菠菜中草酸的测定

肀菠菜中草酸的提取及含量测定膇一、实验目的螄1.学会沉淀法提取操作，进一步熟悉过滤，离心，提取等操作，掌握均匀沉淀法的原理。薂2.学习文献资料的查询方法，学会制作实验方案，综合运用各种分析方法解决实际问题。衿3.学习食品采样方法，综合分析菠菜中草酸的含量分布情况。芇二、实验原理膅草酸是一种二元羧酸，是植物体内普遍存在的一种组分，在菠菜、苋菜、生菜等许多蔬菜作物体内都有较高的含量。从环境毒理学和食品营养学角度看，草酸在蔬菜作物可食部位的大量累积会影响到人类的身体健康。聿本实验采取灵敏度较高的比色法测菠菜中草酸含量。采用722型分光光度计测定，Fe在pH值1.8~2.5的KCL-HCL缓冲液中与磺基水杨酸（SSAL）和草酸均生成络合物，Fe3+和草酸的络合物能使与Fe3+磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，测定Fe3+的磺基水杨酸络合物的吸光度，随着草酸量的增加而降低，据此可计出样品中草酸根的含量。蚇三、仪器和试剂莇仪器部分：榨汁机，722型分光光度计，水浴锅，电子天平，台秤，100mL容量瓶3个，250mL容量瓶4个，200mL烧杯2个，500mL烧杯2个，离心机及离心管，长颈漏斗，铁架台，滤纸。莁试剂部分：新鲜菠菜，磺基水杨酸（分析纯）（s），FeCL(s)，草酸钠（s），KCL（s），12mol/L浓盐酸，0.5mol/L稀盐酸，去离子水，pH试纸。螁四、实验步骤莆1.铁标准液的制备（0.5mg/mL）：称取0.4gFeCl3于500mL烧杯中，加入250mL去离子水溶解。蒇2.磺基水杨酸（SSAL）的配制（0.5%）：称取0.5g磺基水杨酸（分析纯）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。螂3.草酸钠标准液的配制（2mg/mL）：称取0.2000g草酸钠于200mL烧杯中，加入去离子水，稍加热，使其溶解，移入100mL容量中，用去离子水定容。腿4.缓冲液的配制（pH值2）：称取3.7g左右KCL于500mL烧杯中，加入去离子水少量，在水浴锅上微热溶解，加12mol/L浓盐酸用pH试纸使pH值为2，移入250mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。葿5.草酸的待测液制备：将菠菜在去离子水中洗涤2次，晾干。称取菠菜可食部位100g，加入100ml水，压榨2—3min，每2g匀浆折算为1g试样，称取1份匀浆50g，用100mL水洗入250mL容量瓶，加入0.5mL浓度为0.5mol/L的HCL溶液，澄清，置于70~80度水浴上加热30min，其间摇动数次，取出冷却，加水至刻度，摇匀过滤，将滤液经10000r/min离心10min，得到的即是草酸待测液。薇6.比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究膃该最大吸收波长即为测定时所要选择的最佳波长508nm。袁标准曲线的制作按照以上确定的条件，按下列顺序：膈加液：2mLFe3+，20mL缓冲液，1.2mL磺基水杨酸，从容量瓶中依次取出已经配制的草酸钠溶液体积为：0、0.1、0.2、0.4、0.8mL，再用蒸馏水定容至100mL容量瓶中，显色30min后，以蒸馏水为参比液，在508nm波长处进行比色测定。根据测定结果，绘制草酸含量的标准曲线，通过计算机拟合，获得该标准曲线A关于x的方程。其中式中，x为显色体系的草酸的质量浓度（mg/mL），A为吸光度。薆7.菠菜中的待测液中草酸含量的测定：薄用菠菜待测液替代草酸根溶液，依次取0，0.2,0.4,0.6mL用蒸馏水定容至100mL容量瓶中。显色30min后，以蒸馏水为参比液，在510nm波长处进行比色测定，其余按照制作标准曲线同样的方法，进行显色反应，并测定其吸光度，填入表下中。根据标准曲线方程，计算待测液中草酸含量。荿波长（nm）羇508蚆508蚁508肁508螆菠菜待测液体积（mL）螆0.00肂0.20蕿0.40蝿0.60袆吸光度五、注意事项：1．比色实验的选择：在显色30min后进行比较合适。2．在比色测定时，都是要以蒸馏水为参比溶液注意不能用1号溶液作为参比。3．加液时要按顺序加入，分光光度计使用之前要预热。4．用标准曲线法测草酸含量时注意草酸的浓度要在限行范围内。5．要使吸光度控制在0.05至0.8，这样才能提高准确度。6．为了使草酸提取完全，应将菠菜的榨汁在70—80℃下水浴加热。组长:龚晓雪组员:郝哲语桂珍珍桂亮以下无正文仅供个人用于学习、研究；不得用于商业用途。толькодлялюдей,которыеиспользуютсядляобучения,исследованийинедолжныиспользоватьсявкоммерческихцелях.Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.NurfürdenpersönlichenfürStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'étudeetlarechercheuniquementàdesfinspersonnelles;pasàdesfinscommerciales.