药物分析 第十四章 维生素类药物的分析

第十四章维生素类药物的分析概述维生素维持正常生理功能所必需的、微量营养物质，人体不能合成维生素。必须从外界食物中摄取。维生素的发现是20世纪的伟大发现之一。1897年,C.艾克曼在爪哇发现只吃精磨的白米即可患脚气病，未经碾磨的糙米能治疗这种病。并发现可治脚气病的物质能用水或酒精提取,当时称这种物质为“水溶性B”。ChristiaanEijkman1929诺贝尔生物医学奖TheDiscoveryofVitamin发现简史公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。1831年-胡萝卜素被发现。195年-科学家认糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的1916年-维生素B被分离出来。1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。1922年-维E被发现1933年-维E首次用于治疗必需维生素13种维生素A，维生素B，维生素C，维生素D，维生素E，维生素K，维生素H（生物素），维生素P，维生素PP，维生素M，维生素T，维生素U，水溶性维生素。分类维生素水溶性VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸（VitM）、烟酸、烟酰胺（VitPP）脂溶性VitA、D2、D3、E、K1等AB1CDEVitaminsContents维生素A的简介是鱼类肝脏中提取的一种不饱和脂肪醇，又称鱼肝油。目前主要采用人工合成。在体内以视黄醇的形式储存，缺乏会影响视色素的合成，导致夜盲症，视力减退。全反式结构共轭多烯醇侧链的环己烯黄色棱形，62-64℃淡黄色棱形，57-58℃无定型，28-29℃去氢维生素VitA2去水维生素VitA3易发生脱氢、脱水、聚合反应CH3CH2OHCH3H3CCH3CH3123456789123456789CH3H3CCH3CH3CH3CH2溶解性:与三氯甲烷、乙醚、环已烷或石油醚能任意混合，在乙醇中微溶，在水中不溶。不稳定性：含有多个不饱和键，性质不稳定，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解，特别是在加热和金属离子存在时更易氧化变质从而失活。酸醛环氧化物、氧化剂紫外线、VitAVitAVitA]O[O2性质△或有金属离子存在时氧化↑临床使用时成酯后，溶于植物油中；阴凉干燥处保存，还需加入N2或一定抗氧剂提高稳定性。紫外吸收：共轭多烯醇侧链结构，在325-328nm之间有最大吸收，可用于鉴别。CH3CH2ORCH3H3CCH3CH3123456789λmax相对生物效价顺反异构维生素A325.5100%全反式新维生素Aa32875%2－顺新维生素Ab320.524%4－顺新维生素Ac310.515%2，4－顺异维生素Aa32321%6－顺异维生素Ab32424%2，6－顺天然维生素A主要是反式紫红蓝色3SbClVitACHCl3可用于鉴别和含量测定与三氯化锑呈色:三氯甲烷+三氯化锑=不稳定的蓝色与三氯化锑呈色反应三氯甲烷三氯化锑不稳定的蓝色鉴别实验VitASbCl3CHCl3(无水无醇)蓝色紫红色（一）Carr-Price反应-RCOOSbCl5+CH2蓝色紫红+CH2-RCOOSbCl5条件：无水、无醇SbCl3水SbOCl乙醇可使碳正离子的正电荷消失要求仪器和试剂必须干燥无水，三氯甲烷必须无醇VitAVitAHCl去水△无水乙醇λmax为326nm一个吸收峰λmax为350～390nm三个吸收峰CH3CH2ORCH3H3CCH3CH3123456789CH2五个共轭双键六个共轭双键最大吸收峰红移（二）UV法维生素A在无水乙醇溶液中溶解,立即进行UV扫描,在360nm处有一最大吸收峰.当盐酸水浴加热30s,迅速冷却,此过程发生脱水反应,扫描时出现三个吸收峰USP显色剂磷钼酸规定斑点颜色和Rf值BP对照品法显色剂三氯化锑（三）TLC法展开剂：环己烷-乙醚（80：20）均显蓝色斑点，维生素醇（Rf=0.1）维生素醋酸酯（Rf=0.45）维生素棕榈酸酯（Rf=0.7）酸值取乙醇与乙醚各15ml，置锥形瓶中，加酚酞指示剂5滴，滴加氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）至显粉红色，再加本品2.0g，振摇使溶解，用氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）滴定，酸值应不大于2.0（附录VIIH）杂质检查过氧化值取本品1.0g，加冰醋酸-三氯甲烷（6:4）30ml，振摇使溶解，加碘化钾的饱和溶液1ml，振摇1分钟，加水100ml与淀粉指示液1ml，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定至紫蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。消耗硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）不得过1.5ml。杂质检查维生素A的测定CHP收载三种UVHPLC三氯化锑法含量测定（一）UV法（三点校正法）维生素A在325~328nm的波长范围内有最大吸收，可用紫外法进行含量测定但维生素A原料常混有杂质如：杂质的吸收•对维生素A有影响的杂质主要有以下几种：•(1)VA2(345~350nm)和VA3•(2)维生素A的氧化产物•(3)维生素A在光照下产生的无活性的聚合物•(4)维生素A的异构体等。•以上这些杂质在310nm-340nm的波长范围内有吸收，干扰维生素A的测定。维生素A的氧化产物维生素A在光照下产生的无活性的聚合物1.三点校正法•即在三个波长处测得吸光度，在规定条件下以校正公式进行校正，再进行计算，消除干扰，求得维生素A的真实含量。2.