范围：空气消毒手术室、传染病房、细菌实验室电离辐射包括高速电子、β射线和γ射线杀菌机理应用范围一次性医用塑料制品的消毒食品的消毒不破坏其营养成分干扰DNA合成、破坏细胞膜、引起酶系统紊乱等三、滤过除菌滤过除菌是利用物理阻留和静电吸附等原理除去液体或空气中的微生物，以达到无菌目的。主要用于不耐高温的血清、毒素和抗生素等空气除菌采用生物洁净技术滤器和层流室四、干燥及低温抑菌法干燥主要用于保存食物。大多数细菌耐低温，在低温状态下，这些细菌的新陈代谢减慢，故低温常用于保存细菌菌种。冷冻真空干燥法是目前保存菌种的最好方法，一般可保存微生物数年至数十年。第二节化学消毒灭菌法一、化学消毒剂作用机制1.使菌体蛋白变性或凝固：醇类、醛类、酚类等；2.干扰细菌酶的活性：重金属盐类结合-SH基；3.损害细胞膜的结构：脂溶剂、表面活性剂等。化学消毒剂按其杀菌能力可分为三大类：高效消毒剂（high-leveldisinfectants）中效消毒剂（intermediate-leveldisinfectants）低效消毒剂（low-leveldisinfectants）二、消毒剂的种类及其应用杀灭包括芽胞在内的所有微生物，适用于不耐热力灭菌但要进入人体内部的物品（如内窥镜等）。含氯消毒剂次氯酸钠、二氯异氰酸尿酸钠和漂白粉等。过氧化物消毒剂环氧乙烷醛类消毒剂过氧化氢和过氧乙酸等（过氧乙酸杀菌力强，对多种细菌、病毒有效）戊二醛和甲醛等(有强大杀菌能力，主要采用熏蒸消毒)不能杀灭细菌芽胞，但能杀灭细菌繁殖体（包括结核分枝杆菌）、真菌和大多数病毒，适用于纤维内窥镜、喉镜、阴道窥器等。含碘消毒剂醇类消毒剂碘酊和碘伏乙醇和异丙醇(70%～75%乙醇/50%～80%异丙醇杀菌力最强)可杀灭多数细菌繁殖体，但不能杀灭细菌芽胞、结核分枝杆菌及某些抵抗力较强的真菌和病毒。氯已定（洗必泰）苯扎溴胺（新洁尔灭）高锰酸钾、重金属盐及染料等表面活性剂消毒灭菌的应用：1、医疗器械物品；2、病人排泄物与分泌物：20%漂白粉：5%石碳酸（2%来苏）=1：13、皮肤：2.5%碘酊、70%乙醇等。4、黏膜：口腔消毒3%过氧化氢溶液，冲刷尿道阴道1g/L高锰酸钾。4、厕所阴沟：生石灰（Ca(OH)2）5、空气：紫外线；甲醛熏蒸；乙肝病房用过氧乙酸熏蒸。6、手：流水冲洗和肥皂。一、微生物的种类和数量真菌、细菌繁殖体、（有包膜、无包膜）病毒、分枝杆菌、芽胞二、消毒剂性质、浓度与作用时间如表面活性剂G+;过氧乙酸病毒三、环境因素温度：一般温度升高可提高消毒效果，如甲醛、戊二醛和环氧乙烷在温度升高1倍时杀菌效果可增加10倍。酸碱度戊二醛+碳酸氢钠可杀芽孢有机物影响消毒灭菌效果的因素第五节病原微生物实验室生物安全一、病原微生物的分类根据传染性、感染后对个体或者群体的危害程度，病原微生物分为四类：第二类：能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。包括高致病性禽流感病毒、艾滋病毒能、狂犬病病毒、SARS冠状病毒等70种。第一类：能够引起人类或者动物非常严重疾病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消灭的微生物。包括天花病毒、埃博拉病毒等29种病原体。第三类：能够引起人或动物疾病，但一般情况下对人、动物或环境不构成严重危害，传播风险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且具备有效治疗和预防措施的微生物。包括：各型肝炎病毒、疱疹病毒、流行性感冒病毒、破伤风梭菌等275种。第四类：在通常情况下不会引起人或动物疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一类、第二类统称为高致病性病原微生物。二、病原微生物实验室的分级级别处理对象一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成人、动植物致病的致病因子。二级对人体、动植物或环境具有中等危害或具有潜在危险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有预防治疗措施。四级对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因子。没有预防治疗措施。生物安全