测定原理•杂质的吸收在310~340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小；•物质对光的吸收具有加和性。3.波长的选择•1VitA的max（如VitA酯328nm）•23分别在1的两侧各选一点测定对象：VitA醋酸酯时，ChP2015规定nmnmnmnm12340,316,328321第一法等波长差法2113第二法等吸收比法13276AAA测定对象：VitA醇时，ChP2015规定nmnmnm334,310,325321合成的或天然的维生素A均为酯式维生素A，根据供试品中干扰杂质的多少，可采用：（1）直接测定法（2）皂化法求求效价)(%cm1样lCAcm(%)%)(1样（1）基本步骤换算因数）效价（样样%)(cm1)(Eg/IU4.测定方法A选择，A328测定或A328校正求标示百分含量（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定）1）方法取样品适量，精密称定，加环己烷溶解在300、316、328、340、360nm测吸收度，以确定最大吸收波长（A328或A328校正）。b.判断法最大吸收波长在326-329nm之间，且5个波长下的绝对值差值均不超过0.02时，可直接用328nm波长处的测得的吸收度值求得吸收系数。a.计算吸收度比值（Ai/A328）：与中国药典的吸收度比值相比较，判断每个差值的绝对值是否超过0.02。最大吸收波长在326-329nm之间，计算5个波长下的绝对差值，如果有一个或几个超过0.02，应按以下的方法进行判断：A328校正=3.52（2A328–A316-A340）（1）第一法（直接测定法，适用于纯度高的维生素A醋酸酯的测定）1）方法取样品适量，精密称定，加环己烷溶解在300、316、328、340、360nm测吸收度，确定A2）计算a.吸光系数E1%1cmb.求效价（IU/g）：效价指每g供试品所含维生素的A的国际单位数。1IU=0.344μg全反式维生素A醋酸酯换算因子1%1cmEIU/g=%),(1max/纯）效价（换算因子＝cmEgIU每克纯品相当多少个单位（IU）?1IU=0.344μg全反式维生素A醋酸酯2907000g344.0g101g/IU6）效价（15302907000/%)(1纯）效价（换算因子＝cmEgIU1900醇维生素Ag300.0IU13330000g300.0g101g/IU6）效价（18203330000/%)(1纯）效价（换算因子＝cmEgIU1830c.求维生素A占标示量的百分含量100%L100WWDA%标示量换算因子）标示量（A—A328或A328校正D——供试品的稀释倍数换算因子——维生素A醋酸酯在环己烷中1900；维生素A醇在异丙醇中1830W为平均内容物重量；W为称取内容物重量（供试品取用量）L—比色池厚度标示量为处方中规定的每粒中所含的国际单位数VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物0.2399g至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并在下列波长处测得吸收度为A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299求本品中维生素A的含量？A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.833A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299+0.01－0.010+0.02+0.04605.0523.0561.0628.0252.3252.3340316328328AAAA校正－－－－－=====%)3~%15(%7.3%100328328)(328AAAf校正%0.99%1001000008262.010020125022399.01900605.0%100)ml100/g(C1900A%328标示量平均丸重标示量校正适用于维生素A醇（等吸收比法）第一法无法消除杂质干扰时用此法[皂化法、6/7A法]（2）第二法iKOHAnmmlIUVitAVitAS处测、、、于～稀释至溶解异丙醇除去植物油的干扰甘油和脂肪酸盐植物油醇醋酸酯皂化液挥干乙醚乙醚提取乙醇334325310300/159/水溶性脂溶性•判断max是否在323～327nm之间取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定•计算325300AA是否•判断A300/A325是否大于0.73是否取未皂化样品采用色谱法纯化后再测定•计算A325(校正)334310325325260455528156A.A.A.A校正%100AAAf325325)(325校正03%－3%校正325A325A校正325Af高效液相色谱法流动相：正己烷－异丙醇（997︰3）检测波长：325nm系统适用性实验考察分离度——是否能将维生素A醋酸酯顺式和反式分开三氯化锑比色法蓝色3SbClVitAλmax618nm～620nm标准曲线法SbOClSbClOH32缺点：呈色不稳定（5~10s内）水分干扰与标准曲线温差≤1℃专属性差三氯化锑有腐蚀性优点：简便快速小结维生素A—共轭多烯醇侧链的环乙烯性质：脂溶性；不稳定，可与三氯化锑呈色鉴别：三氯化锑反应；UV；TLC含量测定：紫外-分光光度法（三点校正）三氯化锑比色法AB1CDEVitaminsContents维生素B1广泛分布于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。主要用于治疗维生素B1缺乏症、多发性神经炎及胃肠疾病。NNNH2CH2NSCH3OHH3C12345123456Cl,HCl氨基嘧啶环噻唑环亚甲基氯化4-甲基-3[(2-甲基-4-氨基-5-嘧啶基)甲基]-5-（2-羟基乙基）噻唑鎓盐酸盐结构与性质维生素B1（盐酸硫胺）第二节维生素B1的分析结构与性质